鼻咽血管纤维瘤中血管生成素2的表达及其临床意义
发表时间：2010-03-29 浏览次数：441次
作者：吴贤敏 作者单位：福建医科大学附属第一医院 1．耳鼻咽喉-头颈外科 【摘要】 目的 初步探讨血管生成素2（Ang2）在鼻咽血管纤维瘤中的表达及其与肿瘤的血管生成和肿瘤扩展性生长的关系。方法 用免疫组织化学方法检测Ang2在30例鼻咽血管纤维瘤和20例鼻咽慢性炎症组织中的表达，以CD34标记血管内皮细胞,并计数微血管密度。结果 Ang2蛋白在鼻咽纤维血管瘤的阳性率为76.67％，高于鼻咽部慢性炎症组织30.00％（P<0.05）。临床分期中，Ang2蛋白在ⅢⅣ期的阳性率为90.00%，明显高于ⅠⅡ期的阳性率50.00%（P<0.05）。CD34在鼻咽纤维血管瘤的表达低于其在鼻咽部慢性炎症组织中的表达（P<0.05）。结论 Ang2参与鼻咽纤维血管瘤的血管生成，这与其临床分期和肿瘤的扩展性生长有关。
【关键词】 鼻咽血管纤维瘤 血管生成素2 免疫组织化学
WU Xianmin1, LI Zhichun1, ZHANG Sheng2, YI Zixiang1, LIN Gongbiao1
(1. Department of Otorhinolaryngology；2.Department of Pathology, First Affiliated Hospital of
Fujian Medical University, Fuzhou 350004, Fujian, China)
Abstract: Objective To investigate the expression of angiopoietin2(Ang2) in Juvenile nasopharyngeal angiofibroma(JNA) and its relationship with vascularization and dilatancy growth. Methods Expression of Ang2 was determined in 30 cases of JNA and 20 cases of chronic inflammation tissues of the pharynx nasalis by immunohistochemistry. Vascular endothelial cells were marked by CD34 and the microvessel density (MVD) was also determined in the above tissue specimens. Results The positive rate of Ang2 protein was 76.67% in JNA， which was higher than that in chronic inflammation tissues of the pharynx nasalis. The positive rate of Ang2 proteins was 90％ in stages ⅢⅣ， which was obviously higher than that in stagesⅠⅡ. The expression rate of CD34 in JNA was lower than that in chronic inflammation tissues of the pharynx nasalis（P<0.05）. Conclusions Ang2 participates in the vascularization of JNA and has some relatioge and tumor′s dilatancy growth.
Key words: Juvenile nasopharyngeal angiofibroma； Angiopoietin2； Immunohistochemistry 鼻咽血管纤维瘤的本质是血管错构瘤(vascular hamartoma)［1］，虽是良性肿瘤，但破坏颅底骨质及周围软组织结构可导致严重的并发症，其扩展性生长机制有待进一步研究。
Ang是新近才发现的一族蛋白分子、肿瘤分泌的生长因子，能刺激新血管的生长。包括Angl、 Ang2、Ang3、Ang4 4种分子。Ang作用于内皮特异的Tie2受体，维持成熟血管的完整性及静息状态，并参与生理及病理情况下的血管新生。近年发现，Ang在肿瘤血管新生中作用显著。在多种癌组织中均可见到有Ang及其受体表达增加，特别是在肿瘤边缘的新生血管区［24］。目前研究认为，Ang1的表达与肿瘤血管形成的多少关系不大，而Ang2的表达是肿瘤血管新生起始及加强的因素，与肿瘤血管形成数目、临床分期及预后关系密切。作者用免疫组化方法两步法检测Ang2在鼻咽纤维血管瘤(Juvenile nasopharyngeal angiofibroma，JNA)中的表达情况，探讨其与JNA血管的发生和肿瘤扩展性生长的关系。
