鼻息肉上皮中血管活性肠肽和P物质表达的初步研究

　　作者：薛刚 吴靖芳 作者单位：河北北方学院组胚教研室尚小领

　　【摘要】 目的: 探讨人鼻息肉组织中SP和VIP的表达及意义。方法: 采用HE染色、PAS染色和免疫组化方法检测人鼻息肉组织的病理变化及SP和VIP表达。结果：鼻息肉黏膜均有不同程度的改变，实验组与对照组相比基膜明显增厚(P<0.01);A、C组差别显著(P<0.05)。实验组黏液腺面积与对照组相比差别显著(P<0.01)。SP和VIP免疫反应阳性结构均呈棕黄色，二者在实验组与对照组分布相似。SP阳性纤维分布于血管、腺体周围，可见散在的圆形或椭圆型阳性细胞，部分黏膜下腺体上皮细胞也呈SP阳性;但实验组阳性纤维和细胞明显稀疏。VIP阳性纤维和细胞位于黏膜腺体、血管周围以及部分黏膜上皮和黏膜下腺上皮细胞胞质中，但实验组中VIP阳性纤维着色较深，密度增加。结论：SP和VIP在鼻息肉形成中具有重要的作用。

　　【关键词】 鼻息肉; 血管活性肠肽; P物质; 组织化学; 免疫组织化学

　　Histochemical and Immunohistochemical Study of Chronic Sinusitis and Nasal Polyps

　　XUE Gang，WU Jing-fang，SHANG Xiao-ling，et al.

　　The First Affiliated Hospital，Hebei North University，Zhangjiakou, 075000, China

　　【ABSTRACT】 Objective: To investigate the expression and signi ficance of the SP and VIP in nasal polyp. Methods: The pathologicalcharacteristic and expression of the SP and VIP in nasal polyp were studiedby hematoxylin and eosin(HE),periodic acid schiff(PAS) and immunohistochemicalstaining method. Results: There were different changes in mucosain experiment group. The basement membrane was thickened as compared with control group(P<0.01). There were significant difference between group A and C ( P<0.05). The area of mucous glands experiment group were obviously increased compared with control group. The SP and VIP immunoreactive material were brown. They were similar between the control and experimentgroups. SP immunoreactive positive fiber were distributed near the vascular andgland. There were some positive cells shaped as round or ovoid, and epithelia of gland in submucosa . But there were less SP positive material in the experimentgroup. The VIP fibers and cells were mainly to be found in the close proximity tothe submucosal glands and fairly close to the vessels. The plasma in the part ofmucosa and submucosal glands epithelia were VIP immunoreactive positive. There werethicker color and higher density of VIP positive structure in experiment!group.Conclusion: SP and VIP might play significant roles in the patho genesis of nasal polyp.

　　【KEY WORDS】 nasal polyp; vasoactive intestinal peptide(VIP);substance P(SP); histochemistry; immunohistochemistry

　　鼻息肉是耳鼻喉科的常见病，病因复杂，发病机理至今仍不清楚。多年来认为与变态反应及感染关系密切。

　　随着免疫学和分子生物学的发展，人们认识到鼻息肉的发病是多因素、多步骤的过程。最近发现多种细胞因子在其中存在并影响其发生及病理变化。但在此过程中肽类物质SP、VIP在鼻息肉中的分布及意义，国内外未见报道。本研究旨在通过组织化学和免疫组化技术对不同组别鼻息肉组织中基膜厚度、黏液腺面积、SP和VIP阳性物质的分布及变化进行初步研究，探讨它们在鼻息肉形成中的作用，为鼻息肉的临床诊断、治疗和预防提供理论依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料来源 实验组30例，男22例，女8例;标本来源于2002.1～2003.10月间就诊于我院并接受鼻内镜手术治疗的患者，留取鼻息肉标本。根据1997年海口会议慢性鼻窦炎、鼻息肉临床分型分期标准[1]，分为三组，A组：Ⅱ型1期10例，男7例，女3例，年龄16～52岁，平均29岁;B组：Ⅱ型2、3期10例，男6例，女4例，年龄18～65岁，平均37岁;C组：Ⅲ型10例，男9例，女1例，年龄27～68岁，平均41岁。以上各组病例均除外有哮喘、囊性纤维化和全身免疫性疾病，且治疗前1个月未使用激素、抗组胺类药物。

