脑脊液1433蛋白定量检测对散发性CreutzfeldtJakob病的诊断价值

脑脊液1433蛋白定量检测对散发性CreutzfeldtJakob病的诊断价值作者：于雪凡 ,林世和,孙瑞红    【摘要】  目的 探讨脑脊液1433蛋白定量检测对散发性CreutzfeldtJakob病（sCJD）的诊断价值。方法 采用Capture Assay方法定量检测14例sCJD患者（sCJD组）、10例痴呆患者（OD组）、12例非痴呆患者（ND组）脑脊液1433蛋白的含量。结果 脑脊液中1433蛋白含量中位数（MD）sCJD组为40.00 ng/mg,OD组为2.65 ng/mg,ND组为3.10 ng/mg;sCJD组脑脊液中1433蛋白含量明显高于OD组及ND组（均P＜0.01)。以脑脊液1433蛋白含量≥9 ng/ml为分界值时，其对sCJD诊断的敏感性为86.7%，特异性为86.4%，阳性预测值为81.3%，阴性预测值为90.5%。结论 应用Capture Assay方法定量检测脑脊液中1433蛋白含量对于临床可疑sCJD的患者有较高的敏感性和特异性。    【关键词】  CreutzfeldtJakob病；1433蛋白    Diagnostic value of quantitative test of 1433 protein in the cerebrospinal fluid in sporadic CreutzfeldtJakob disease  YU Xuefan, LIN Shihe, SUN Ruihong. Department of Neurology, the First Hospital of Jilin University, Changchun 130021, China    Abstract：Objective  To explore the diagnostic value of quantitative test of 1433 protein content in cerebrospinal  fluid (CSF) in sporadic CreutzfeldtJakob disease (sCJD).Methods  The Capture Assay was used to detect the level of CSF 1433 protein in 14 cases of sCJD (sCJD group), 10 cases of  other dementia (OD group), 12 cases of  non dementia (ND group). Results  The media of 1433 protein content was 40.00 ng/mg in sCJD group, 2.65 ng/mg in OD group, and 3.10 ng/mg in ND group,respectively. It was  significantly  higher in sCJD group than that in groups OD and ND（all P＜0.01). When the  cutoff point of 1433 protein content in CSF was ≥ 9 ng/ml , the sensitivity for diagnosis of sCJD was 86.7%, the specificity was 86.4%. The positive predictive value was 81.3% and the negative predictive value was 90.5%. Conclusion  The 1433 protein quantitative test by Capture Assay has a high sensitivity and specificity which supports a clinical diagnosis of sCJD.    Key words：CreutzfeldtJakob disease; 1433 protein CreutzfeldtJakob病 (CJD)确诊需经脑    组织病理检查发现异常朊蛋白(PrPsc)或实验动物传递成功。