精神分裂症患者血清特征多肽及其鉴定的研究

精神分裂症是一种精神活动与周围环境不协调的常见精疾病[ 1]， 虽然做了大量研究， 该疾病的分子机制仍未阐明。前芯片技术和蛋白质组学技术具有高通量的特点， 故可用于规模筛选相关的基因与蛋白质[ 2]。表面增强激光解析电离行时间质谱技术是一项蛋白质组学技术，内外研究报道了该技术检测心血管疾病、 肿瘤、 感染、 器官移的蛋白质标志物并用于早期诊断的可行性， 但对精神分症研究却未见报道。本研究前期利用该技术， 筛选出差异具统计学意义( 犘<0.0 5) 的血清蛋白质标志物[ 5]， 通过查询蛋质数据库找出对应的血清多肽， 再利用酶联免疫吸附试验L I S A) 对其验证， 探索该疾病实验室诊断的临床价值。资料与方法

1　一般资料

精神分裂症组来自2 0 0 7年1 1月至2 0 0 8年月泸州医学院附属医院精神科的住院患者， 共计2 8例， 其男1 3例， 女1 5例; 年龄1 9～4 8岁， 平均( 3 3.1 1±8.1 4) 岁;入标准： 符合国际疾病分类与诊断标准第1 0版( I C D  1 0) 的神分裂症诊断标准， 首次发病， 入院后未接受抗精神病药物治疗， 并排除脑器质性和躯体疾病所致的精神障碍。其他精神疾病对照组为同期收治的2 6例患者， 其中， 抑郁症患者1 2例，焦虑症患者7例， 颅脑外伤所致的精神障碍者7例; 男1 4例，女1 2例; 年龄1 9～5 3岁， 平均( 3 6.2 9±1 0.5 4) 岁; 纳入标准：符合中华医学会精神科分会2 0 0 1年制定的中国精神障碍诊断与分类标准第3版( C CMD 3) 的相应精神疾病诊断标准， 入院后未接受抗抑郁治疗， 并排除精神分裂症。健康对照组为同期到该院体检的健康体检者2 4例， 其中男1 2例， 女1 2例; 年龄2 1～5 0岁， 平均( 3 4.1 0±9.1 2) 岁。

1. 2　主要试剂与仪器　人神经肽2( N P2) 、 内皮素3( E T 3) 、胰岛素样肽A链( I N S A) 、 G l i c e n t i n相关肽( G I P) E L I S A试剂盒均购自上海丰翔生物科技公司。D i a t e kDR2 0 0 B s自动酶标仪由无锡华卫德朗仪器提供。

1.3　方法1.3.1　制备样品　从医用超低温冷冻冰箱( -8 0℃) 中取出所选中的标本并编号， 冰上溶解后4 ℃ 1 00 0 0r / m i n离心2m i n， 待用。1.3.2　E L I S A检测　神经肽2、 内皮素 3、 胰岛素样肽 A链、G l i c e n t i n相关肽的 E L I S A 操作步骤参考文献[ 5] 。采用 D i a t e kDR  2 0 0 B s自动酶标仪检测3组标本中人神经肽2、 内皮素  3、 胰岛素样肽 A链、 G l i c e n t i n相关肽的吸光度( OD) 值。

1.4　统计学处理　对精神分裂症组、 其他精神疾病对照组和健康对照组采用S P S S 1 7.0软件进行单因素方差分析， 首先对这3组样本进行方差齐性检验， 然后进行方差分析和多重比较。若有方差齐性不相等， 假设总体分布未知的情况下， 使用非参数检验中的多独立样本检验， 以犘<0.0 5为差异有统计学意义。

2　结果

2. 1　3组标本中人神经肽2、 内皮素 3、 胰岛素样肽 A链、 G l ic e n t i n相关肽的OD值见表1。2.2　3组标本的方差齐性检验　从表2可见， 除 G l i c e n t i n相关肽外， 其余所有数值均大于0.0 5， 因此， 内皮素 3、 胰岛素样肽 A链、 神经肽2的总体方差相等， 方差是齐次的。而 G l i c e n t i n相关肽的方差是不齐次的。分裂症组、 其他精神疾病对照组与健康对照组的比较中差异均有统计学意义( 犘<0.0 5) ， 认为神经肽2在健康人和精神分裂症患者之间存在差异表达。具体数值见表4。2.5　多独立样本检验　鉴于 G l i c e n t i n相关肽的方差齐性不相等， 假设总体分布未知的情况下， 使用多独立样本检验多个样本是否来自于相同分布的总体。结果见表5， 从表中可见神经肽2的渐近显著性水平为0.0 3 1， 小于0.0 5， 因此， 只有神经肽2在各组之间的表达差异有统计学意义( 犘<0.0 5) 。2.3　3组标本多肽水平方差分析　从表3中可以看出神经肽2的方差检验犉=4.0 1 0， 对应的显著性为0.0 2 2， 小于显著性水平0.0 5， 因此认为神经肽2中至少有一个组与另外一个组差异有统计学意义( 犘<0.0 5) 。

