CD15s和Ecadherin表达与肝细胞癌侵袭转移相关性研究

　　作者：李永庆 尚培中 苗建军 肖颖丽 张 莹 谷化平 作者单位：(中国人民解放军第251医院普通外科，河北 张家口 075000)

　　【摘要】 目的：探讨CD15s和E钙黏蛋白(Ecadherin)在肝细胞癌组织中的表达及其与肿瘤侵袭转移和患者预后的关系。方法：应用免疫组织化学方法，检测120例肝细胞癌组织中CD15s和Ecadherin蛋白表达，结合随访资料进行分析。结果：CD15s和Ecadherin在肝细胞癌中阳性表达率分别为39.2%和44.2%。CD15s阳性表达的肝细胞癌转移率高(P<0.05)，分化程度及患者5年生存率低(P<0.05);Ecadherin阳性表达的肝细胞癌转移率低(P<0.05)，分化程度及患者5年生存率高(P<0.05)。CD15s表达与Ecadherin表达呈显著负相关(P<0.05)。结论：CD15s和Ecadherin表达与肝细胞癌转移和患者生存期密切相关，联合检测CD15s和Ecadherin蛋白表达可作为判断肝细胞癌预后有价值的参考指标。

　　【关键词】 癌/肝细胞;CD15s;E钙黏蛋白;肿瘤转移

　　The Relationship between the Expression of CD15s and Ecadherin andInvasional Metastasis of Hepatocellular Carcinoma

　　LI Yongqing，SHANG Peizhong，MIAO Jianjun，et al

　　The 251st PLA Hospital，Zhangjiakou，075000，Hebei，China

　　【ABSTRACT】 Objective：To investigate the relationship between the expression of CD15s and Ecadherin in invasion and metastasis of hepatocellular carcinoma.Methods：Immunohistochemical method was used to detect CD15s and Ecadherin expression in 120 cases with hepatocellular carcinoma.Results：Positive expression rate of CD15s and Ecadherin in hepatocellular carcinoma were 39.2% and 44.2% respectively.Hepatocellular carcinoma with positive expression of CD15s had a higher metastatic rate(P<0.05)and lower survival rate for 5 years(P<0.05);Hepatocellular carcinoma with positive Ecadherin expression had lower metastatic rate(P<0.05)and higher survival rate for 5 years(P<0.05).The expression of CD15s was negatively correlated to Ecadherin expression in hepatocellular carcinoma(P<0.05).Conclusion：These results showed that the expressions of CD15s and Ecadherin were closely linked to potential metastasis and the survival rate in hepatocellular carcinoma.CD15s and Ecadherin might be clinically used as prognostic indicators in hepatocellular carcinoma.

　　【KEY WORDS】 Carcinoma/Hepatocellular,CD15s,Ecadherin,Neoplasm metastasis

　　细胞与细胞或细胞与基质之间黏附特性的异常是恶性肿瘤细胞重要的生物学特征之一，在侵袭和转移过程中发挥了重要作用。CD15s(sialyl lewis X)和E钙黏蛋白(Ecadherin)是近年发现的与肿瘤恶性发展密切相关的黏附分子[15]。我们采用免疫组化催化信号放大(catalyzed signal amplification，CSA)法，检测肝细胞癌组织中CD15s和Ecadherin蛋白表达状况，探讨它们之间的相关性，并结合临床随访资料，分析其表达与肝细胞癌侵袭转移和患者预后的关系。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 199002—200805月解放军第251医院手术切除的原发性肝细胞癌标本120例，男性86例，女性34例;年龄26～72岁，平均(49.4±7.5)岁;肉眼形态:巨块型54例，结节型46例，弥漫型20例。肿瘤大小:≤5cm 41例，>5cm 79例。按Edmondson分级标准Ⅰ～Ⅱ级为高分化癌48例，Ⅲ～Ⅳ级为低分化癌72例。伴有淋巴结、肝内、肝外转移者54例，无转移者66例。120例肝细胞癌患者中随访满5年者72例，其中死亡53例，存活19例。选取距癌灶2cm的癌旁肝组织20例和尸检正常肝组织10例作为对照。所有病例术前均未接受过放疗、化疗或免疫治疗。

