尖锐湿疣发病与检测的研究进展

　　作者：王琼,吴迪　原红　　作者单位：1.吉林省肿瘤医院皮肤科，吉林 长春 130012;2.北华大学附属医院，吉林 吉林 132000;3.长春市人民医院，吉林，长春 130012

　　【关键词】 尖锐湿疣;检测

　　尖锐湿疣(CA)是发生于生殖器等部位的一种性传播疾病，是由人乳头瘤病毒(HPV)引起的增殖性疾病。该病易误诊、漏诊、病情顽固、手术治疗极易复发、可以癌变、严重危害人类健康。本文从尖锐湿疣的病原学、HPV感染的实验室检测、CA患者体内的免疫学改变以及CA患者HPV感染与癌变相关性研究等方面加以综述。以便更进一步了解CA发病及复发机制，为临床治疗和预防CA提供有效的思路。

　　1 病原学

　　尖锐湿疣的病原体是人乳头瘤病毒(HPV)。人类是HPV唯一的自然宿主。病原体感染人体后，可潜伏在具有角化现象的上皮黏膜组织中，在表皮细胞层复制。HPV侵入细胞和引起细胞迅速分裂，同时伴随病毒颗粒的繁殖与播散，释放出来的病毒颗粒成为自身接种与传播的来源。HPV是最小的DNA病毒，病毒颗粒直径在50～55nm，病毒颗粒分子量为50×106d，是由72个壳微粒组成立体对称的20面体。中间是含有7 900个碱基对的双链环状DNA。HPV病毒能耐受干燥和可以长期保存，在甘油中20℃时至少可存活2～5个月。用现代分子生物学技术对CA患者上皮细胞增殖活性研究，已能把HPV鉴别出100多种亚型，不同型别的HPV在不同部位可产生不同类型的损害，如扁平疣、寻常疣、鲍温病和尖锐湿疣等。已发现与CA有关的型别达34个，其中15个型(6，11，16，18，30，31，32，42，43，44，51，52，53，54，55)与尖锐湿疣关系密切，最常见的HPV有6，11，16和18型。

　　2 HPV 感染的实验室检测

　　核酸杂交法的灵敏度和特异性均显著高于传统的检测方法，并且可应用特异性探针对HPV分型。SouthernBolt法被认为是HPV检测的金标准，检测步骤复杂，该方法灵敏度高，运用于HPV分型，HPV DNA分子量测定，基因组酶切图谱建立及物理状态的研究等。斑点杂交是简化了SouthernBolt法，经济实用且灵敏度较高，运用于筛选试验。原位杂交是应用非放射性探针检测HPV-DNA，优点是能定位，假阳性率低，但灵敏度不高。Playev等[1]，发现一种分支DNA原位杂交方法检测细胞内的HPV-DNA，并发现其不但可以大大提高灵敏度，还可以对进行HPV精确定位。聚合酶链反应(PCR)在特异性和灵敏度上均较其他方法高，是目前检测HPV最好的方法。可以进行HPV分型，缺点是容易发生样品间的交叉污染，导致假阳性率增高。Jovolen[2]应用分子信标引物设计了一种新的HPV检测和分型方法，主要是应用分子信标引物扩增与反向杂交相结合，可用于HPV感染的大规模人群调查研究;Tucker等[3]发现基于实时PCR的5'外切核酸荧光探针HPV定量分析法，主要针对HPV6、11、16、18等4个型别，结果灵敏度和特异性高，可以即时直接定量检测。

　　3 尖锐湿疣患者体内的免疫学改变

　　免疫缺陷患者尤其是细胞免疫功能异常者，感染HPV的机会大，复发率也更高。HPV感染患者后，可抑制机体细胞免疫功能，感染局部T4、T8和自然杀伤细胞(naturalkilleell,NK)数量减少。Connor[4]等认为，HPV感染者局部上皮细胞中，作为抗原呈递细胞的Langerhans细胞数量减少以及S-100蛋白缺乏也是CA患者体内免疫功能受到抑制的重要原因，患者外周血免疫细胞中CD8T淋巴细胞百分比和可溶性白介素-2受体(SIL-2R)升高，CD4+/CD8+比值倒置，HLA-DR抗原水平下降，NK细胞活性降低，IFN-α、IFN-β和IL-2水平低下[5]。患者血清HPV特异性抗体的存在往往提示曾经感染过HPV。HPV6/11型，感染者血清IgG 浓度升高，而HPV11型感染者IgG则降低，说明HPV 6VLPS是良好的抗原。王雄等[6]选择CA患者161例应用流式细胞仪,检测患者外周血CD3+、D4+、CD8+T淋巴细胞数,计算CD4+/CD8+比值;愈后随访1年,观察患者是否复发，比较高危型和低危型之间T淋巴细胞亚群分布和复发率的差异。结果:各型患者CD3+T淋巴细胞总数正常,CD4+T淋巴细胞减少,CD8+T淋巴细胞正常,CD4+/D8+降低,各型间无显著差异。

