脑出血患者血小板CD62p、CD42b表达及血浆 血栓素B2、6酮前列腺素F1a和血管性假血友病因子水平的变化及其意义

脑出血患者血小板CD62p、CD42b表达及血浆 血栓素B2、6酮前列腺素F1a和血管性假血友病因子水平的变化及其意义作者：高向东,刘庆新,靳晓华    作者单位：250200章丘市人民医院神经内科（高向东，靳晓华）；山东滨州医学院附属医院神经内科（刘庆新）    【摘要】  目的 研究脑出血患者血小板CD62p、CD42b表达及血浆血栓素B2(TXB2)、6酮前列腺素F1a(6ketoPGF1a)和血管性假血友病因子(vWF)水平的变化及其意义。方法 对46例高血压脑出血患者（脑出血组）发病后<3 d、1周、2周及20例高血压患者（对照组），用流式细胞仪检测血小板CD62p、CD42b表达，酶联免疫吸附法检测血浆TXB2、6ketoPGF1a和vWF的水平,并分析脑出血患者血小板CD62p、CD42b表达与血浆vWF水平的相关性。结果 在发病后<3 d、1周及2周，脑出血组血小板CD62p表达和血浆TXB2、vWF水平及TXB2/6ketoPGF1a（T/K）比值均明显高于对照组(均P<0.01)。血小板CD42b表达和血浆6ketoPGF1a水平均明显低于对照组(均P<0.01)。脑出血患者血小板CD62p表达与血浆vWF水平呈正相关(r=0.56,P<0.01)，血小板CD42b表达与血浆vWF水平呈负相关(r=-0.60,P<0.01)。结论 脑出血患者出现血小板CD62p表达和血浆TXB2、vWF水平升高，血小板CD42b表达和血浆6ketoPGF1a水平降低。提示脑出血后有明显血管内皮功能障碍及血小板活化。    【关键词】  脑出血；血小板活化；血管内皮细胞    Changes and its significance of expression  of platelet CD62p, CD42b and the levels of plasma TXB2 ,6ketoPGFla and vWF in patients with intracerebral hemorrhage  GAO Xiangdong,LIU Qingxin,JIN  Xiaohua.Department of Neurology,Zhangqiu Peoples Hospital, Zhangqiu 250200, China    Abstract：Objective  To investigate the changes and its significance of expression  of platelet CD62p,CD42b  and the levels of plasma TXB2, 6ketoPGFla and vWF in patients with intracerebral hemorrhage.Methods  46  patients with intracerebral hemorrhage were included as the intracerebral hemorrhage group,while 20 patients with  hypertension were served as the control group.Platelet CD62p and CD42b were measured by flow cytometry,and plasma TXB2,6ketoPGF1a and vWF were measured by ELISA at less than 3 day,1   and 2 weeks after onset. The analysis of dependablit were made between the expression of platelet    CD62p,CD42b  and the level of plasma vWF in patients with intracerebral hemorrhage.Results  At less than 3 day,1   and 2 weeks after onset,the expression  of platelet CD62p,levels of plasma TXB2,vWF and TXB2/6ketoPGFla (T/K) in patients with intracerebral hemorrhage   were significantly higher than those in the control group(all P<0.01).But the expression  of platelet  CD42b and levels of 6ketoPGF1a in the patients with      intracerebral hemorrhage were significantly lower than those in the control group(all P<0.01). The levels of CD62p was positively correlated with vWF (r=0.56,P<0.01)and CD42b was negatively correlated with vWF(r=-0.60,P<0.01) in patients with intracerebral hemorrhage.Conclusions  The levels of CD62p, TXB2,vWF in patients with intracerebral hemorrhage are significantly higher while the levels of CD42b and 6ketoPGF1a are significantly lower. Its suggested  that endothelium functional impairment and platelet activation occur in the patients with intracerebral hemorrhage.    Key words：intracerebral hemorrhage; platelet activation; vascula endothelium    近年研究［１］证明，血小板参与了脑出血后继发性脑损伤，血小板功能在脑出血中的作用日益受到重视。血管内皮细胞在调节脑血流动力学以及维持血脑屏障方面起着重要作用［2］。本研究观察脑出血患者血小板CD62p、CD42b表达和血浆血栓素B2(TXB2)、6酮前列腺素F1a(6ketoPGF1a)和血管性假血友病因子(vWF)水平的变化，并探讨其意义。