大肠癌组织中促红细胞生成素受体表达与微血管密度的关系

大肠癌组织中促红细胞生成素受体表达与微血管密度的关系作者：方文成　崔红侠　孙卫红　寇治民    作者单位：1山东省日照市人民医院　普外科　 2 兰州大学第二医院　普外科　 【摘要】  目的：探讨大肠癌组织中促红细胞生成素受体（erythropoietin receptors，Epo-R）表达与肿瘤微血管密度（microvessel density，MVD）和临床病理特征的关系。方法：采用免疫组织化学SP法对60例大肠癌组织、20例正常大肠组织中Epo-R和 MVD进行检测。结果: 60例大肠癌组织均检测到Epo-R的表达。大肠癌组织MVD值为30.8±9.5,显著高于正常大肠组织的4.1±2.5 （P＜0.01）。MVD水平与大肠癌患者年龄、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、临床分期有显著相关性（P＜0.05）。Epo-R表达与大肠癌组织MVD成正相关。结论: Epo-R在大肠癌组织中有异常高表达，且与MVD和临床病理特征成正相关，可能在肿瘤新生血管形成中有重要作用。 【关键词】  大肠肿瘤·促红细胞生成素受体·微血管密度    Relationships of erythropoietin receptor expression and microvascular density in colorectal carcinoma tissuesFANG Wen-cheng1, CUI Hong-xia1, SUN Wei-hong1, KOU Zhi-min2   Department of General Surgery, Rizhao City People's Hospital (Rizhao 276800, China)   2Department of General Surgery, Second Hospital of Lanzhou University (Lanzhou 730030, China)    【ABSTRACT】 Objective: To investigate the correlation between erythropoietin receptor (Epo-R) expression and microvascular density (MVD) in colorectal carcinoma tissues.  Methods: Expression of  erythropoietin receptor and microvascular density in 60 specimens of colorectal carcinoma and 20 normal colorectal specimens were investigated by immunohistochemistry. Results： Epo-R expression was found in all the colorectal carcinoma tissues. The level of MVD was much higher in colorectal carcinoma than that in the corresponding normal tissues(30.8±9.5 vs 4.1±2.5（P＜0.01）. Moreover, the level of MVD was significantly 　　近来研究表明，促红细胞生成素（erythropoietin ，Epo）及其受体（Epo-R）参与人类多种恶性肿瘤的发生发展，是一种促进肿瘤血管生成因子［１］。肿瘤微血管密度(microvascular density， MVD)是评价肿瘤血管生成的主要判断指标［２］。本研究通过检测人大肠癌组织与正常大肠组织Epo-R的表达情况，探讨其与大肠癌组织肿瘤血管生成的关系。1　资料与方法    1.1　一般资料　收集山东省日照市人民医院普外科2004年1月—2007年6月经手术切除并经病理组织学检查确诊的大肠癌标本60例，其中男39例，女21例。年龄31～78岁，中位年龄56岁。盲肠和升结肠癌9例，横结肠癌6例，降结肠癌7例，乙状结肠癌16例，直肠癌22例。临床分期Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 期分别为8、24、22、6例。随机取其中20例患者距大肠肿瘤边缘＞10 cm处的正常大肠组织为对照。    1.2　主要试剂　小鼠抗人EPO-R单克隆抗体，美国R＆D试剂公司产品；鼠抗人CD31单克隆抗体为Gymed公司产品； SP通用型免疫组织化学试剂盒（北京中山生物技术公司）。    1.3　实验方法　大肠癌及正常手术切缘大肠组织经多聚甲醛固定，石蜡包埋切片，切片厚5 μm，采用免疫组织化学方法SP法，具体方法按照试剂盒说明书严格操作，用PBS液代替一抗作为阴性对照，以已知阳性切片作为阳性对照。    1.4　结果判断　Epo-R表达计数：以细胞质或细胞膜被抗Epo-R的抗体染成棕色为阳性，记录3个视野内观察数，取其平均数作为Epo-R的表达计数。MVD计数： 血管内皮细胞被染成棕红色或见到棕红色颗粒为阳性。以与周围肿瘤细胞和结缔组织成分明显区别的任何一个棕红色内皮细胞或细胞结构作为一个血管计数。只要结构不连接，其分支结构也可作为一个血管计数。记录3个视野内微血管数，取其平均数作为MVD值。    1.5　统计学处理　应用SPSS10.0软件包进行数据分析，采用t检验和方差分析检验MVD与临床病理特征的关系。采用直线相关分析Spearman检验Epo-R表达与MVD的关系。P≤0.05为差异有统计学意义。                  2　结果    2.1　免疫组织化学结果　60例大肠癌组织均检测到Epo-R的表达，细胞质或细胞膜可见阳性着色；大肠癌组织中微血管染色呈棕红色或棕红色颗粒,　　分布不均,形态不一，所有小静脉、小动脉、毛细血管均可见染色标记（图1）。    