分泌性中耳炎患儿腺样体组织中CD+4、CD+8表达及CD+4/CD+8值的变化

　　作者：张淑君，岳卓立，马桂琴，尹桂茹 作者单位：承德医学院附属医院耳鼻咽喉科

　　【摘要】 目的 探讨儿童肥大腺样体T淋巴细胞亚群免疫失衡与反复发作性分泌性中耳炎的关系。方法 72例反复发作性分泌性中耳炎组患儿及30例单纯腺样体肥大组患儿腺样体组织，采用免疫组化方法检测T淋巴细胞CD+4、CD+8的表达并计算CD+4/CD+8值，分析2组间是否有差异。结果 反复发作性分泌性中耳炎组患儿腺样体组织中CD+4、CD+8细胞数及CD+4/CD+8值分别为42±9，20±7，2.10±0.17，高于单纯腺样体肥大组16±8，11±6，1.39±0.15，差异有统计学意义(P<0.01);其中CD+4细胞数明显多于CD+8细胞数。结论 反复发作性分泌性中耳炎的形成与T淋巴细胞亚群免疫失衡有关。

　　【关键词】 中耳炎，分泌性;腺样体;CD+4;CD+8;儿童

　　The expression of CD+4 and CD+8 and value of CD+4/CD+8 in children adenoids tissues with secretory otitis media ZHANG Shujun,YUE Zhuoli,MA Guiqin,et al.Department of Otolaryngology,the Affiliated Hospital of Chengde Medical College,Chengde,Hebei 067000,China

　　【Abstract】 Objective To investigate the relationship between immunity unbalance of T lymphocyte subsets and recurrent of secretory otitis media(SOM).Methods 72 cases of SOM and 30 cases of the adenoids hypertrophy were screened and the adenoids hypertrophy tissue samples were studied by immunohistochemical method.Results There were large number of CD+4 and CD+8 cells in recurrent SOM tissue samples.The CD+4,CD+8 and CD+4/CD+8 in recurrent SOM tissue samples were 42±9,20±7 and 2.10±0.17 respectively,which is significantly higher compared with that of tissue samples without SOM(16±8，11±6，1.39±0.15 respectively) (P<0.01).The expression of CD+4 T lymphocyte was obviously higher than CD+8.Conclusion The formation of SOM is relevant to the unbalance of T lymphocyte immunity.

　　【Key words】 Media otitis,secretory;Adenoida;CD+4;CD+8;Child

　　腺样体是咽淋巴内环的组成部分，长期以来腺样体被认为是分泌性中耳炎(secretory otitis media，SOM)一个非常重要的病因，但它引起SOM的发病机制及相关的免疫病理生理学改变至今仍未完全阐明。本研究通过免疫组化方法对SOM患儿腺样体组织中CD+4、CD+8细胞和CD+4/CD+8的测定，探讨T淋巴细胞介导的局部免疫反应与反复发作性分泌性中耳炎的关系。

　　1 资料与方法

　　1.1 临床资料 收集2003—2005年承德医学院附属医院耳鼻咽喉科患儿腺体切除标本102例，男58例，女44例，年龄3～14岁，中位数8.5岁，其中反复发作性SOM伴腺样体增生组72例(中耳炎发作次数大于3次,反复发作组)，患儿声阻抗测试B型或C型;单纯腺样体肥大组(无中耳炎病史)30例，2组患儿术前均经纤维鼻咽镜检查和影像学检查(鼻咽CT)证实为腺样体肥大, 腺样体大小的评价标准根据腺样体组织团块占鼻咽腔空间大小，纤维鼻咽镜下将其划分为4度[3]，根据纤维鼻咽镜检查的结果将反复发作组72例分为2度阻塞31例，3度阻塞22例，4度阻塞19例;单纯腺样体肥大组30例分为3度阻塞11例，4度阻塞19例。2组患儿均无变应性鼻炎、哮喘、阿司匹林特异反应性、支气管扩张、自身免疫性疾病等典型病史，近期(2周内)无急性呼吸道感染及类固醇药物应用史。

　　1.2 检测方法 将切下的腺样体组织以福尔马林固定石蜡包埋切片、采用SP免疫组化法进行检测。SP试剂盒和鼠抗人CD4、CD8单抗均购自北京迈新生物公司。石蜡切片脱蜡和水化,柠檬酸盐缓冲液微波修复15 min，室温20 min,加过氧化酶阻断溶液室温10 min,加非免疫动物血清室温10 min,加第一抗体4℃过夜,加生物标记二抗室温10 min,加链霉菌抗生物素—过氧化物酶溶液室温10 min。每步后均经PBS洗5 min计3次。DAB显色、苏木素复染，脱水干燥、透明、封片。

　　1.3 观察指标 每个腺样体组织切片经CD4、CD8、免疫组化后，用400倍显微镜观察10个视野细胞数取其平均值。

　　1.4 统计学方法 计量资料以±s表示，组间比较采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结 果

