Survivin和PTEN在鼻咽癌组织表达及其临床意义

作者：谷化平   

作者单位：中国人民解放军第251医院病理科，河北 张家口 075000 【摘要】  目的 探讨Survivin和PTEN蛋白在鼻咽癌（NPC）组织中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学方法检测68例NPC和20例鼻咽黏膜慢性炎组织中Survivin和PTEN表达,并分析其与临床分期、病理组织类型和转移的关系。结果 在NPC中,Survivin和PTEN阳性表达率分别为84.5%(49/68)和51.5%(35/68)。Survivin高表达和PTEN低表达与NPC的临床分期、组织学分型和颈部淋巴结转移相关（χ2=5.21～9.99,P<0.05）。结论 Survivin和PTEN表达与NPC的分化程度和转移相关，检测其表达可作为判断NPC预后的客观指标。 【关键词】  鼻咽肿瘤 基因 Survivin 基因 PTEN 免疫组织化学　　EXPRESSION OF SURVIVIN AND PTEN IN NASOPHARYGEAL CARCINOMA AND ITS SIGNIFICANCE 　　GU HUAPING　　Department of Pathology, No.251 Hospital of PLA, Zhangjiakou 075000, China　　［ABSTRACT］ Objective To study the expression and its clinical significance of Survivin and PTEN protein in nasopharygeal carcinoma (NPC).  Methods Immunohistochemical method was used to determine the expression of Survivin and PTEN protein in 68 cases of NPC and 20 cases of chronic inflammation of nasopharyngeal mucosa.The relationship between the gene expression  and clinicopathological features,metastasis was analyzed. Results The positive expression rate of Survivin and PTEN in NPC was 84.5%(49/68) and 51.5%(35/68),respectively. The highlevel expression of Survivin and the lowlevel expression of PTEN were positively correlated with the clinicopathological features,tissue types and neck lymph node metastasis in NPC (χ2=5.21-9.99,P<0.05). Conclusion These data show a correlation between the Survivin and PTEN expression and the differentiation and  metastasis in NPC. The detection of the expression may be used as an objective index to judge the prognosis of NPC.

    ［KEY WORDS］ Nasopharygeal neoplasms; Gene,Survivin; Gene, PTEN; Immunohistochemistry

    Survivin是凋亡抑制蛋白(IAP)家族新成员，在人类多种恶性肿瘤中广泛表达，并与肿瘤的分化及预后密切相关，被认为是癌变的早期事件[1～4]。PTEN是一种抑癌基因，其在人类许多原发性肿瘤和细胞株中发生缺失，并可导致肿瘤细胞无限制生长[5～7]。本研究应用免疫组化方法检测Survivin和PTEN蛋白在鼻咽癌（NPC）组织中的表达情况，探讨这两种蛋白表达与NPC临床病理特征的关系。

　　1  材料与方法

　　1.1  材料

　　1.1.1  标本来源

　　选取我院1998年1月～2006年2月确诊为NPC的标本存档蜡块68例。68例病人中，男48例，女20例，年龄16～76岁，平均年龄（49.8±6.78）岁。按WHO上呼吸道和耳肿瘤的组织学分型（1991）标准分为：角化型鳞状细胞癌20例，非角化型鳞状细胞癌48例。其中颈部淋巴结有转移者49例，颈部淋巴结无转移者19例。按照1992年全国NPC的临床分期标准进行临床分期：Ⅰ～Ⅱ期23例，Ⅲ～Ⅳ期45例。取与NPC标本同期的鼻咽黏膜慢性炎组织20例作为对照观察。组织标本均经40 g/L甲醛固定,石蜡包埋,4 μm厚连续切片。

　　1.1.2  试剂

　　兔抗人Survivin多克隆抗体、鼠抗人PTEN单克隆抗体和LSAB试剂盒购自迈新生物技术公司（均为即用型）。

　　1.2  方法

　　1.2.1  免疫组织化学染色

　　采用微波LSAB法。切片经常规脱蜡水化后，放入PBS(枸橼酸缓冲液,10 mmol/L,pH 6.0)内，用YWY 781A型医用微波仪170 W辐射抗原修复处理5 min，冷却后水洗。其他操作流程同常规LSAB法，所不同者为三步抗原孵育和正常羊血清封闭均用微波仪130 W各辐射处理5 min,保温2 min即可。用已知Survivin和PTEN阳性结肠癌组织作阳性对照，用PBS代替一抗作为阴性对照。H2O2DAB显色。

　1.2.2  结果判断

　　Survivin和PTEN免疫组化染色阳性信号呈棕黄色,均以细胞质显示清晰棕黄色颗粒为阳性(+),无染色颗粒者为阴性(-)。

　　1.2.3  统计学处理

　　采用配对资料的χ2检验。

　　2  结 果

　　2.1  Survivin和PTEN在鼻咽良恶性病变组织中的表达

    Survivin和PTEN阳性染色均定位于细胞质。NPC组织中Survivin阳性表达率为84.5%(49/68)，鼻咽黏膜慢性炎组织中Survivin阳性表达率为0，两者相比较差异有显著意义（χ2=28.50，P<0.05）。NPC组织中PTEN阳性表达率为51.5%（35/68），鼻咽黏膜慢性炎组织中PTEN阳性表达率为100%（20/20），两者比较差异有显著性（χ2=12.03，P<0.05）。

