原发胃癌中p15、p16基因蛋白的表达及临床意义

　　作者：高云升 作者单位：盖州市中心医院普通外科,辽宁 盖州 115200

　　【摘要】 目的 检测原发胃癌原发灶及癌旁正常组织中p15、p16基因蛋白表达情况,探讨p15、p16基因失活与胃癌发生发展及临床病理特征的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测32例进展期胃癌石蜡标本中p15、p16 的表达，并探讨其表达与临床病理特征之间的关系。结果 p16、p15 在原发灶与癌旁正常组织中阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)，p15、p16 基因表达在有无淋巴结转移和不同TNM分期的病例之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 p15、p16 蛋白表达可能与胃癌癌变过程相关,并可以作为临床治疗提供理论依据。

　　【关键词】 胃肿瘤 免疫组织化学 p15 p16

　　The Clinical Significance and Expression of p15 as

　　Well as p16 in Primary Gastric CancerGAO Yun-sheng

　　(Department of General Surgery, Gaizhou Central Hospital, Gaizhou 115200 China)【Abstract】 Objective To test the expression of p15 and p16 in primary gastric cancer and its normal tissue and to discuss the relation between the genetic losing activity of p15 together with p16 and the development of gastric cancer as well as the features of clinical pathology. Methods 32 cases of the expression of p15 and p16 in samples of paraffin wax of gastric cancer were tested by immunohistochemistry method and tried to discuss the relationship between the expression of p15 and p16 and the features of clinical pathology. Results It had the significance in terms of statistics in the difference in positive expression rates of p15 and p16 in primary gastric carcinoma and normal tissue of adjacent to cancer (P<0.05) as well as the difference between the cases with lymphnode metastasis or not and different clinical pathological stages (P<0.05). Conclusions The protein expression of p15 and p16 may be related to the cancerization of gastric cancer, and it can be used for providing the theoretical evidence as the clinical treatment.

　　【Key words】 gastric carcinoma;immunohistochemistry;p15; p16

　　国内外研究提示,胃癌的发生发展是一个多基因共同参与的多突变的过程。但具体的癌变机制目前尚不完全明确[1]。p16、p15 定位于人第九号染色体21区域。其为细胞周期的负性调节因子,阻止细胞进入S期,故可能在肿瘤的发生发展中起重要作用[2]。本研究采用免疫组织化学方法,检测32例原发胃癌原发灶与癌旁正常组织中胃癌p15、p16基因蛋白表达情况，旨在探讨p15、p16基因失活与胃癌发生发展及与临床病理特征的关系，为胃癌的治疗提供理论依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 临床资料

　　收集盖州市中心医院2005年8月至2007年5月收治并行手术治疗的32例胃癌患者胃癌组织及癌旁正常组织标本。其中男18例、女14例，平均年龄(51±6.32)岁，(35～78岁)。TNM 分期: Ⅰ期6例，Ⅱ期12 例，Ⅲ期10例，Ⅳ期4 例。所有入组患者术前均未进行化疗、放疗及生物治疗。

　　1.2 方法

　　兔抗人p15多克隆抗体购自美国Santa Cruz 公司、兔抗人p16 多克隆抗体购自北京莱博生物试验材料研究所、SP免疫组化试剂盒购自上海麦莎生物科技有限公司。采用链霉素生物素- 过氧化物酶，常规切片脱水，石蜡包埋。行4～5μm切片后，二甲苯脱蜡、水化，微波抗原修复,山羊血清封闭间质反应。加Ⅰ抗、Ⅱ抗后酶标SP、DAB 显色，苏木素复染后脱水、封固、镜检。

　　1.3 结果判断

　　p16表达为细胞质棕黄着色，p15表达为胞核或胞质棕黄着色。结果判断中，小于25%的细胞着色为阴性,大于25%的细胞着色为阳性。

　　1.4 统计学方法

　　数据差异比较用χ2检验,P<0.05认为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　2.1 p16、p15的表达

　　32例胃癌标本p15 阳性表达的病例,原发灶为11例(34.38%),癌旁组织为25例(78.13%)，两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。p16 阳性表达的病例，原发灶为8例(25.00%),癌旁组织为22例(68.75%),两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。

　　2.2 p16、p15表达与胃癌临床病理特征的关系

　　见表1。

　　表1 胃癌原发灶与癌旁正常组织p15、p16基因表达水平比较 临床病理特征例数p15例数χ2Pp16例数χ2P年龄≤602070.010.9250.001.00>601243癌灶数单发2883.340.0761.520.22多发432淋巴结转移有1485.720.0264.230.04无1832组织类型分化1571.890.1777.070.01未分化1741TNM分期Ⅰ、Ⅱ 期19106.910.01 73.500.07Ⅲ、Ⅳ期1311

　　3 讨 论

　　恶性肿瘤发生机制为遗传学和表遗传学共同作用的结果，p15、p16基因的突变或缺失可能在胃癌的发生及发展中起一定的作用[1，2]110-119,224-228。目前研究提示，p16 基因在原发性肿瘤中虽然检不出突变，但存在不表达，检测p16 有无缺失表达对胃癌早期诊断具有一定意义[3，4]560-564,4646-4654。而p15基因的缺失机制在这些恶性瘤中还没有定论。

　　从表遗传学角度，基因的甲基化导致其相应蛋白的表达缺失被认为是散在发生的恶性肿瘤出现的主要机制。这些突变可以被药物逆转，所以研究p15、p16基因表达缺失机制对胃癌治疗有一定意义。p15 基因启动子区高甲基化可使p15 基因失活，原发胃癌的p15 基因及其甲基化的异常集中在低分化胃癌。p16 基因失活与5' 端启动子区域CpG 岛异常甲基化密切相关[5-7]。近年来，国内外许多研究表明，不管是原发性胃癌组织还是胃癌细胞系，不管采取何种方法均发现了较高的p16 基因异常甲基化率，而非肿瘤组织中则没有或是出现极低的甲基化[2，3，7]224-228,560-564,2033-2040。

　　本实验对32例胃癌原发灶与癌旁正常组织中p15、p16的表达情况进行了探讨。结果提示，原发灶p15、p16 基因表达率明显低于癌旁正常组织，且差异均有统计学意义。p15、p16 基因表达在有无淋巴结转移和不同TNM分期的病例之间差异均有统计学意义。不同组织学类型中p16表达差异有统计学意义，而p15的表达差异无统计学意义，可能与本扬就让本量有限有关。所以本研究结果提示，p15、p16的表达缺失在胃癌的发生发展中均具有一定的作用，可以为胃癌的早期诊断和判断预后提供理论依据。

　　【参考文献】

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