iNOS在肝细胞癌组织中的表达及其临床意义
发表时间：2010-08-27 浏览次数：441次
作者：赵景山 作者单位：长春市人民医院普外科，吉林 长春 130021
【关键词】 肝细胞癌 iNOS
肝细胞癌(HCC)是我国常见恶性肿瘤之一，其死亡率占消化系统恶性肿瘤第3位。它的发生、发展是多种癌相关基因协同作用的结果。一氧化氮(NO)是体内重要的生物活性分子和信号分子，它作为血管扩张因子、神经递质、抗微生物效应分子和免疫调节剂具有多种生理和病理功能。诱导型一氧化氮合酶(iNOS)主要在病理情况下，如炎症和肿瘤诱导下生成NO，参与血管生成、肿瘤的发生和发展等过程〔1〕。本研究通过检测HCC癌组织中的iNOS的表达情况及其与临床生物学特点之间的关系，探讨iNOS与HCC的关系。
1 材料与方法
1.1 研究对象
收集了我院2003年3月～2008年1月普外科住院病例60例，其中男45例，女15例，年龄35～86(平均67)岁。全部病例均由组织学病理确诊。按UICC(1997)分期,Ⅰ期5例,Ⅱ期12例,Ⅲ期25例, Ⅳ期18例。所有患者术前均未行放化疗，随访时间为8～24个月。选取同期我院病理科正常肝组织7例(4例肝脏外伤，3例肝脏血管瘤)作为正常对照。所有组织均经10%福尔马林溶液固定后石蜡包埋。
1.2 方法
iNOS兔抗人单克隆抗体和免疫组化(SABC法)试剂盒均为美国California Biotech Inc产品。免疫组化方法按试剂盒说明书操作：石蜡包埋组织切片4 μm，60℃烤箱中过夜，二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，过氧化物酶阻断剂(0.3%过氧化氢甲醇) 处理10 min，以去除内源性过氧化物酶，正常羊血清室温封闭10 min，加第一抗体于4℃冰箱过夜;加第二抗体(生物素化的羊抗兔抗体) 室温下作用10 min，加链霉菌素亲生物素蛋白——过氧化物酶溶液，室温下作用10 min。DAB显色，自来水冲洗后苏木精复染，脱水、透明中性树胶封固。PBS代替第一抗体作为阴性对照，已知肝癌组织作为阳性对照。
1.3 结果判定
细胞核和(或)细胞浆呈明显棕黄色反应即为阳性。阳性细胞计数：每个标本切片选取5个高倍(400×) 视野作阳性细胞计数; 以超过10%细胞呈清晰棕褐色为阳性(+)，超过50%细胞呈清晰棕褐色为强阳性()，低于10%表达或细胞无棕黄色染色为阴性(-)。
1.4 统计学处理
数据用率表示，采用SPSS11.5进行组间χ2检验。
2 结 果
2.1 不同组织中iNOS的表达
HCC癌组织中iNOS的阳性表达率为61.7%，癌旁组织和正常肝组织中未见其阳性表达，两组癌组织中的表达率差异显著(P<0.01)。
2.2 iNOS的表达与HCC临床特征的关系
iNOS的表达与HCC的发病年龄、性别、肿瘤大小、UICC分期及甲胎蛋白(AFP)水平无关(P>0.05)， 而与HCC的转移有关(P<0.05)，见表1。表1 iNOS的表达与HCC临床特征的关系(略)
3 讨 论
iNOS表达升高在人类的多种肿瘤如乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、肺癌、前列腺癌和胃癌等组织中普遍存在。目前研究认为，iNOS诱导的NO在体内与肿瘤的作用机制存在双重性，主要取决于NO的浓度，一方面，高浓度的NO可通过阻止肿瘤细胞中线粒体的氧化和DNA的合成发挥抗肿瘤效应;肿瘤细胞中NO产物可诱导细胞凋亡，因而使肿瘤细胞的存活受到损害;另一方面，越来越多的研究认为，中、低浓度的NO有助于肿瘤的进展与转移，NO在超氧阴离子存在的情况下转化为过氧亚硝酸盐，此盐为高强度的毒性分子能够引起DNA的破坏，因而具有潜在的致癌性〔2〕。NO还可以通过介导血管内皮生长因子(VEGF)促进肿瘤血管形成，与肿瘤的侵袭、生长和转移密切相关〔3〕。这种iNOS和NO水平的改变可受患者各种因素的影响，包括化疗，手术和其他与肿瘤相关的生理应激如疼痛、脱水、缺氧、感染等〔4〕。本研究发现，iNOS在HCC癌组织中的表达率为61.7%，在癌旁组织和正常组织中未见表达，且其表达与淋巴结转移相关，表明iNOS在HCC的肿瘤发生、发展中起着重要的作用。
【参考文献】
1 陈洪雷，刁路明，刘铭球，等.大鼠肺癌侵袭转移中明胶酶A及其抑制剂的动态表达〔J〕. 中华肿瘤杂志，2002;24(20)：11822.
2 Wang Q, Lin ZY, Feng XL. Alterations in metastatic properties of hepatocellular carcinoma cell following oncogene transfection〔J〕. World J Gastroenterol, 2001;7(3):3359.
3 Brabletz T, Herrmann K, Jung A, et al. Expression of nuclear betacatenin and Cmyc is correlated with tumor size but not with proliferative activity of colorectal adenomas〔J〕. Am J Pathol, 2000;156(7):86570.