1 资料与方法
1.1 材料 30例鼻咽血管纤维瘤标本来自1998年至2006年福建医科大学附属第一医院病理科和福建省耳鼻喉研究所。
鼻咽血管纤维瘤组30例，男27例，女3例，10 44岁，平均19岁。按Chandler等的肿瘤分期标准：Ⅰ期7例，Ⅱ期3例，Ⅲ期18例，Ⅳ期2例。对照组20例标本为在内窥镜下取自鼻咽部慢性炎症的黏膜。4％甲醛固定，24?h内取材，常规石蜡包埋，4?μｍ厚连续切片。
1.2 试剂 兔抗人Ang2多克隆抗体购自武汉博士德公司，CD34鼠抗人单克隆抗体和免疫组化Envision试剂盒购自广州基因公司。
1.3 免疫组织化学染色 操作严格按照说明书进行，用已知阳性片做阳性对照，用PBS代替第一抗体作为阴性对照。免疫组化结果判断［3］：Ang2阳性染色者细胞胞浆有棕黄色颗粒沉着。阳性细胞数：0分为无阳性细胞，1分为阳性细胞数＜25％，2分为阳性细胞数占25％ 50％，3分为阳性细胞数占51％ 75％，4分为阳性细胞数＞75％。染色强度：0分为无染色，1分为弱染色，2分为中等强度染色，3分为强染色。计算各抗体的阳性细胞数和染色强度得分，以3 7分为阳性。
1.4 微血管密度 CD34阳性染色定位于血管内皮细胞,呈棕黄色,鼻咽血管纤维瘤组织内孤立的棕黄色血管内皮细胞或细胞簇代表一条单独的微血管。在10倍物镜下挑选微血管分布最高的区域, 在400倍光镜下(0.196?mm2/每视野)计数10个高倍视野中被CD34染成棕黄色的血管数目,取其中3个最大值的平均值作为MVD。
1.5 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件包行χ2 检验及t检验，必要时用Fisher′s精确概率法,所有结果均以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 Ang2在ＪＮＡ组织中的表达 Ang2阳性表达颗粒呈棕黄色或褐色，主要位于鼻咽血管纤维瘤血管壁内皮细胞和基质成纤维细胞的胞浆中，鼻咽慢性炎症组织中阳性表达颗粒主要位于血管内皮细胞的胞浆，在散在的淋巴细胞和炎症细胞胞浆中也有表达，染色存在异质性。
Ang2在JNA组织中的阳性表达率为76.67％（23/30）,高于鼻咽部慢性炎症组的30.00％（6/20）,两组阳性率比较χ2＝10.73，P<0.05，差异有统计学意义。Ang2在鼻咽血管纤维瘤中不同年龄、性别间表达差异无统计学意义（P>0.05）。临床分期中，Ang2在Ⅲ Ⅳ期的表达率为90.00%（18/20）明显高于在Ⅰ Ⅱ期的表达率（50.00%，5/10），差异有统计学意义（P<0.05），见表１。表１ Ang2在JNA中不同年龄、性别及临床分期中的表达
2.2 CD34在鼻咽部慢性炎症组织和鼻咽血管纤维瘤组织中的表达 鼻咽部慢性炎症组织中CD34呈低阳性表达，MVD为17.60±3.04，在鼻咽血管纤维瘤组织中CD34呈强阳性表达，MVD为14.03±2.93，低于鼻咽部慢性炎症组织，t=16.27，P<0.05，差异有统计学意义。
3 讨 论
Ang2主要表达于子宫、胎盘等血管新生活跃的器官中, 在许多实体肿瘤如肝癌、肺癌、胃癌等的血管新生中,Ang2 表达于肿瘤边缘的血管重建区, 参与肿瘤血管新生的起始及延续过程, 影响肿瘤的生长和转移。
本研究结果表明，Ang2在JNA组织中的表达高于其在鼻咽部慢性炎症组织中的表达，二者差异有统计学意义（P<0.05），而且Ang2在JNA组织的中央部分表达较弱，在JNA组织的周围部分表达较强。Ang2的表达与患者的年龄和性别无关（P>0.05）。JNA临床分期中，Ang2在Ⅲ Ⅳ期的表达明显高于其在Ⅰ Ⅱ期的表达，差异有统计学意义（P<0.05）。这些结果均提示，Ang2的过表达与JNA的血管生成和肿瘤的扩展性生长有关系，这与JNA的组织学特点有关系。本研究结果发现，Ang2蛋白在活跃区的血管内皮细胞和纤维细胞中表达强于其在相对静止区的血管内皮细胞和纤维细胞中的表达，Ang2可以促进周围活跃区血管的生成，有利于肿瘤的扩展性生长。本研究结果还发现，JNA中的MVD少于鼻咽部慢性组织中的MVD,二者差异有统计学意义，从两者的组织学特点分析得出两个原因：其一与JNA组织周围部分的血管管腔较大， JNA组织中央部分的血管间距离较远有关；其二与鼻咽部慢性炎症组织中血管管腔较小，血管间距离较近有关。