　　1.2 方法 手术标本均行常规HE染色，采用CSA法行免疫组化染色。小鼠抗人CD15s和Ecadherin单克隆抗体、生物素化酪胺盐(BT)和CSA试剂盒均为Dako公司(丹麦)产品。标本经体积分数为10%甲醛固定24h，石蜡包埋、4μm厚连续切片。操作方法：①石蜡切片脱蜡至水,PBS洗;②放入3%H2O2处理,室温20min,PBS洗3min×3次;③分别滴加CD15s和Ecadherin一抗(1∶80),37℃温育1h,PBS洗3min×3次;④分别滴加生物素化抗鼠IgG(1∶300)37℃温育20min,PBS洗3min×3次;⑤第一次StreptavidinHRP(1∶500)37℃温育20min,PBS洗3min×3次;⑥BT(0.007mmolPL)37℃温育12min,PBS洗3min×3次;⑦第二次StreptavidinHRP(1∶1 000)37℃温育20min。PBS洗3min×3次;⑧0.05%DAB+3%H2O2显色,8～12min;⑨流水洗,苏木素衬染,蓝化,常规封片。实验用已知CD15s和Ecadherin阳性大肠癌组织作为阳性对照,PBS代替一抗作为阴性对照。

　　阳性信号呈棕黄色或棕褐色。①按染色强度及显色癌细胞比例分为-、+、++共3级。按细胞显色有无及深浅评分:无显色0分，棕黄色1分，棕褐色2分。②按显色癌细胞比例记分:<30% 1分，31%～70% 2分，>71% 3分。每例肿瘤积分=①+②，按积分高低分:0分阴性(-)，1～3分弱阳性(+)，4～6分强阳性(++)。

　　1.3 统计学处理 采用SPSS13.0统计软件进行χ2检验与相关分析，P<0.05为差异有显著性意义。

　　2 结果

　　2.1 CD15s和Ecadherin在正常肝组织、肝细胞癌旁肝组织和肝细胞癌中的表达 阳性物质定位于细胞质，正常肝组织10例中CD15s均阴性，Ecadherin均呈不同程度的阳性表达。癌旁肝组织20例中CD15s弱阳性表达2例(阳性率10%)，Ecadherin均呈不同程度的阳性表达(阳性率100%)。120例肝细胞癌中CD15s和Ecadherin表达阳性率分别为39.2%(47/120)和44.2%(53/120)。χ2检验，CD15s阳性率在肝细胞癌中显著高于癌旁肝组织和正常肝组织(χ2=6.41，χ2=6.13，P<0.05)，Ecadherin阳性率在肝细胞癌中显著低于癌旁肝组织和正常肝组织(χ2=21.42，χ2=11.52，P<0.05)。2009年12月李永庆等：CD15s和Ecadherin表达与肝细胞癌侵袭转移相关性研究表1 CD15s和Ecadherin表达与肝细胞癌临床病理特征的关系注：与高分化组比较*P<0.05;与无转移组比较△P<0.05;与生存组比较#P<0.05

　　2.2 CD15s和Ecadherin表达与肝细胞癌临床病理特征的关系 两者表达均与患者性别、年龄、肿瘤大小及肉眼形态无关。CD15s表达与肝细胞癌分化程度呈负相关，与肿瘤转移呈正相关;Ecadherin表达与肝细胞癌的分化程度呈正相关，与肿瘤转移呈负相关。

　　2.3 CD15s和Ecadherin表达与肝细胞癌患者预后的关系 在随访满5年的患者中，CD15s阳性者死亡率高，生存率低;Ecadherin阳性者死亡率低，生存率高。

　　2.4 CD15s和Ecadherin表达之间的关系 在CD15s阳性表达的47例肝细胞癌中，Ecadherin阳性表达为6例(12.8%)，在CD15s阴性的73例肝细胞癌中，Ecadherin阳性表达为47例(64.4%)。CD15s表达与Ecadherin表达呈显著负相关(r=-0.53，P<0.05)。

