急性脑梗死患者血小板钙含量的变化

急性脑梗死患者血小板钙含量的变化作者：薛慎伍，王辉，王娜，孙建辉    作者单位：250031山东济南，济南军区总医院神经内二科     【摘要】  目的 研究急性脑梗死患者血小板钙含量的改变，探讨前、后循环区脑梗死与血小板钙含量的关系。方法 采用流式细胞仪检测87例急性脑梗死患者（前循环区脑梗死40例、后循环区脑梗死47例）及20名健康体检者（正常对照组）外周血血小板钙含量，比较前循环区与后循环区脑梗死患者及与正常对照组的血小板钙含量。结果 急性脑梗死组血小板钙含量显著高于正常对照组（P<0.01）；前循环梗死组血小板钙含量显著高于后循环梗死组（P<0.05）。结论 急性脑梗死患者血小板钙含量显著增高，尤以前循环区脑梗死更明显。     【关键词】  脑梗死；血小板；钙；前循环；后循环    The change of content of the platelet calcium in patients with acute cerebral infarction  XUE Shengwu,WANG Hui,WANG Na,et al. Secondary Department of Neurology, Jinan Military General Hospital, Jinan 250031,China    Abstract：Objective  To study the change of content of  platelet calcium in patients with acute cerebral infarction. Explore the relationship between anterior and posterior circulation cereball infarction and the change of content of platelet calcium.Methods  The content of platelet calcium in venous blood were detected by flow cytometry in 87 patients  with acute cerebral infarction(40 cases of anterior circulation ,47 cases of posterior) and 20 health persons（normal control group）. The content of platelet calcium in venous blood of every group were compared.Results  In the group of acute cerebral infarction, the content of platelet calcium was significantly higher than that in the control group(P<0.01), the content of platelet calcium in the group of anterior circulation infarction was significantly higher than that in the group of posterior circulation infarction(P<0.05).Conclusion  The content of platelet calcium in patients with acute cerebral infarction is significantly high, and it is more significant in patients with anterior circulation infarction.    Key words：cerebral infarction;platelet;calcium;anterior circulation;posterior circulation   脑梗死患者血小板钙（Ca2+）含量的改变及其与不同循环区梗死的关系尚未见报道。本研究自2002年2月～2006年4月对87例急性脑梗死患者的血小板Ca2+含量进行观察，并探讨其与不同循环区域脑梗死的关系，现报告如下。1  对象与方法    1.1  对象  (1)脑梗死组：87例，均为男性；年龄68～83岁，平均75.5岁：病程1～6 h,平均4 h；符合全国第四届脑血管病学术会议修订的诊断标准，并经头颅CT或MRI检查证实。其中前循环脑梗死40例(皮质梗死13例，基底节区梗死21例，放射冠区梗死6例)，后循环脑梗死47例(脑桥梗死14例，枕叶梗死17例，中脑、丘脑梗死9例，小脑梗死7例)。 (2)正常对照组：20名健康体检者，均为男性，年龄67～78岁，平均72.5岁，经头颅CT或MRI检查均无异常。两组既往均无动脉炎和血小板疾病史，检测前两周无阿司匹林服用史。    1.2  方法    1.2.1  血小板Ca2+含量测定  脑梗死患者入院次日、正常对照组体检日早晨抽取肘静脉血2 ml，以2%乙二胺四已酸钠（EDTA）1:9抗凝，用不含Ca2+、Mg2+的磷酸盐缓冲液（PBS）2 ml清洗血小板，1500 r/min离心10 min，共2次；弃上清液，吸出沉积的血小板，用PBS稀释，调节血小板悬液490 μl和钙离子荧光指示剂(Fluo3/AM)液10 μl；两支试管均放置37℃孵育30 min，然后用PBS 2 ml漂洗，离心2次，均弃上清，最后加PBS 50 μl待检。