但脑组织活检不易被患者接受，而实验动物传递成功耗时较长，不能迅速作出诊断。因此,脑脊液(CSF)神经蛋白质的检测已成为CJD的研究热点。多数实验室研究［1］证实CSF 1433蛋白对于诊断CJD具有敏感性和特异性，因而现已作为CJD的临床诊断标准之一。目前临床上常用的Western Blot法检测1433蛋白不易量化。本研究采用Capture Assay方法定量检测散发性CJD（sCJD）患者CSF中1433蛋白，探讨其对sCJD的诊断价值。1  对象与方法    1.1  对象  系2002年1月～2005年10月我院神经内科住院和会诊患者３６例。（1）sCJD组：14例，男7例，女7例；年龄43～82岁，平均（61.2±12.1）岁；病程1～3个月，平均2个月。其中肯定sCJD 2例，很可能或可能sCJD 12例。急性起病2例，亚急性11例，慢性1例; 首发症状以记忆力减退及精神异常11例，伴肌阵挛发作8例，共济失调3例。临床表现均以痴呆为主，均无家族遗传史。11例脑电图检查，4例重度异常，表现为全导周期性高波幅三相尖慢综合波（PSWCS）发放，5例慢波改变，2例为轻度异常。（2）非CJD痴呆组（OD组）：10例，男4例，女6例；年龄44～72岁，平均（60±8）岁；其中Alzheimer病(AD）2例，血管性痴呆（VD）2例，帕金森综合征1例，皮质下动脉硬化性脑病2例，慢性酒中毒2例，白质脑病1例。简易精神状况检查（MMSE）量表平均为11分。（3）非痴呆组（ND组）：12例，男8例，女4例；年龄37～66岁，平均（57.2±7.6）岁。其中病毒性脑炎、GuillainBarre综合征及偏头痛各2例，脑神经瘫痪、脑囊虫病、脑出血、多发性硬化、短暂性脑缺血发作及颈髓外伤各1例。MMSE平均为26分。    1.2  方法    1.2.1  1433蛋白检测方法  留取入组者CSF 2 ml，采用 1433 蛋白捕捉试剂盒（德国 Repair Genic公司）, 利用1433蛋白能够与包含磷酸化识别位点的肽有高度亲和力的原理，化学合成的丝氨酸肽以共价键形式与微校板结合，利用脑内特有的多克隆1433γ型抗体来检测捕获的1433蛋白，进行定量分析［2］。阳性对照标准品（50 μg/ml）50倍稀释为1μg/ml，再进行倍比稀释，浓度分别为1000 ng/ml、500 ng/ml、250 ng/ml、125 ng/ml、62.5 ng/ml、31.25 ng/ml、15.6 ng/ml、7.81 ng/ml、3.90 ng/ml、1.95 ng/ml。以标准品不同浓度OD 450 nm值为纵坐标，以1433蛋白浓度为横坐标绘制标曲线，得出所测样品OD 450 nm在横坐标上浓度（ng/ml）。    1.2.2  统计学方法  数据分布为偏态时采用集中趋势用中位数(MD)及其95%可信区间（95%CI）表达，组间的比较用KruskalWallis渐进χ2检验。对于诊断结果的评价，用敏感性（Sensitivity）、特异性（Specificity）、准确率（Accuracy）及ROC曲线下的面积评价。统计学计算用SAS 6.12 软件完成。2  结  果    2.1  各组CSF 1433蛋白含量的比较  sCJD组CSF 1433蛋白含量（MD）为40.00 ng/ml（95%CI：5.5～155 ng/ml），明显高于OD 组［2.65 ng/ml（95%CI：0～9 ng/ml）］及ND组［3.10 ng/ml（95%CI：0～12 ng/ml）］（均P＜0.01）;OD组与ND组间差异无统计学意义。    2.2  CSF 1433蛋白定量检测对sCJD诊断的敏感性和特异性分析  肯定sCJD患者2例，CSF 1433蛋白含量分别为9 ng/ml及130 ng/ml；很可能sCJD患者7例，1433蛋白含量分别为105 ng/ml、48 ng/ml、155 ng/ml、130 ng/ml、9.5 ng/ml、40 ng/ml及13 ng/ml；可能sCJD患者5例，1433蛋白含量分别为57 ng/ml、10 ng/ml、9 ng/ml、5.5 ng/ml及70 ng/ml。以CSF中1433蛋白含量≥9　ng/ml为诊断sCJD的分界值时其准确率为86.5％，敏感性为86.7%，特异性为86.4%，阳性预测值81.3%，阴性预测值90.5%。