　　3 讨论

　　通常认为，侵袭、转移是决定恶性肿瘤患者预后不良的重要因素。作为介导细胞与细胞或细胞与基质相互识别和作用的分子基础，细胞黏附分子在肿瘤细胞的侵袭和转移过程中发挥着双重作用，一方面肿瘤细胞必须先通过黏附分子下调，从原发灶脱落，另一方面又需要通过细胞外基质受体或内皮细胞配体的上调，与细胞外基质或血管内皮细胞黏附而移动，才能形成转移灶。这一过程与肿瘤细胞表达的膜表面黏附分子密切相关，无论是质或量的改变都会影响肿瘤细胞的侵袭及转移能力。

　　作为一种细胞黏附分子，CD15s抗原是人们所熟知的肿瘤标志物单唾液酸神经节糖苷脂CA199的同分异构体，为黏附分子选择素(CD62)所识别的比较确定的一个配基，由半乳糖(Gal)、葡萄糖(Glc)、唾液酸(NeuAc)、N乙酰基(NAc)、岩藻糖(Fuc)5个分子结合而成，其结构为(NeuAcα2→3GalMβ1→4[Fucα1→3]GlcNAcβ1→3Galβ1→4Glcβ1→1Cer)。近年研究表明，它是一种新的肿瘤相关抗原，在结肠癌、胃癌、乳腺癌和甲状腺癌等上皮性肿瘤的细胞表面表达明显增强，并与肿瘤的发生发展、侵袭转移和患者预后密切相关[13]。

　　Ecadherin是钙黏附蛋白分子家族中跨膜蛋白亚型的一种,主要存在于人和动物的上皮细胞,对维护上皮细胞的形态和结构完整性具有重要作用。人Ecadherin基因定位于染色体16q22.1,DNA全长约100kb,含16个外显子。主要介导同型细胞的黏附功能，其表达下降或缺失,使细胞间的相互黏附力下降,易使细胞分散向外周浸润性生长,一旦获得转移的必要条件,就可脱离原发灶发生转移。近年来，通过在胃癌、前列腺癌、大肠癌、鼻咽癌及甲状腺癌等肿瘤的研究证实，Ecadherin表达降低与癌的分化、侵袭和转移有显著的相关性[4，5]。

　　在恶性肿瘤发生的癌基因研究中，许多学者提出了基因协同作用假说，认为在恶性肿瘤发生、发展和转移的各阶段，至少有两种或两种以上功能不同、异常激活的基因各自发挥不同作用，协同促进了细胞癌变。我们采用高敏感的CSA免疫组织化学技术，通过对120例肝细胞癌组织中CD15s和Ecadherin蛋白联合检测，结合随访资料进行分析，结果显示，CD15s在正常肝组织中均为阴性，Ecadherin呈不同程度的阳性表达。在肝细胞癌组织中CD15s阳性率显著高于癌旁肝组织和正常肝组织，Ecadherin阳性率显著低于癌旁肝组织和正常肝组织。CD15s表达阳性的肝细胞癌分化程度低，转移率高，患者5年生存率低;Ecadherin阳性表达的肝细胞癌分化程度高，转移率低，患者5年生存率高。在肝细胞癌组织中两者表达状况呈显著负相关，表明CD15s的表达上调和Ecadherin的表达下调与肝细胞癌的发生、细胞增殖、分化和转移的病理过程密切相关，联合检测对预测肝细胞癌转移、评估患者预后具有一定临床意义和实用价值。

　　【参考文献】

　　1 尚培中,张金江,贾国洪,等.基质金属蛋白酶2和唾液酸化Lewis X在乳腺癌中的表达及其意义[J/CD].中华乳腺病杂志:电子版,2008,2(2):177183

　　2 尚培中,朱习琴,苗建军,等.MMP-9和CD15s与胃癌血管生成的相关性研究及其临床意义[J].河北北方学院学报:医学版,2008,25(1):1213

　　3 尚培中,王兵,万立,等.SLeX和p16在甲状腺乳头状癌中的表达及其意义[J].中华内分泌外科杂志,2009,3(3):151153

　　4 谷化平,尚培中,周翠玲.CD44v6和E上皮钙黏附素在胃癌中的表达与预后的关系[J].中国普通外科杂志,2004,13(4):303305

　　5 王兵,尚培中,谷化平,等.甲状腺乳头状癌MMP9和Ecadherin表达及相关性研究[J].河北北方学院学报:医学版,2009,26(5):46