　　对照组10例，男6例，女4例;年龄22～49岁，平均35岁。取同一时期行鼻中隔偏曲矫正术患者的筛窦黏膜，并经鼻窦CT扫描证实非慢性鼻窦炎、鼻息肉各型患者。

　　1.2 检测方法 术中所取行鼻中隔偏曲矫正术患者的筛窦黏膜标本和鼻息肉标本，经10%中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续切片4张，片厚5μm。每例分别行HE染色病理诊断、PAS染色和链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶(streptavidin-peroxidase, SP)免疫组化技术检测SP和VIP。SP和VIP多克隆抗体和SP试剂盒来自中山公司。参照说明进行免疫组化染色，DAB显色，苏木精复染细胞核。

　　每张切片在10倍物镜下随机选取5个视野，测量基膜厚度、计数黏液腺体的面积，以均数±标准差表示。免疫组化：观察SP、VIP免疫阳性信号的分布。

　　1.3 统计学处理 应用SPSS10.0版统计软件包中单因素方差分析、t检验及相关分析处理数据。

　　2 结果

　　2.1 鼻息肉黏膜形态学特点 HE染色：正常筛窦黏膜表面光滑，上皮为假复层纤毛柱状上皮，基膜完整，炎细胞少，腺体和导管无增生扩张。各型鼻息肉黏膜均有不同程度的改变，黏膜上皮可有多种类型，以B组最明显，假复层纤毛柱状上皮增生变厚，杯状细胞增多，基膜增厚，部分病例有鳞状上皮或复层柱状上皮化生;间质水肿、炎细胞浸润、黏液腺体增生，分泌物较多，纤维组织增生。C组以基膜增厚和间质纤维化最明显。

　　2.2 基膜厚度和黏液腺体的改变 PAS染色显示：杯状细胞胞质和上皮基膜均为红色，清晰可见。对照组基膜厚度(9.04±1.13)μm，A组基膜厚度(14.37±1.06)μm，B组基膜厚度(15.71±1.30)μm，C组基膜最厚(21.02±2.13)μm。与对照组相比，各实验组基膜明显增厚，(P<0.01)。三组鼻息肉基膜相比，A、C组差别显著(P<0.05)，其余组间无明显差别。

　　黏液腺体改变：各实验组黏液腺增生，腺腔扩大，分泌旺盛，其中C组出现黏液潴留，黏液囊肿形成。用目镜测试网格(0.5mm×0.5mm)，测得各组黏液腺体的面积(x+s)：A组为(0.143±0.064)mm2，B组为(0.187±0.072)mm2，C组为(0.129±0.042)mm2，对照组为(0.081±0.037)mm2，对照组黏液腺非常少。实验组与对照组相比差别显著(P<0.01)。各实验组两两相比，A、B和B、C组间差别显著(P<0.05)，其余各组无明显差别。

　　2.3 免疫组化观察 实验组SP阳性物质与对照组分布相似，在黏膜层血管、腺体周围可见较多棕黄色丝状SP-IR阳性结构，密度较高，呈丛状分布，并有神经末梢伸入腺泡细胞间隙中。黏膜阳性纤维无明显膨体存在，尚可见圆形或椭圆型阳性细胞，胞质棕黄色;部分黏膜下腺体上皮细胞也呈SP阳性。实验组中SP阳性纤维和细胞明显稀疏。VIP免疫反应阳性结构亦呈棕黄色，在对照组和实验组分布相似，位于管状黏膜腺体胞浆和血管周围，部分上皮细胞和腺上皮也呈VIP-IR阳性，但实验组中VIP阳性纤维着色较深，密度增加。

　　3 讨论

　　本研究中鼻息肉各组黏膜上皮出现假复层纤毛柱状上皮、复层柱状上皮、单层柱状上皮、鳞状上皮等，可能是黏膜不断损伤、修复化生的结果，上皮细胞增殖增强其意义不只在于修复，更重要的是通过主动和分泌多种细胞因子，参与对黏膜炎症反应的调节。间质水肿、炎细胞浸润、黏液腺体增生、分泌物较多，纤维组织增生。这些变化是鼻息肉的主要病理学特点，也是鼻息肉形成的重要条件或一个重要的诱因。

