STAT6基因多态性与新疆人群变应性鼻炎的关联

变应性鼻炎(AR)为一种常见疾病,是多种免疫细胞和细胞囚子参与的鼻黏膜慢性炎性反应性疾病。工业化程度及生态环境的恶化,使变应性鼻炎的患病率在全球有增长的趋势。由于病情反复发作,严重影响患者的生活质量[1-3]。新疆属于大陆干旱气候,远离海洋,高山环绕,光热丰富,降水稀少,全疆平均年降水量仅145mm,这些都与变应性疾病的高发有关。此外,AR发生与人体遗传素质影响有关;信号转导和转录激活因子-6(STAT6)是信号传递和转录双重功效STAT家族的一员,在IL-4介导的免疫反应和Th2细胞分化发育中发挥重要作用[4.5]。新疆的维吾尔族(维族)和汉族占到新疆`总人口的85%以上,本次抽取北疆及南疆的伊犁和喀什地区进行AR流行病学调查,分析STAT6基因多态性与AR的关联性。

对象与方法

1  研究设计

用横断面调查和以人群为基础的病例对照研究设计。

2  研究对象

调查对象 选择伊犁地区的伊宁县,抽取其中12个乡镇村队、1个企业、2个行政单位为调查点;选择南疆喀什地区的喀什市及疏勒县,抽取其中1个市区居委会、1个县属居委会、5个乡村为调查点,以常住居民(当地居住时间大于5年)为调查对象,应调查51OO人,实际完成检查4380人,应答率为85.9%。

诊断与纳入标准  参照2004中华医学会耳鼻咽喉科学分会所定AR诊治原则[6]进行诊断。有AR典型症状、体征和病史,或鼻黏膜刮片镜检阳性者。

对照组  非AR人群,居住他、性别、民族与病例组相同。

排除标准  血管运动性鼻炎、慢性鼻窦炎、药物性鼻炎,合并哮喘者;严重心、肝、肾和内分泌疾病患者;精神病患者;不合作者。

3  工作流程

问卷调查  由经统一培训的与被调查者相同民族的调查员,用面对面的方式及统一问卷进行调查,内容:一般人口学特征、烟酒嗜好、有关自觉症状、暴露史和病史。

鼻腔专科检查  由专科医师进行鼻腔检查,对有AR症状和体征者进行鼻黏膜刮片,涂片固定后经苏木素-伊红染色法染色,在光镜下查找嗜酸粒细胞。

血样采集  抽取部分病例组和对照组,通过知情同意谈话后,采静脉血4mL。

4  基因多态性检测

受试者抗凝血基因组DNA用酚-氯仿法进行提取。STAT6基因多态性检测,用限制性片段长度多态性的SNP分型方法进行分型,在线Primer3软件设计并优选出4对PCR引物,用于以下两组PCR体系,扩增STAT6基因4个多态位点。

体系1:反应体系(10uL)包含1×HotStar Taqbuffer,2.0mmol·L-1Mg2+,0.2mmol·L-1dNTP,1UHotstaraqlD。lymerase样本DNA1uL和PCR引物1uL(2umol·L-1)。

体系2:反应体系(10uL)包含1×GC buffer I(TAKARA),2.0mmol·L-1Mg,0.2mmol·LIdNTP,1uHt,tstarTaqpolymcrase(QiagCnInc.)和样本DNA1uL和PCR引物(2um。l·L1)1uL。PCR循环程序:gD-℃15mh;11crlCs×(94℃20s,Tm℃-0.5℃/cycle40s,72℃1min40s);24cycles×(94℃20s,(Tn】-6)℃30s,72℃1.5min);72℃2min;4℃forcvcr。限制性内切酶:BtsCI(NEB)、HinfI(MBI)、BstUI(NEB)禾口P哎I(MBI)

5 统计学分析

EpiData3.1软件对收集的数据进行双人双录入核查;用SPSS15.0软件进行/检验及多因素Logistic回归分析。

结果

1  一般情况

共调查4380人。其中,男性2072人,女性23O8人;年龄4-98岁,维族35O2人,汉族752人,其他民族126人(包括回族、哈萨克族、锡伯族、满族等)。县城1545人,农村2835人。本次主要研究维族和汉族人群。

2  变应性鼻炎的患病率

北疆地区:维、汉族AR的患病率分别为12.8%和25.9%,两民族差别有统计学意义(P<0.0O1)。南疆地区:维、汉人群AR患病率分别为12,8%和27.1%,其差别具有统计学意义(P<0.0O1)。比较两地区相同民族人群AR的患病率,无沦维族还是汉族,差别均无统计学意义(P>0.O5)。新疆维族、汉族人群AR总患病率分别为12.8%,26.1%,两者差别具有统计学意义(P<0.OO1),且维族AR患病率明显低于汉族.见表1。