　　4 HPV的致癌机制

　　4.1 HPV的致癌作用与HPV DNA的整合有关：HPV感染宿主细胞后以游离状态引起细胞感染，首先潜伏于基底细胞层，其DNA作为独立的外源染色体游离于细胞核内，病毒核酸整合到宿主细胞内，HPV16、18型DNA均呈整合形式。目前认为，整合后的DNA发生致癌作用的主要基因为E6、E7 和E2[7-8] ，致癌基因E6、E7在直接转化细胞的同时，与细胞周期调控蛋白相互作用，干扰正常细胞周期调控，从而导致细胞无限制生长引起癌变。E2蛋白是一种特异性DNA束缚蛋白。可调节病毒mDNA转录及DNA复制。E6、E7 转化作用亦受E2的调控HPVDNA的整合往往引起病毒E2片断的缺失，导致E6和或E7基因表达失控，引起细胞的转化和癌变。 E6、E7不仅能结合感染的宿主细胞DNA，还可与抑癌基因P53结合，降低P53的抑癌功能，促进细胞的转化和癌细胞的发生。

　　4.2 HPV及协同因子在宫颈癌发生中的作用：大量研究已经表明HPV感染是宫颈癌发生的主要病因。随着研究的深入，人们发现在宫颈细胞正常的妇女中HPV感染率也较高，而这些感染者大部分并未发展为癌[9]，因此，认为单纯HPV感染并不一定引起癌症的发生，可能有协同因子的存在。目前发现可能的协同因子主要有：免疫抑制、吸烟、雌激素等。特别是雌激素与宫颈癌的关系是目前存在争议的热门话题。Beral等[10]对46 000名妇女25年的随访表明，口服避孕药是宫颈癌发生的致病因素。危险性增加，并显示用药时间越大，危险性越大。最近有资料显示，单纯口服避孕药与宫颈癌之间无显著相关性，具有协同HPV感染等危险因素致癌的作用。雌、孕激素可能通过参与细胞周期和细胞凋亡的调控而干扰宿主细胞的正常功能和基因表达，Khare等[11]在体内细胞培养实验中发现孕酮有增强由HPV16引起的宫颈癌E6、E7癌基因表达的作用，也有研究显示，雌孕激素均可影响HPV16和HPV18的基因表达[12]。目前，大众对HIV感染了解有限，要充分了解到HPV感染的危害及宫颈癌的关系，特别近年来由于HPV感染的增加，现有的防治措施缺乏力度，患者明显年轻化。利用定期的HPV分型检查补充传统的细胞学普查，特别在细胞学正常及不典型增生的人群中，对预警宫颈细胞癌变倾向，及时发现和预防治疗早期宫颈癌极为关键。

　　【参考文献】

　　[1] Player AN， Shen LP,Kenny D,et al. Single-copy gene detection using branched DNA (bDNA) in situ hybridization[J]. J Histochem Cytochem, 2001, 49(5)：603.

　　[2] Jordens JZ， Lanham S，Pickett MA，et al. Amplification with molecula beacon primers and reverse line blotting for the detection typing of human papilloma viruses[J]. J Virol Methods, 2000, 89(1-2)：29.

　　[3] Tueker RA, Unger ER, Holloway BP， et al. Real-time PCR-based fluorescent assay for qantitation of human papillomaviruses types 6,11,16,and 18[J]. Mol Diagn, 2001, 6(1)：39.

　　[4] Commor JP，Ferrer K. Evaluation of Langerhans' cells in the cervical epithelium of women with cervical intraepithelial neoplasia[J]. Gynecoloncol, 1999，75(1)：130.

　　[5] Opaneye AA. The cellular immune system in female patients with or without genital warts: a study of peripheral white blood cell，Components[J]. Int JSTD AIDS, 1999，10(12)：815.

　　[6] 王 雄,吴焕明.HPV亚型T淋巴细胞亚群和尖锐湿疣复发关系的研究[J].中国麻风皮肤病杂志，2007，8：683.

　　[7] Senior K. Cervical cancer research focuses on the HPV E7 gene[J]. Lancet, 2002，3(10)：585.

　　[8] DeFilippis RA， Goodwin EC， Wu L, et al. Endogenous human papillomavirus E6 and E7 proteins differentially regulate proliferation，senescence, and apoptosis in Hela cervical carcinoma cells[J]. Jvirol, 2003，77(2)：1551.

　　[9] Knebel DM. New markers for cervical dysplasia to visualize the genomic chaos created by aberrantonc ogenic papilloma virus infections[J]. Eur J Cancer，2002，38(17)：2229.

　　[10] Beral V， Hermon C，Kay C, et al. Mortality associated with oral contraceptive use: 25 year follow up of 46000 women from Royal Collegeof General Practitioners'oral contraception Study[J]. BMJ, 1999，318(7176)：96.

　　[11] Yuan F，Auborn K, James C. Altered growth and viral gene expression in human papilloma virus type 16 containing cancer cell lines treated with progesterone[J]. Cancer Invest, 1999，17(1)：19.

　　[12] Knebel DM，Spitkovsky D，Ridder R. Interactions between steroid hormones and viral oncogenes in the pathogenesis of cervical cancer[J]. Verh Dtsch Gespathol, 1997，81：233.