1  对象与方法    1.1  对象  （1）脑出血组：系2003年1月～2004年10月在我科住院治疗的46例高血压脑出血患者，男29例，女17例；年龄37～75岁，平均（54.3±10.1）岁；病程均＜72 h；均符合全国第四届脑血管病学术会议修订的诊断标准，均经颅脑CT或MRI检查证实;脑出血量20～60 ml，平均（38.9±7.8）ml;排除混合性卒中或出血性梗死,以及合并严重心、肝、肾功能衰竭、糖尿病、严重肺部感染者。（2）对照组：系同时期门诊高血压患者20例，男13例，女7例；年龄35～70岁，平均（55.6±10.6）岁；病程1.2～25年；平均(13±5.6)年。    1.2  方法    1.2.1  血小板CD62p、CD42b表达检测  脑出血患者入院后即刻(未治疗前)、发病后1周、2周，对照组于门诊时采取静脉血8 ml， 1.8 ml血置于含0.2 ml 3.8%枸橼酸钠抗凝剂离心管中，混匀。用流式细胞术检测血小板CD62p和CD42b的表达。异硫氰酸荧光素（FITC）标记的鼠抗人CD42b单克隆抗体、藻红蛋白(PE)标记的鼠抗人CD62p单克隆抗体购于美国BD公司，流式细胞仪（FACSvantage）为美国BD公司产品。    1.2.2  血浆TXB2、6ketoPGF1a、vWF检测  取 4 ml不抗凝血，分离血清，用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆TXB2、6ketoPGF1a和vWF水平，TXB2、6ketoPGF1a和vWF试剂盒购于苏州医学院血栓与止血研究室,按试剂盒说明书的方法检测。    1.2.3  统计学方法  采用SPSS 10.0统计软件进行分析。检测数据以均数±标准差(±s)表示，组间均数比较采用t检验；血小板CD62p、CD42b表达与血浆vWF含量的相关性分析采用直线相关回归法。2  结  果    2.1  脑出血组血小板CD62p、CD42b表达变化  见表1。脑出血组血小板CD62p表达在发病<3 d即明显升高［（14.2±3.9）%］,1周时达到高峰［（16.5±4.7）%］,2周时下降［（11.5±2.6）%］, 但仍明显高于对照组［（9.2±1.6）%］(均P<0.01)。血小板CD42b的表达在脑出血<3 d时明显降低［（74.6±5.9）%］，1周时最低［（69.4±6.8）%］，2周时有回升［（77.4±5.8）%］，均明显低于对照组［（81.6±3.1）%］（均P<0.01）。    2.2  脑出血组血浆TXB2、vWF、6ketoPGF1a水平变化  见表2。 脑出血组血浆TXB2、vWF在发病<3 d时即明显升高，1周时达高峰，2周时下降，均明显高于对照组(均P<0.01)。血浆6ketoPGF1a水平在脑出血发病<3 d时明显降低，1周时最低，2周时有所回升，均明显低于对照组 (均P<0.01)。脑出血组各时段血浆TXB2与6ketoPGF1a（T/K）比值均显著高于对照组(均P<0.01)，以发病1周时最高。表1  脑出血组血小板CD62p、CD42b表达的动态变化 注：脑出血组各时段与对照组比较均P<0.01表2  脑出血组血浆TXB2、vWF、6ketoPGF1a水平的动态变化注：脑出血组各时段与对照组比较均P<0.01    2.3  脑出血患者血小板CD62p、CD42b表达与血浆vWF水平的关系  脑出血患者血小板CD62p表达与血浆vWF水平呈正相关(r=0.56,P<0.01)；血小板CD42b表达与血浆vWF水平呈负相关(r=-0.60,P<0.01)。3  讨  论    血管内皮细胞是血脑屏障的重要组成部分，血管内皮功能障碍可导致血脑屏障通透性增加及微循环障碍，加重脑水肿。vWF是一种高分子糖蛋白，由血管内皮细胞和巨核细胞合成，当血管内皮细胞受损时，vWF释放增多，其血浆水平可反映血管内皮功能的状态，是目前公认有价值的血管内皮损伤的标志物［3］。TXB2和6ketoPGF1a为血栓素A2(TXA2)和前列腺素(PGI2)的稳定代谢产物， TXA2和PGI2是在氧化酶作用下由花生四烯酸转化而来的重要的血管活性介质。TXA2具有较强的血小板聚集和血管收缩作用, PGI2作用与TXA2相反，具有强烈的扩血管和抑制血小板聚集的作用，正常情况下血管内皮细胞分泌的PGI2与血小板分泌的TXA2之间保持平衡。内皮损伤时，血管内皮细胞分泌的PGI2减少，其代谢产物6KetoPGF1a的血浆水平降低。因此，6KetoPGF1a 水平和T/K比值变化能间接反映血管内皮细胞的功能状况。本研究发现：与对照组比较，脑出血组的血浆vWF水平、T/K比值增高，血浆6KetoPGF1a水平下降，表明脑出血患者有明显的血管内皮损伤。对脑出血患者发病后的动态观察发现：血管内皮功能障碍在脑出血后3 d内即出现，1周时达到高峰，与脑水肿达到高峰的时间基本一致，提示脑出血后血管内皮功能障碍参与了脑出血的病理生理过程。    CD62p和CD42b两者都是活化血小板特异性的糖蛋白分子标志物，是体内血小板活化的敏感指标［4,5］,但两者反映血小板活化的途径及功能不同。血小板活化时，CD62p表达量增加，可加强细胞间黏附及炎性细胞浸润；血小板活化时血小板CD42b表达量减少，可促进血小板释放5羟色胺和血小板源性生长因子(PDGF)等，导致脑血管收缩。用流式细胞术双标记技术同时检测血小板CD62p和CD42b的表达量，可以快速、准确、定量分析血小板的黏附、聚集和释放等功能。本研究发现，脑出血患者发病早期（3 d）血小板CD62p表达即明显增高，CD42b表达明显降低，表明脑出血患者出现血小板活化现象。血小板的活化程度在脑出血后第1周达到高峰，第2周时仍明显高于对照组。脑出血组患者血小板CD62p表达与血浆vWF水平呈正相关(r=0.56,P<0.01)，而血小板CD42b表达与血浆vWF水平呈负相关(r=-0.60,P<0.01)。表明脑出血患者血小板的活化程度与血管内皮损害程度有关。其机制可能是血管内皮损伤，胶原暴露刺激血小板活化，活化的血小板参与缺血、炎性反应，又进一步加重血管内皮细胞功能障碍，从而引起血管内皮细胞损伤的链级瀑布式反应［6］。【参考文献】  ［1］林杰，张国华，史福平，等.脑出血患者急性期血小板活化的临床意义［Ｊ］.临床神经病学杂志,2006,19:385.  ［2］吕鹤,刘冉,张巍.血管内皮细胞病变与中枢神经系统疾病［J］.中风与神经疾病杂志,2005,4:187.  ［3］Lip GYH,Blann AD.Von willebrand factor:a marker of endothecial dysfuction in vascular disorder［J］? 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