肿瘤的生长和转移有赖于新生血管的生成。 VEGF 是公认的肿瘤血管形成最重要的正向调控因子, 肿瘤分泌VEGF已有大量试验证明，对于良性的JNA来说，可获得关于VEGF分泌物的数据是有限的， Brieger等［5］的研究表明，VEGF在JNA中高表达，认为JNA分泌VEGF对良性肿瘤有较强的血管化作用。 Ang2 对血管生成的影响和局部的微环境有关: 当VEGF等促血管生成因子存在时,Ang2促进新的毛细血管形成；当局部缺乏这些因子时,Ang2则促进血管结构的降解、促进内皮细胞的活化或凋亡而有助于血管的消退［6］。大量实验表明，在肿瘤生长过程中，Ang在血管新生中的作用是允许的，所以单独的Ang并不刺激血管的生长，只是调节内皮细胞和周围支持细胞对VEGF的反应。Angl不参与肿瘤的起始，只参与血管的成熟。而Ang2才是肿瘤新生中最明显的标志物之一， 由于Ang2表达上调，引起Angl／Ang2比率变化，阻断了Angl的血管稳定作用，这种不稳定性在有VEGF存在下可起强大的促血管生成作用。故在VEGF的配合下才得以使肿瘤生长及转移。
本研究结果提示，Ang2可能在JNA组织的周围活跃区和VEGF协同作用,阻止血管稳定化或阻止Ang1的促血管成熟作用,从而保持或诱使血管处于更易于对VEGF 等促血管生成因子反应状态,促进肿瘤的血管生成。因此我们认为，Ang2与肿瘤的扩展性生长能力有密切关系，因为Ang2表达增多，促进肿瘤血管生成，为JNA扩展性生长提供物质基础。
以Ang2为靶点构建Ang2的类似物,造成Ang2表达的失衡，阻断其通路从而干扰肿瘤性血管的有效生成,有助于抑制肿瘤的生长。Oliner等［7］报道在实验动物体内用Ang2阻断剂能选择性抑制肿瘤的血管形成和生长。本研究为临床上治疗JNA提供了理论基础，具有潜在的应用价值。
【参考文献】［1］ Liang J G, Yi Z X, Liang P. The nature of juvenile nasopharyngeal angiofibroma［J］. Otolaryngol Head Neck Surg, 2000, 123:475481.
［2］ Stratmann A，Risau W，Plate K H，et a1．Cell type—specific expression of angiopoietin—I and angiopoietin2 suggests a role in glioblastoma angiogenesis［J］． Am J Patho， 1998， 153(5)：14591466．
［3］ Zagzag D， Amimovin R， Grew M A．Vascular apoptosis and involution in gliomas precede neovascularization： A novel concept for glioma growth and angiogenesis［J］． Lab Invest， 2000， 80(6)：837849．
［4］ Bunone G， Vigneri P， Mafiani L， et a1． Expression of angiogenesis stimulators an d inhibitors in human thyroid tumors and correlation with clinical patho，ogical feature［J］． Am J Pathol， 1999， l55(6)：1967l976．
［5］ Brieger J, Wierzbicka M, Sokolov M, et a1． Vessel density, proliferation, and immunolocalization of vascular endothelial growth factor in juvenile nasopharyngeal angiofibromas［J］. Arch Otolaryngol Head Neck Surg, 2004, 130(6):727731.
［6］ Maisonpierre P, Suri C, Jones P. Angiopoietin2, a natural antagonist for Tie2 that disrupts in vivo angiogenesis［J］. Science, 1997, 277:5560.
［7］ Oliner J, Min H, Leal J, et al. Suppression of angiogenesis and tumor growth by selective inhibition of angiopoietin2［J］. Cancer Cell, 2004， 6(5)：507－516.