3  STAT6基因多态性与变应性鼻炎的关联

分层分析维族和汉族人群中STAT6基因4个标签SNRs的基因型与AR的关联,结果见表2。

维族人群STAT6基因rs703817位点基因型GG、GA、AA在病例组与对照组间,分布差异有统计学意义(P<0.01),说明该位点与AR相关;而在汉族人群中未发现这种基因型分布的差异。STAT6基因rs167769CC/CT/TT、rs3024974CC/CT/TT、rs324015AA/AG/GG在AR组和对照组,分布差异无统计学意义(P>0.05),提示在维族和汉族人群中,STAT6其他3个标签SNR与AR可能不相关。

4  变应性鼻炎影响因素的Logistic回归分析

将性别、年龄、民族、文化程度、婚姻、居住地、劳动强度、烟酒嗜好、既往过敏史和AR家族史纳入Logistic回归模型,分析与AR相关性,发现年龄、民族、文化程度、曾患过敏性疾病和本人或直系亲属有AR史,均为变应性鼻炎的影响因素。

讨论

与2004年[7]在乌鲁木齐地区调查结果相比,本次研究结果显示,无论维族或者汉族,乌鲁木齐地区的患病率,均高于喀什或伊犁人群的AR患病率。STAT基因码703817位点sNPs与维族变应性鼻炎密切相关,是影响该人群AR的重要易感侯选基因,而在汉族人群中未发现此关联。STAT6基因rs703817位点在3′非翻译区,它属于标签SNPs,还可代表rs841718的信息,其G/A多态性可能会影响STAT6基因表达和mRNA的稳定性,从而影响STAT6蛋白的循环表达量、信号传导,进一步改变STAT6的生物学功能,使得具有不同SNR特征人群变应性鼻炎的易感性呈现明显差异。多因素Logistic回归分析结果显示,年龄呈现为弱的AR保护效应,一般认为在生命早期,变应性因素对上呼吸道高反应性症状影响更为突出,随着年龄增长,非变应性囚素作用不断增强,非感染性非变应性鼻炎占的比重会不断增大。除年龄外,其他几个因素均为危险因素,汉族发生AR的危险是维族的2.67倍,这与伊犁、喀什和乌鲁木齐地区[7]横断面调查的结果相吻合。本研究发现,维汉人群AR与STAT6基因多态性的关联性不同,s703817位点sNP特征仅与维族人群AR相关,这在一定程度提示两民族人群AR易感性不同。不同文化程度人群AR发生危险不一致,小学文化者、中学和大专及以上者发生AR的风险为未上学者的3.98,2.11,2.18倍。曾经患过敏性疾病者发生AR的风险,为未患过者的2.“倍,直系亲属有AR者发生AR的危险是没有者的3,53倍。遗传因素、民族的易感性、过敏性疾病病史及文化程度都是变应性鼻炎的影响因素,变应性鼻炎综合防治措施的开展不容忽视。

参考文献

[1]Meltzer EO,Blaiss MS,Naclerio RM. Burden of allergic rhinitis:Allergies in America,Latin America,and Asia-Pacific adult surveys[J].Allergy and Asthma Proceedings,2012,(Suppl.1):S113-S141.

[2]Zhao J,Bai J,Shen K. Self-reported prevalence of childhood allergic diseases in three cities of China:a multicenter study[J].BMC Public Health,2010.551.

[3]Mir E,Panjabi C,Shah A. Impact of allergic rhinitis in school going children[J].Asia Pac Allergy,2012.93-100.

[4]Chapoval S,Dasgupta P,Dorsey NJ. Regulation of the T helper cell type 2 (Th2)/T regulatory cell (Treg) balance by IL-4 and STAT6[J].Journal of Leukocyte Biology,2010.1011-1018.

[5]Forbes E,van Panhuys N,Min B. Differential requirements for IL-4/STAT6 signalling in CD4 T-cell fate determination and Th2-immune effector responses[J].lmmunol Cell Biol,2010.240-243.

[6]《中华耳鼻咽喉头颈外科杂志》编辑委员会,中华医学会耳鼻咽喉科学分会. 变应性鼻的诊治原则和推荐方案(2004年,兰州)[J].中华耳鼻咽喉头颈外科杂志,2005.166-167.

[7]安杨,高丽,刘俊昌. 乌鲁木齐市成年人变应性鼻炎流行病学调查[J].中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志,2005.231-232.