力尔凡联合顺铂对恶性腹腔积液临床疗效及端粒酶活性的影响

作者:崔京远,马红,崔秋娟,周东

青岛大学附属青岛市立医院  普外科  （山东  青岛  266011）      【关键词】  力尔凡  顺铂  腹水  端粒  末端转移酶

    【摘要】目的：探讨力尔凡对恶性腹腔积液的临床治疗价值及对端粒酶活性的影响。方法：48例恶性腹腔积液患者分为治疗组和对照组。治疗组（28例）采用力尔凡联合顺铂腹腔内注入，对照组（20例）单用顺铂腹腔内注入。分别在治疗前，治疗后1周、2周及3周，观察腹腔积液消失情况，评定疗效，采用半定量TRAP银染法检测腹水细胞端粒酶活性。结果：治疗组临床治疗有效率89.3%，对照组为60.0%（P＜0.01），随着治疗时间的延长，端粒酶活性逐渐下降。结论：力尔凡联合顺铂治疗恶性腹腔积液具有协同作用，其对端粒酶活性的抑制可能参与了以上机制，检测端粒酶活性可作为评价其疗效的敏感生物学指标。

       The effect of Lifein combined with cisplatin on malignant ascites and telomerase activity

    CUI Jingyuan,MA Hong,CUI Qiujuan,ZHOU Dongfeng,LIN Huizhong

    Department of General Surgery,Qingdao Municipal Hospital of Qingdao University (Qingdao 266011,China)

    【ABSTRACT】Objective:To study the clinical value and telomerase activity of malignant ascites treated by lifein combination with cisplatin.Methods:48 patients with malignant ascites were divided randomly into two groups.Treatment group of 28 cases were treated with lifein and cisplatin,control group of 20 cases were treated with cisplatin alone.Telomerase activity was detected by semiTRAP assay before treatment,at the first week,the second week and the third week after treatment,respectively.Results:the effective rates of treatment group(89.3%) was much higher than that of control group (60%),P＜0.01.Telomerase activity decreased in time dependent manner.Conclusions:Combining Lifein and cisplatin was very effective to malignant ascites partly by  decreasing telomerase activity.Detection of telomerase activity after treatment with Lifein and cisplatin could be used as a sensitive marker

    【KEY WORDS】Lifein?Cisplatin?Ascites?Telomerase 

　  恶性腹腔积液是晚期恶性肿瘤患者的常见并发症之一，严重影响病人的生存质量，缩短生存时间，有效的控制恶性腹腔积液是肿瘤综合治疗中的重要组成部分。近年来，生物治疗及生物反应调节剂的应用为恶性腹腔积液的治疗提供了新的方法。晚近研究表明，端粒酶在恶性肿瘤细胞中高表达［1~3］，而且是鉴别良恶性腹腔积液的重要生物学标志物［4］。本研究采用力尔凡联合顺铂腹腔内注射治疗恶性腹腔积液，探讨其临床疗效及对端粒酶活性的影响。

    1  材料与方法

    1.1  临床资料  2005年3月~2006年2月48例恶性肿瘤病人，其中胃癌18例，结肠癌10例，肝癌12例，恶性腹膜间皮瘤2例，胰腺癌6例，每例均经病理学或细胞学证实，且超声显示中等到大量腹腔积液。全部患者治疗前血常规，心、肝、肾功能均正常，KSP评分＞50分。上述病例随机分为治疗组（腔内注射顺铂加力尔凡）28例，对照组（单纯顺铂）20例。两组病人在性别、年龄、临床分期及病种无统计学差异。

    1.2  主要试剂和药物  半定量TRAP试剂盒：含细胞裂解液、反应液（含正向引物）、Tag酶、逆向引物、溴酚蓝二甲苯青双色上样缓冲液等。-80℃保存，使用时按说明书操作并作局部改进。力尔凡为长春力尔凡药业有限公司生产，顺铂为济南齐鲁制药厂产品。

    1.3  治疗方法  治疗组：治疗前行腹腔穿刺术，抽取腹腔积液1500~2000ml，然后将力尔凡20~30mg，顺铂40~60mg，地塞米松15mg，利多卡因5ml加生理盐水40~80ml溶解，注入腹腔。注药后嘱患者变换体位，以使药物与腹膜充分接触。用药当日静脉补液1500~2000ml以减轻顺铂之肾毒性，每周重复1次，3~4次为1个疗程，对照组：除不用力尔凡外，其他与治疗组相同。

    1.4  临床疗效观察  根据WHO对肿瘤药物治疗评定标准评定。完全缓解（CR）：腹腔积液完全吸收持续1个月以上。部分缓解（PR）：腹腔积液吸收超过50%，持续1个月以上。稳定（SD）：腹腔积液吸收不足50%，持续1个月以上。恶化（PD）：腹腔积液无变化或增加。有效率以CR+PR计算。

    1.5  端粒酶活性检测  分别于治疗前，治疗后1周，2周，3周，常规腹腔穿刺抽取腹水50ml，3000r/min离心10min，弃上清，以1%曲拉通破坏红细胞，冷PBS洗涤2次；立即加裂解液10μl，冰浴30min，4℃15000r/min离心10min，吸取上清保存于-80℃。以TRAP银染法检测端粒酶活性。每组实验均同时设阳性及阴性对照（阳性对照为SGC7901人胃癌细胞株，阴性对照为上清液65℃10min以灭活RNA酶）。所用正向引物（TS）序列为5’AATCCGTCGAGCAGAGTT3’，逆向引物（CX）序列为5’CCCTTACCCTTACCCTTACCCTTA3’。