若以≥5.5　ng/ml为诊断sCJD的分界值时准确率78.4%，敏感性为93.3%，特异性68.2%，阳性预测值66.7%，阴性预测值93.8%。3  讨  论    自从1996年采用CSF 1433蛋白检测作为CJD的临床诊断指标以来，不少学者对其敏感性和特异性提出质疑。有研究［3］发现CSF中发现1433蛋白对于诊断CJD的敏感性和特异性分别达到93%～97%和84%～100%，具有很高的阳性预测值。其中98%的病例经病理确诊为CJD，敏感性极高；而Geschwind等［4］对32例病理证实为CJD的患者CSF 1433蛋白进行检测，其敏感性为53%。本研究采用了蛋白捕捉方法，从CSF中定量分析1433蛋白，结果sCJD组1433蛋白含量明显高于OD及ND组。当以CSF 1433蛋白含量≥9 ng/ml作为诊断sCJD的分界值时，除了1例可能sCJD患者外，sCJD组均能与OD组区分开来。表明CSF 1433蛋白检测对于诊断sCJD有很高的敏感性和特异性。    目前尚不清楚1433蛋白在CJD中所起的作用及出现在CSF中的原因，一般认为大量神经元的破坏，而导致1433蛋白漏入到CSF中。本研究中14例sCJD患者中13例1433蛋白明显升高，考虑与病变快速进展有关。在ND组中病毒性脑炎患者CSF 1433蛋白含量呈一过性增高，其中1例为12 ng/ml，另1例为2.5 ng/ml，因病毒性脑炎临床背景与sCJD明显不同，可以准确区分开来； OD组CSF　1433蛋白含量均偏低，支持CSF 1433蛋白增高与急性脑损伤有关。因此在判定CSF　1433蛋白的意义时需结合临床情况，在病毒性脑炎、脑梗死、多发性硬化、一氧化碳中毒、副肿瘤综合征也呈一过性增高［5］。CJD较其他神经变性疾病显著升高，提示1433蛋白或许参与了CJD的致病过程［6］。    本研究中的sCJD患者中4例脑电图出现典型的PSWCS，此4例CSF 1433蛋白含量分别为105 ng/ml、48 ng/ml、155 ng/ml和130 ng/ml；脑电图表现为慢波或轻、中度损害的7例患者，其CSF 1433蛋白在9.5～70 ng/ml之间，虽有增高，但较脑电图出现PSWCS的患者为低，说明CSF　1433蛋白含量与神经细胞损伤程度有关。van Everbroeck等［7］在对250例可能sCJD患者CSF 1433蛋白检测中发现，病程较长患者1433蛋白水平反而逐渐减低，分析可能是病程短的患者，神经细胞损伤严重，疾病初期大量1433蛋白快速释放到CSF中［8，9］。本研究仅检测1次，未能作连续检测，因此尚不能确定CSF　1433蛋白含量与病程的关系。    本组经病理诊断的2例肯定sCJD患者，根据PrP基因129位点多形性分别为M129M、M129V型;CSF 1433蛋白含量分别为9 ng/ml、130 ng/ml。根据截点值可诊断为sCJD。此2例首发症状（1例共济失调，1例记忆力下降）、脑电图（1例为慢波，1例为PSWCS）、临床表现（２例除有痴呆和锥体束征，另1例还表现锥体外系、小脑症状、无动性缄默和肌阵挛）及CSF 中1433蛋白水平有明显不同。因此，考虑1433蛋白含量可能与sCJD的PrP基因表型有关。Castellani等［10］ 的研究发现，有典型CJD临床表现的sCJD患者CSF 1433蛋白较非典型sCJD更敏感；与本研究结果一致。我国绝大多数sCJD病例为M129M（即朊蛋白Ⅰ型），因此CSF 1433蛋白≥ 9 ng/ml对诊断sCJD有较高的敏感性和特异性，可作为诊断可疑sCJD的指标之一［11］。【参考文献】［1］于雪凡,林世和,赵珩.脑脊液1433蛋白对不同类型CreutzfeldtJakob病的诊断价值［J］.临床神经病学杂志,2006,19：77.［2］Green AJE, Sanja Ramijak, Werner EG, et al. 1433 in the cerebrospinal fluid of patients with variant and sporadic CreutzfeldtJakob disease measured using capture assay able to detect low levels of 1433 protein［J］. 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