　　2.2  Survivin和PTEN表达与NPC临床病理特征的关系

    Survivin高表达和PTEN低表达与NPC的发病年龄无关，与临床分期、组织学分型和颈部淋巴结转移相关(χ2=5.21～9.99,P<0.05）。见表1。 表1  Survivin和PTEN蛋白表达与NPC临床病理指标的关系[例（略）]

　　2.3  NPC中Survivin与PTEN蛋白表达的关系

    在NPC Survivin阳性表达的49例中，PTEN阳性表达21例(42.86%)，在Survivin阴性表达的19例中，PTEN阳性表达14例(73.69%)，两者比较差异有显著性（χ2=5.21，P<0.05）。

　　3  讨 论

    Survivin基因是1997年由耶鲁大学的ALTIERI等利用效应细胞蛋白酶受体1（EPR1)cDNA在人类基因库中杂交筛选并克隆出的一种凋亡抑制基因，属于IAP家族新成员,具有显著的抗凋亡作用。Survivin基因具有肿瘤特异性表达的特点，其表达与细胞周期密切相关，是G2/M期的调节基因，参与细胞周期调控、有丝分裂及肿瘤的恶性转化，并与肿瘤的发生发展和预后密切相关[1～3]。目前,针对NPC组织中Survivin基因表达状况的研究甚少。本研究结果显示，Survivin在鼻咽黏膜慢性炎组织中不表达，在NPC组织中阳性表达率显著增高，并随着临床分期增高、癌细胞分化程度减低和淋巴结转移，其阳性表达率均显著性增高。提示Survivin表达与鼻咽黏膜上皮细胞的恶性转化密切相关，其在肿瘤中的高表达可抑制正常细胞的凋亡过程，从而导致细胞的异常增生和恶性转化,使癌细胞获得永生性。Survivin在肿瘤细胞中表达越强，其对癌细胞的抑制能力越强，导致癌细胞的生存能力和肿瘤的恶性程度也随之增高，癌细胞更容易侵袭周围组织而发生转移。表明Survivin的高表达是判断NPC预后不良的标志之一。因此，我们认为检测NPC组织中Survivin表达，不仅对判断肿瘤的发生、临床进展、恶性程度和预测病人的预后是一种重要的分子生物学参考指标，而且可能成为肿瘤基因诊断性标志物和肿瘤治疗的新靶点。

    PTEN基因是1997年在人类染色体10ｑ23上克隆到的一种新型抑癌基因。通过结构预测显示，PTEN与细胞骨架蛋白和张力蛋白高度同源，提示PTNE可能参与细胞骨架重组并影响细胞迁移能力。当PTEN抑癌基因突变或缺失可能构成一个新的信号转导途径，在调节细胞的增生和死亡、细胞的转移和粘连等方面均起重要作用，与人类恶性肿瘤的发生、发展关系密切[4]。有作者认为，PTEN突变或缺失可以促进血管内皮因子的形成，使血管内皮细胞增殖和肿瘤微血管形成，从而使肿瘤的侵袭转移能力增强[5]。本实验结果显示，在NPC组织中PTEN阳性表达率明显低于鼻咽黏膜慢性炎组织。随着NPC临床分期的增高、肿瘤分化程度减低和颈部淋巴结转移，PTEN阳性表达率也显著减低。提示PTEN表达与NPC的发生、细胞恶性转化密切相关，在NPC的细胞分化、临床进展和转移过程中起着重要的抑制作用。在临床病理活检中，检测PTEN蛋白表达有助于深入了解肿瘤的发生发展，并可为肿瘤早期诊断、预后判断和临床基因治疗提供依据。

   有关NPC中Survivin与PTEN表达之间的相关性研究文献尚未见报道。本文结果显示，在NPC中这两种基因蛋白表达之间呈显著负相关。提示NPC形成和转移的发生是由多基因或多因子协同作用的结果。

【参考文献】  　　[1]SHARIAT S F, LOTAN Y, SABOORIAN H, et al. Survivin expression associated with feartures of biologically aggressive prostate carcinoma[J]. Cancer, 2004,10(4):751757.

　　[2]王东升,周岩冰,王海波. Survivin及P53蛋白在胃癌组织中的表达[J]. 青岛大学医学院学报, 2005,41(4):302306.

　　[3]谷化平,尚培中. 原发性胆囊癌中Survivin和PTEN表达及其与临床病理的相关性研究[J]. 山西医科大学学报, 2007,38(2):118120.

　　[4]谷化平,尚培中,冯骥良.CA242和PTEN蛋白在大肠癌组织中的表达和相关性研究[J]. 中国肿瘤临床与康复, 2006,13(1):1720.

　　[5]郭双平,王丽,王文亮,等. 抑癌基因PTEN在肝癌组织中的突变及其对肝癌细胞增殖和凋亡的调控作用[J]. 中华病理学杂志, 2006,35(8):467472.