    1.6  端粒酶活性的半定量分析  端粒酶活性的强度表现为间隔6bp梯度带数目及灰度强弱的不同，电泳结果经Smart View生物电泳图像分析系统扫描并贮存图像，以对照组的端粒酶活性作为100， 同时计算各实验组的相对端粒酶活性。

    1.7  统计学方法  数据用x±s表示，采用SPSS11.5统计软计进行统计学差异分析。

    2  结  果

    2.1  疗效比较  治疗组与对照组在治疗后腹水均有不同程度的减少，两组治疗结果比较见表1。治疗组有效率89.3%，明显高于对照组的60.0%（P＜0.01）。表1  治疗组与对照组疗效比较组别例数CRPRSDPDCR+PR（%）治疗组288173089.3*对照组20486260.0*P＜0.01  VS  对照组

　2.2  力尔凡联合顺铂对腹水恶性肿瘤细胞端粒酶活性的影响  分别检测不同治疗时间的端粒酶活性，治疗组在治疗后1周，平均端粒酶活性下降约50%，与阳性对照相比，差异有统计学意义（P＜0.05）；至第2周时端粒酶活性继续下降，治疗3周后端粒酶活性消失，与阴性对照相比，差异无统计学意义（P＞0.05）。对照组在治疗后不同时间端粒酶活性也有不同程度的下降，说明顺铂对端粒酶活性的抑制作用较顺铂联合力尔凡为弱，两者差异有统计学意义（P＜0.05）（图1）。

    3  讨  论

　恶性腹腔积液是晚期恶性肿瘤的常见并发症，适当治疗可明显延长生存期，缓解症状。目前联合化疗方案有多种，总体疗效并不理想［5］。近年来生物反应调节剂应用研究较多，特别是与化疗药物联合应用治疗恶性腹腔积液，取得较好疗效。力尔凡是一种链球菌制剂，是用现代生物技术从溶血性链球菌中提取纯化而得到的一组分子量为70kD的α甘露聚糖肽类物质，研究发现，它可使癌细胞染色体断裂，使癌细胞p53基因激活上调，提高癌细胞DNA甲基化酶活性，抑制癌细胞转录，抑制癌细胞DNA聚合酶活性而直接杀伤癌细胞；其次可通过宿主介导的间接作用，主要是活化中性粒细胞和单核细胞，使肿瘤细胞黏附，并诱导多种细胞因子的表达，起到抑制和杀瘤的作用［6］。文献报道其治疗恶性渗出明显缓解率达60%，而单用顺铂总有效率40%~60%。如将两种药物联合，力尔凡除本身的抑癌作用外，还起到增敏作用，使化疗效果倍增。本治疗组有效率达89.3%，明显高于单用顺铂组（P＜0.01）。端粒酶作为目前具有特异性和敏感性的恶性肿瘤标志物，不但用于恶性肿瘤的早期诊断，肿瘤的预后判断，而且用于治疗效果的评价［7~9］。Liu等进行了良恶性腹水端粒酶活性的检测，结果表明，检测腹腔积液脱落细胞端粒酶活性对腹腔积液定性诊断具有重要意义，可作为良恶性腹腔积液的鉴别诊断指标［7］。本研究将力尔凡联合顺铂治疗晚期恶性肿瘤腹腔积液，不但明显缓解临床症状，而且随着治疗时间的延长，腹水端粒酶活性逐渐降低，提示力尔凡与顺铂治疗恶性腹腔积液有协同作用，其对端粒酶活性的抑制作用可能参与了以上机制，推测与肿瘤细胞染色体断裂有关。因此检测端粒酶活性可作为评价其疗效的敏感生物学指标。

    参  考  文  献

    ［1］Buttitta F,Pellegrini C,Marchetti A,et al.Human telomerase reverse transcriptase mRNA expression assessed by realtime reverse transcription polymerase chain reaction predicts chemosensitivity in patients with ovarian carcinoma［J］.J Clin Oncol，2003，21（7）：13201325.

    ［2］Naasani I,OhHashi F,Ohhara  T,et al.Blocking telomerase by dietary polyphenols is a major mechanism for limiting the growth of human cancer cells in vitro and in vivo［J］.Cancer Res，2003，15;63(4):824830.

    ［3］刘华，马春红，刘素侠，等.两种端粒酶逆转录酶启动子真核表达载体的构建［J］.中国现代普通外科进展，2005，8（4）：212215.

    ［4］Tseng CJ,Jain S,Hou HC,et al.Applications of the telomerase assay in peritoneal washing fluids［J］.Gynecol Oncol,2001,81(3):420422.

    ［5］余生元，董晓强，黄志良，等.ρ糖蛋白和多药耐药相关蛋白在胃癌中的表达及其与化疗敏感性的关系［J］.中国现代普通外科进展,2004,7（4）:217219.

    ［6］刘丽华，纪春祥，李绵利，等.力尔凡联合化疗治疗癌性腹腔积液疗效观察［J］.中国肿瘤临床,2001,28（10）:783784.

    ［7］Biroccio A,Gabellini C,Amodei S,et al.Telomere dysfunction increases cisplatin and ecteinascidin743 sensitivity of melanoma cells［J］.Mol Pharmacol,2003,63(3):632638.

    ［8］Kondo Y,Komata T, Kondo S.Combination therapy of 25A antisense against telomerase RNA and cisplatin for malignant gliomas［M］.Int J Oncol，2001,18(6):12871290.

    ［9］Liu J,Yang G,ThompsonLanza JA,et al.A genetically defined model for human ovarian cancer［J］.Cancer Res,2004,64(5):16551663.