　　2005年2月 河北北方学院学报(医学版) 第1期上皮基膜增厚，胶原纤维增生、纤维化是慢性鼻窦炎、鼻息肉常见的病理改变。本研究观察到上皮基膜增厚，三组基膜相比，A、C组差别显著。与Norlander的报道：家兔的慢性鼻窦炎模型中黏膜水肿、炎细胞浸润、晚期基膜增厚等[2]基本一致。其中C组基膜增厚、纤维结缔组织增生最为突出，结合临床考虑这是因为C组病例均为慢性鼻窦炎、鼻息肉Ⅲ型患者，有明显的反复发作和前期手术病史，黏膜纤维组织不断增生、修复，从而使黏膜局部增厚、韧性增加;说明基膜增厚、间质胶原纤维增生、纤维化的程度与慢性鼻窦炎鼻息肉黏膜的破坏与修复程度一致，并与临床病变性质和严重程度相吻合。

　　各组鼻息肉黏液腺增生，腺腔扩大，其中C组则出现黏液潴留，黏液囊肿形成。这些变化是腺体对长期慢性炎症刺激的一种反应，Tos发现一定量的黏液及其抗菌成份对抵抗致病因子、保护和促进纤毛活动有重要作用[3]。但是，具有抗菌作用的溶菌酶和乳铁蛋白只有浆液腺细胞才能分泌。本研究显示黏液腺增生，腺腔扩大，分泌旺盛，使浆液腺相对减少，黏液粘稠度增加，随之导致其中溶菌酶和乳铁蛋白等减少，影响纤毛细胞的功能，可能与上皮化生有关。

　　本实验中SP阳性结构与Kuhn的报道[4]一致。SP是重要的感觉神经递质，在很多组织中含量丰富，过量释放可引起鼻黏膜分泌亢进，同时促进血管扩张、通透性增加。本实验中SP免疫反应阳性纤维减少，可能是因为SP纤维大量释放神经递质，从而导致血管扩张、通透性增加，息肉水肿形成。结合鼻息肉的组织学特点，我们认为鼻息肉中间质水肿、黏液腺体增生、分泌旺盛与SP纤维关系密切。部分粘膜下腺体上皮细胞呈SP阳性，提示其分泌可能受SP阳性纤维的调节。而黏膜下层散在的SP阳性细胞有待于进一步研究。

　　血管活性肠肽可以调节腺体分泌，VIP释放增加可促进血管的慢性充血和腺体的高分泌，加重鼻塞症状。Baraniuk[5]在对人鼻黏膜移植培养实验中发现：运用VIP可以刺激浆液性腺泡分泌乳铁蛋白。本实验中鼻息肉黏液腺体增加，乳铁蛋白相对减少，考虑与组织病理学结果中上皮化生、纤毛减少有关。我们的研究发现VIP阳性纤维着色较深，密度增加，与有关报道相似：过敏性鼻炎患者血浆VIP增加，黏膜下腺体周围VIP阳性纤维密度增加，染色增强，与肥厚性鼻炎和过敏性鼻炎形成有关[6]。亦有研究发现鼻息肉和鼻黏膜组织管状腺细胞胞质、上皮和黏膜下腺体中VIP受体阳性，为VIP调节腺体分泌提供依据[7]。本研究提示鼻息肉发生发展可能与VIP作用于相关受体有关。但其病理生理机制待进一步研究。

　　【参考文献】

　　1 中华医学会耳鼻咽喉科学分会，中华耳鼻咽喉科杂志编辑委员会. 慢性鼻窦炎鼻息肉临床分型分期及内窥镜鼻窦手术疗效评定标准(1997，海口)[J]. 中华耳鼻咽喉科杂志，1998，33(2)：134

　　2 Norlander T , Shimizu T , Larsen P, et al . Early stages in the development of goblet cells in the paranasal sinuses :a multimethodological study in the rabbit[J]. Acta Otolaryngol ,1998,118:114-123

　　3 Tos M. Factors influencing the goblet cell density in paranasal sinuses[J]. Acta Otolaryngol Suppl, 1988,458:17-21

　　4 Kuhn AG, Arnold W. Expression of vasoactive intestinal peptide, substance P and bombesin-flanking peptide in nasal polyps[J]. ORL J Otorhinolaryngol Relat Spec, 1996, 58:229-232

　　5 Baraniuk JN, Lundgren JD, Okayama M,et al. Vasoactive intestinal peptide in human nasal mucosa[J]. J Clin Invest, 1990, 86:825-831

　　6 Fang SY, Shen CL. Neuropeptidergic innervation of human nasal mucosa in various pathological conditions[J]. Proc Natl Sci Counc Repub China B, 1997,21:8-12

　　7 Agha-Mir-Salim S, Baumgarten C, Jahnke V, et al. Presence of vasoactive intestinal peptide receptors in nasal mucosa[J]. Skin Pharmacol, 1991,4:213-219