TNF-β+252单核苷酸多态性与胃癌恶液质的关系

　　作者：张佃良，李云东，张美丽，陆连芳，周岩冰(青岛大学医学院附属医院，山东 青岛 266003 普通外科; 海阳分院普通外科)

　　[摘要]目的 探讨肿瘤坏死因子-β(TNF-β)+252基因单核苷酸多态性与胃癌病人癌性恶液质的关系。方法105例营养不良胃癌病人，按照近6个月体质量的减轻率分成3组:A组，0～5%;B组，6%～10%;C组，>10%。用PCR结合限制性内切酶检测胃癌病人及110例正常志愿者TNF-β+252单核苷酸多态性。结果 TNF-β+252A(TNFB2)出现的频率在胃癌组和对照组差异无显著性( P >0.05)。在胃癌病人中，TNFB2出现的频率在A、B、C各组差异亦无显著性( P >0.05);恶液质病人TNFB2出现的频率与对照组比较差异无显著性( P >0.05)。结论 TNF-β+252基因单核苷酸多态性与胃癌恶液质的发生无相关性。

　　[关键词] 胃肿瘤;恶病质;多态性，单核苷酸

　　ASSOCIATION OF IL GENE MONONUCLEOTIDE POLYMORPHISMS WITH DYSCRASIA IN GASTRIC CANCER

　　ZHANG DIAN- LIANG， LI YUN-DONG， ZHANG MEI-LI， et al

　　(Department of General Surgery， The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College， Qingdao 266003， China)

　　[ABSTRACT]ObjectiveTo evaluate the association of TNF-β+252 mononucleotide polymorphisms with dyscrasia related to gastric cancer. MethodsThis study was carried out in 105 gastric cancer patients with malnutrition who were divided into three groups according to their weight loss in the last six months: group A， weight loss of 0-5%; group B， 6%-10%; and， group C， >10%. The control group consisted of 110 healthy volunteers. The mononeucleotide polymorphisms study was done by Nco Ⅰ-digested DNA fragment biding PCR. ResultsNo significant differences were found in TNFB2 frequency between the pa-tients and the controls ( P >0.05)， and between dyscrasia group and controls ( P >0.05). No significant difference was seen in TNFB2 frequency among group A， B and C ( P >0.05). ConclusionTNF-β+252 polymorphism is not associated with the path-ogenesis of severe dyscrasia.

　　[KEY WORDS]stomach neoplasms; dyscrasia; polymorphism， mononucleotide

　　癌性恶液质的基本特点是体质量减小、进行性脂肪和肌肉损耗以及代谢异常，其确切发病机制尚不清楚。近年来研究表明，致炎细胞因子在恶性肿瘤病人的体质量丢失中起着重要的作用，而其基因单核苷酸多态性(SNP)与相应细胞因子的产生密切相关[1，2]，但关于肿瘤坏死因子-β(TNF-β)+252 SNP与癌性恶液质关系的研究国内尚未见报道。本研究旨在探讨TNF-β+252 SNP与胃癌病人癌性恶液质的关系。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 选择连续入院的限期手术的进展期胃癌病人105例，男59例，女46例，年龄(59.3±16.0)岁;对照组110例为正常志愿者，男62例，女48例，年龄 (48.1±11.4)岁。研究对象均为汉族，均排除神经性厌食、炎性肠病、免疫性疾病和内分泌疾患、感染。按照近6个月病人减小的体质量与平时体质量的比值，把体质量减小分成3组[3]:A组，0～5%;B组，6%～10%;C组，>10%。