　　反复发作组患儿腺样体组织中可见大量CD+4、CD+8细胞，CD+4细胞明显多于CD+8细胞，CD+4与CD+8细胞数及CD+4/CD+8比值均高于腺样体单纯肥大组，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。表1 2组CD+4、CD+8细胞数及CD+4/CD+8比值比较 注：与单纯肥大组比较，*P<0.01

　　3 讨 论

　　SOM是儿童常见病，也是听力损失的最常见病因，尤其是反复性中耳炎和持续性中耳炎，这种发育期间的听力损失将导致儿童的言语、教育及心理发育障碍。肥大的腺样体通常被认为是引起SOM的重要原因，其主要机制包括：(1)肥大腺样体引起咽鼓管机械阻塞或功能障碍;(2)腺样体表面隐窝可储存微生物。Suzuki等[2]证实腺样体是鼻咽部致病微生物的“储蓄池”。(3)免疫异常。腺样体位于鼻咽部，是机体的免疫器官，含有各个发育阶段的T淋巴细胞、B淋巴细胞、浆细胞、吞噬细胞及树突状细胞等免疫细胞，具有与外周淋巴器官相似的免疫调节机能，对各种变应原能发挥体液免疫和细胞免疫作用。腺样体是咽淋巴环的一部分，出生后即发育成熟，3～6岁儿童腺样体作为局部免疫组织对保护呼吸道的作用较为活跃，6岁后机体免疫系统逐渐发育完善,腺样体局部免疫功能未出现明显增强,而是转移到其他致病器官发挥破坏作用。当腺样体内出现异常的免疫反应可影响到中耳或咽鼓管的开放，最终导致SOM出现。Ratomski等[3]通过流式细胞学方法对SOM患儿腺样体组织研究发现，CD+4/CD+8细胞百分比及CD+4细胞亚群上的CD28荧光强度均值在SOM组明显高于单纯腺样体肥大组,CD+8/CD+28和CD+19/CD+28细胞百分比及荧光强度均值差异无统计学意义;StasiakBarmuta等[4]通过流式细胞学方法对SOM患儿外周血中表达CD69、HLADR分子的CD+4、CD+8及NK细胞亚群的百分比研究发现，T淋巴细胞免疫缺陷可能是反复发作SOM的原因之一。

　　本结果发现，反复发作SOM患儿腺样体组织中CD+4、CD+8细胞数较单纯腺样体肥大组高，CD+4明显多于CD+8细胞且CD+4/CD+8比值增大。在病理状况下，腺样体局部受到其表面微生物刺激，引起腺样体的淋巴组织增生，当腺样体局部受到致病原的刺激，通过抗原递呈细胞(antigen presenting cell，APC)的加工处理，使T辅助细胞得以识别和活化，CD+4细胞增多，CD+4分子增强对MHCII类抗原的结合能力，分泌细胞因子，增加和扩大免疫应答过程;CD+8分子则增强对MHCI类抗原的结合能力，CD+8主要表现为杀伤作用，能抑制B淋巴细胞和Th细胞的功能，抑制抗体的产生。近年来腺样体免疫细胞的研究表明，腺样体免疫活性物质对SOM的发病有重要意义。有学者证实腺样体过度免疫应答可释放炎性介质，如前列腺素、组织胺、白细胞三烯、血小板激活因子等，它们能增加血管的通透性进而引起咽鼓管和中耳黏膜水肿，造成SOM。本组72例患儿中2度阻塞31例，3度阻塞22例，4度阻塞仅19例，提示SOM与腺样体肥大程度不呈正相关，这也和Gates[5]的报道一致,我们在临床中也观察到此种情况：并非所有腺样体肥大的患儿均患SOM，且很多4度腺样体肥大的患儿仅表现为打鼾和(或)鼻窦炎。由此可以推测，肥大的腺样体的局部免疫功能失调，导致炎性介质的持续释放，这可能是引起反复发作性SOM的主要机制。这可为SOM患儿进行腺样体切除治疗提供理论依据。

　　【参考文献】

　　1 Cassano P,Gelardi M,Cassano M,et al.Adenoid tissue rhinopharyngeal obstruction grading based on fiberendoscopic findings:a novel approach to therapeutic management[J].Int J Pediatr Otorhinolaryngol,2003,67(12):1 3031 309.

　　2 Suzuki M,Watanabe T，Mogi G.Clinical,bacteriological, and histological study of adenoids in children[J].Am J Otolaryngol,1999,20(1):8590.

　　3 Ratomski K,ZelazowskaRutkowska B,Wysocka J,et al.Expression of adhesion molecule CD28 on subpopulations of lymphocytes in hypertrophied adenoids in children with otitis media with effusion[J].Otolaryngol Pol,2006,60:873877.

　　4 StasiakBarmuta A,Stankiewicz W,ZielnikJurkiewicz B,et al.Aspects of biological activity of T and NK lymphocytes in children with adenoid hypertrophy and concomitant otitis media with effusion[J].Pol Merkur Lekarski,2005,19(111):265268.

　　5 Gates GA.Adenoidectomy for otitis media with effusion[J].Ann Otol Rhinol Laryngol,1994,103：5457.