2.2　MVD与大肠癌临床病理特征的关系　大肠癌组织MVD值为30.8±9.5,显著高于正常大肠组织4.1±2.5（P ＜0.01）；MVD值与大肠癌患者年龄、肿瘤浸润深度、淋巴结转移、远处转移、临床分期有显著相关性（P ＜0.01）；而与肿瘤部位无明显相关性（P ＞0.05，表1）。    2.3　大肠癌组织Epo-R表达与MVD的关系　大肠癌组织中Epo-R表达与MVD成显著正相关（r =0.632,P <0.01,图２）。3　讨论    Epo-R为Ｅｐｏ的特异性膜受体,属于Ⅰ型细胞因子受体超家族成员之一，由胞外配体结合域、跨膜域及胞内域三部分组成,主要特点是自身缺少酪氨酸激酶活性。Epo与Epo-R结合引发信号转导，其基本作用为促进红细胞生成。最新研究表明Epo-R在人类多种恶性肿瘤中表达，可以调节肿瘤细胞的生长发育，引起恶性肿瘤新生血管形成，参与人类恶性肿瘤的发生发展［３］。Ribatti等［4］发现Epo-R在血管内皮细胞及肿瘤细胞上的表达与肿瘤的恶性程度呈正相关，且与肿瘤血管生成范围高度相关，认为Epo-R在胃肠道肿瘤血管生成中有营养作用。多数学者认为Epo-R是一种内源性促血管生成因子，它抑制肿瘤细胞和血管内皮细胞的凋亡，促进肿瘤血管生成，促进其增殖分化，抑制肿瘤细胞凋亡,从而加速肿瘤细胞生长［５-６］。    Vermeulen等［７］研究表明MVD增高与大肠癌患者的预后有明显关系，MVD越高其生存期越短。本研究结果表明MVD与大肠癌患者的病情进展密切相关，随肿瘤分化级别的升高MVD亦逐渐增加，有淋巴结转移组MVD高于无淋巴结转移组，临床分期越晚MVD值越高，表明MVD与大肠癌的进展程度和侵袭性相关，提示MVD可反映肿瘤生长活跃程度，也是判断大肠癌预后的一个指标，与有关报道一致［８］。    本研究对大肠癌组织和正常大肠组织标本切片进行免疫组织化学染色，发现Epo-R表达于肿瘤细胞的内皮细胞。对Epo-R与 MVD进行相关性比较，发现两者之间呈正相关（r =0.632），肿瘤MVD的表达强度随着Epo-R表达的增加而增强，提示了Epo-R在大肠癌的肿瘤血管形成中发挥重要的调控作用。因此，本研究认为Epo在大肠癌病情进展中可能是一种内源性促血管生成因子,对大肠癌的脉管系统具有营养作用,通过自分泌和(或)旁分泌的方式作用于表达Epo-R的细胞,对大肠癌的血管生成发挥重要作用。通过抑制大肠癌组织的血管形成，治疗大肠癌有望成为恶性肿瘤靶向治疗的新途径。【参考文献】[1] Lappin TR, Maxwell AP, Johnston PG. Epo's alter ego: erythropoietin has multiple actions[J]. Stem Cells, 2002,20(6):485-492.[2] Weidner N. Intratumor microvessel density as a prognostic factor in cancer[J]. Am J Pathol, 1995,147(1):9-19.[3] Batra S, Perelman N, Luck LR, et al. Pediatric tumor cells express erythropoietin and a functional erythropoietin receptor that promotes angiogenesis and tumor cell survival[J]. Lab Invest, 2003,83(10):1477-1487.[4] Ribatti D, Marzullo A, Nico B, et al. Erythropoietin as an angiogenic factor in gastric carcinoma[J]. Histopathology, 2003,42(3):246-250.[5] Arcasoy M, Amin K, Karayal AF, et al. Functional significance of erythropoietin receptor expression in breast cancer[J]. Lab Invest, 2002,82(7):911-918.[6] Pollio F, Staibano S, Mansuero G, et al. Erythropoietin and erythropoietin receptor system in a large uterine myoma of a patient with myomatous erythrocytosis syndrome: possible relationship with the pathogenesis of unusual tumor size[J]. Hum pathol, 2005,36(1):120-127.[7] Vermeulen PB, Van den Eynden GG, Huget P, et al. Prospective study of intratumoral microvessel density, p53 expression and survival in colorectal cancer[J]. Br J Cancer, 1999,79(2):316-322.[8] Tsuji T, Sasaki Y, Tanaka M, et al. Microvessel morphology and vascular endothelial growth factor expression in human colonic carcinoma with or without metastasis[J]. Lab Invest, 2002,82(5):555-562.