　　1.2血浆TNF-β+252 SNP检测 所有病人均在入院第1天6:00时空腹状态下抽取外周静脉血。EDTA抗凝，离心，置于-70 ℃冰箱储存待测。用Wizard基因组DNA提取试剂盒(Promega公司)，按照说明书提取白细胞基因组DNA。TNF-β+252:用PCR扩增包括NcoⅠ酶切位点在内的长782 bp的片段。其上游引物序列:5′-CCGTGCTTCGTGCTTTGGACTA-3′;下游引物序列:5′-AGAGGGGTGGATGCTTGGGTTC-3′(由南京生工公司合成)[5]。反应在PCR仪(日本BIO-RAD公司生产)上进行:95 ℃预变性3 min; 95 ℃ 1 min，50 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，共循环35次;最后72 ℃延伸5 min。PCR扩增产物用2 U限制性内切酶(购于Promega公司) 在37 ℃水浴消化 2期张佃良，李云东，张美丽，等.TNF-β+252单核苷酸多态性与胃癌恶液质的关系1076 h。40 g/L丙烯酰胺凝胶电泳分析酶切产物:若+252变为A，则限制性内切酶NcoⅠ特异切割位点消失，显示一长786 bp片段(TNFB2纯合子);若没有变为A，则显示长596 bp和196 bp两种片段(TNFB1纯合子);如显示长786 bp、596 bp和196 bp三种片段，则说明是TNFB2杂合子(图1)。

　　1.3 统计学分析 采用SPSS 11.0统计软件包行 χ2检验。

　　图1 TNF-β+252酶切产物电泳图(略)

　　M为Marker; ① 、③ TNFB2纯合子; ② TNFB2杂合子;④ TNFB1纯合子

　　2 结果

　　胃癌组有恶液质病人45例(体质量减小>10%)，对照组无恶液质出现。

　　2.1胃癌组和对照组TNFB2的比较 胃癌组病人检测到TNFB2的病人73例( 69.5% )，对照组检测到70例(63.7%)，两组相比较差异无显著性( P >0.05)。

　　2.2 胃癌病人各组SNP的比较 胃癌组病人TNF-β+252的所有位点均处于Hardy-Weinberg平衡状态( P >0.05)，说明资料的代表性良好。TNFB2出现的频率在A、B、C三组之间分别为73.1%、67.6%、68.9%，差异无显著意义( P > 0.05 )。

　　2.3 恶液质病人和对照组SNP的比较 恶液质病人检测到TNFB2者31例(68.9%)，对照组检测到70例(63.7%)，两者比较差异无显著性( P >0.05)。

　　3 讨论

　　一般认为，癌症病人如果在6个月内体质量下降超过10%，恶液质的诊断就可以成立。约80%的上消化道肿瘤病人可出现癌性恶液质[6]，这在很大程度上影响了病人的生活质量，并严重缩短了病人的存活期限。值得注意的是，恶液质的发生与肿瘤的大小和有无转移无相关性[3]。恶液质的发生机制至今尚未弄清，但有些细胞因子已被证实是恶液质的介质，如TNF-α、白细胞介素(IL)-1、IL-6以及干扰素-γ(INF-γ)。TNF-α的产生受转录水平的调节，其基因多态性在炎性疾病中的作用一直是研究的热点[7，8]。TNF-β第一内含子上+252位点若为G，则是TNFB1;若为A，则称TNFB2。我们以前的研究表明，TNF-α在胃癌病人外周血浆中浓度显著升高，并和恶液质的严重程度相关联[10]。本研究在前期研究的基础上，进一步探讨TNFB2与癌性恶液质的关系，结果表明，TNFB2出现的频率在胃癌组和对照组均无显著性差异( P >0.05)，提示它们可能不在胃癌的致病过程中起重要作用。本文两组的年龄差异有显著性( P <0.01)，年龄的差别可能与体质量有关，但是年龄的差别与个体质量的减小无必然联系。短时间内体质量的明显减小一般是由疾病或人为控制如减肥等引起的，所以，有理由认为年龄的差异不会显著影响两组间体质量减小程度的比较结果。为探讨TNF-β+252 SNP对体质量丢失的影响，我们按照病人体质量减轻的严重程度分为A、B、C三组，结果显示TNFB2频率在A、B、C三组差异无显著性。提示TNFB2单核苷酸多态性可能与胃癌病人的体质量丢失无关。鉴于以前的研究结果，TNFB2单核苷酸多态性仅与疾病的危重状态有关，而未发现其与疾病的发生相关联[8，9]，为了探讨TNF基因SNP在癌性恶液质发病过程中的作用，本研究将胃癌病人体质量在6个月内下降超过10%定为恶液质，比较恶液质病人和对照组TNF基因SNP频率的差异。结果显示，TNFB2出现的频率在恶液质组和对照组间差异均无显著性( P >0.05)，提示TNFB2单核苷酸多态性可能对恶液质的发生无影响。

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