应用FACScan型流式细胞仪(美国BD公司生产)，每份标本(包括Fluo3/AM染色管和无Fluo3/AM染色管)均收集20000个血小板，激光源为488 nm氩离子激光，取数之点图X轴取前向散射(FSC)，Y轴取侧向散射(SSC)；以组方图检测荧光强度：荧光素Fluo3强度为X轴，Y轴为血小板数。荧光散射强度（FL3H）以对数(1og值)放大。计算机存储检测数据。检测条件(包括染色时间、浓度、温度及电压等)保持稳定。以Cell Quest Plot软件(BD公司生产)分析每例样品Fluo3/AM染色管血小板荧光强度(D值)，计算每例血小板内Ca2+指数（IECa2+），IECa2+=Fluo3/AM染色管血小板荧光强度D值/无Fluo3/AM染色管血小板荧光强度D值×1000，表示血小板Ca2+含量。    1.2.2  统计学方法  检测数据以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用成组t检验。2  结  果    2.1  脑梗死组与正常对照组血小板Ca2+含量比较见表1。脑梗死组血小板Ca2+含量显著高于正常对照组(P<0.01)。    2.2  前循环梗死组与后循环梗死组血小板Ca2+含量比较  见表1。前循环梗死组血小板Ca2+含量显著高于后循环梗死组（P<0.05）。表1  急性脑梗死组与对照组血小板Ca2+含量比较注：与正常对照组比较*P<0.01；与后循环梗死组比较△P<0.053  讨  论    目前，非可兴奋细胞独特的Ca2+流动力学已引起广泛的关注。近年来，血小板Ca2+信号转导，尤其Ca2+内流的分子机制研究在许多方面都有重大突破，特别是电容性Ca2+内流通道的识别和模型的建立［1］。Ca2+在血小板活化中的中心作用最初是由于Ca2+在其他分泌细胞和收缩型细胞中充当刺激分泌和兴奋收缩偶联的关键调节物质而类推得出。其后从许多方面支持Ca2+对血小板活化的中心作用的推断。研究［2］发现，Ca2+载体可以触发类似于血小板天然配体作用于表面受体时的血小板反应，血小板受刺激时45Ca摄取增加；氯四环素荧光测定发现刺激诱发了细胞内钙池的释放。    一般情况下血小板活化时伴随着胞浆游离Ca2+浓度大幅度上升，Ca2+作为细胞内第二信使起调节酶类的功能状态和蛋白—蛋白间相互作用［3］。目前认为Ca2+引起血小板活化作用的机制有以下3个方面［4］：（1）Ca2+引起血小板活化的信号转导途径中尤其重要的两条是磷酸肌醇水解途径和花生四烯酸途径；（2）血小板Ca2+含量升高可使肌球蛋白轻链（MLC）发生磷酸化；（3）一种可被胞浆Ca2+激活的半胱氨酸蛋白酶—— calpain在血小板激活时参与蛋白水解过程。另外发现calpain抑制剂calpastatin可以特异性地阻断凝血酶诱导的α颗粒分泌及凝血酶诱导的血小板凝集反应。    本研究结果显示：脑梗死组血小板Ca2+含量显著高于正常对照组（P<0.01）。在脑梗死发生时血小板Ca2+增加引起脑损伤的机制有以下几个方面［5，6］：（1）血小板Ca2+大量超载，干扰线立体氧化磷酸化过程，使脑组织能量产生和供应障碍，加重脑缺血、缺氧损害程度。（2）细胞Ca2+水平增加激活酶类（依赖性酶类和磷脂酶类），引起细胞膜结构不稳，神经元骨架破坏导致细胞死亡。（3）细胞内Ca2+含量升高激活磷脂酶A2和磷脂酶C,产生大量游离脂肪酸、花生四烯酸代谢产物血栓素白三烯等加重脑损害，促使激活血小板内Ca2+增加，形成微血栓。（4）Ca2+增加可导致血管收缩、痉挛，血管阻力增加，延迟再灌注，使缺血灶扩大。    本研究还显示前循环脑梗死患者血小板Ca2+含量显著高于后循环梗死患者，这可能与引起前循环梗死区缺血性损害的血管大都是颈内动脉、大脑中动脉等主干动脉，影响血供范围大，导致脑梗死面积较大；而后循环梗死大都为椎基底动脉系统分支阻塞（或狭窄），梗死面积小，脑损害程度相对较轻有关［7，8］。但其确切机制仍需进一步研究。【参考文献】  ［1］Putney JW, Jr Broad LM,Braun FJ,et al. Mechanisms of capacitative calcium entry ［J］.T Cell Sci, 2001,114:2223.  ［2］Sage SO,Rink TJ. The kinetics of changes in intracellular calcium concentration in fura2loaded human platelets［J］.Bio Chem,1987,262：16364.  ［3］薛慎伍，张兆岩，李玮. 皮质下动脉硬化脑病患者外周血红细胞和血小板内钙离子含量的变化［J］.中国动脉硬化杂志，2004，12：713.  ［4］尤莉莉,戴禾敏. 血小板钙信号转导与应用［J］.中国医学研究与临床，2005，3：43.  ［5］Roll RL,Bauman EM, Bennett JS,et al. Phosphorylated pleckstrin induces cell spreading via an integrin dependent pathway［J］.Cell Biol,2000,150:1461.  ［6］Zabe M,Dean WL. Plasma membrane Ca2+ATPPase associates with the cytoskeleton in activated platelets through a PDZbinding domain［J］. Biol Chem,2001,276：14704.  ［7］陈芷若.脑梗死临床分型诊断［J］ .临床神经病学杂志,2005,18:99.  ［8］黄如训，郭玉璞.脑卒中的分型分期治疗建议草案［Ｊ］.临床神经病学杂志,2001,14:60.