3　讨论

精神分裂症影响约世界1%的人口， 治疗这种疾病的大多数药物是针对影响单胺能传递的受体。然而， 有大量的证据表明， 单胺类神经递质常常释放多种类型的神经肽; 并且， 配体作用于相应的神经肽受体， 以调节单胺能的传递。这种神经肽系统包括神经降压肽、 缩胆囊素、 神经肽 Y、 阿片肽、 速激肽和食欲素等[ 6]。因此， 对精神分裂症神经肽的研究， 有可能揭示该疾病的分子机制， 并选取特定的生物标志物作为诊断的客观依据[ 7]。本研究前期筛选出差异具有统计学意义( 犘<0.0 5) 的血清蛋白质标志物。通过查询蛋白质数据库， 它们对应的蛋白质名称分别是神经肽2、 内皮素 3、 胰岛素样肽 A链、 G l i c e n t i n相关肽。从表4可以看出， 神经肽2在精神分裂症组 V S健康对照组显著性水平为0.0 4 0， 其他精神疾病对照组 V S健康对照组显著性水平为0.0 0 8， 说明神经肽2在这两组比较中差异有统计学意义( 犘<0.0 5) 。而精神分裂症组 V S其他精神疾病对照组的显著水平为0.4 8 7， 大于0.0 5， 故推测神经肽2可能与精神疾病的发生、 发展有关。众所周知， 神经系统的功能是由多种神经肽共同参与调节的， 精神疾病的发病机制是复杂的， 血清中神经肽2仅仅是共同参与并调节神经系统功能的多种神经肽中的治疗过程中应用糖皮质激素控制脑水肿时， 对F DG的摄取没有影响。但是， F DG  P E T也有一定的局限性， 如大脑灰质对F DG的摄取率较高， 除成胶质细胞瘤外， 其他大部分的神经胶质瘤与周围灰质组织的代谢相似， 难以与正常组织区分。在融合C T成像后就能克服这些局限性[ 1 1]。有研究表明， MR I具有较高的敏感度( 9 5.8%) ， 诊断准确度为8 6%， 而 F DGP E T的特异性较好( 8 3.3%) [ 1 2]。而在此研究中， MR I对脑胶质瘤复发检出的敏感度为9 3.5 5%， 特异度为1 8.7 5%; 而1 8F  F DGP E TC T的敏感度较低( 6 7.4 4%) ， 特异度为9 2.1 6%。1 8FF DGP E T C T的准确度( 8 0.8 5%) 高于增强 MR I( 6 8.0 9%) 。但是， 1 8F  F DG  P E T  C T对Ⅲ级复发肿瘤有较高的诊断准确度( 9 1.4 3%) 和特异度( 9 4.7 4%) 。这需要进一步增大亚组标本量， 进一步的充分研究。 1 8FF DG P E T C T的优点还在于鉴别复发和放射损伤， 能够早期描述肿瘤的活动情况， 有效地指导手术治疗和放疗。虽然1 8FF DGP E T C T诊断的效果是很明显的， 但在临床应用过程中还是要考虑到其较高的假阳性率。而且， 由于脑组织对F DG摄取率高和 C T缺乏明确的病灶， 一些病灶可能会遗漏。由于1 8F F DGP E T C T的敏感度较低， 不建议作为检查复发的初级筛选手段。但可以在经过 MR I检查出病灶后， 再通过1 8FF DGP E T C T进行一定的特性描述。

参考文献

[ 1] 胡裕效， 卢光明， 朱虹， 等.1 8F F DGP E T / C T显像的应用价值[ J ] .临床肿瘤学杂志， 2 0 0 9， 1 4( 5) ： 4 3 2 4 3 5.