寻常痤疮皮肤人β防御素2的表达及意义

　　作者：林岷格,戴永江,罗世飞,曾慧明　　作者单位：海南医学院附属医院 1.皮肤科，2.病理科，海南 海口 570102

　　【摘要】目的：研究寻常痤疮患者皮肤β防御素2(hBD2)的表达情况及丹参酮治疗对其的影响。方法：用免疫组化方法检测40例寻常痤疮患者皮损及非皮损部位hBD2的表达水平，观察其在丹参酮治疗前、后的变化，同时记录皮损情况及不良反应等，并与正常对照组进行比较。 结果：丹参酮治疗寻常痤疮效果良好，副作用少。在寻常痤疮患者皮损处hBD2的表达显著增强，与非皮损部位及正常对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);丹参酮治疗后皮损好转，局部hBD2表达减弱，但仍明显高于非皮损部位(P<0.05);治疗前、后非皮损部位hBD2的表达水平没有明显变化，与正常对照组比较差异亦无统计学意义(P>0.05)。结论： hBD2在寻常痤疮皮损部位的表达显著增加，并随着炎症的减轻而下调，提示其参与痤疮的发病过程。

　　【关键词】 寻常痤疮;β防御素2;丹参酮;免疫组化

　　Expression and significancy of human β defencin2 in skin of acne vulgaris

　　LIN Minge, DAI Yongjiang, LUO Shifei, ZENG Huiming

　　( Department of Dermatology, Affiliated Hospital, Hainan Medical College Haikou 570102, China)

　　[ABSTRACT] Objective: To investigate the expression of human β defencin2(hBD2) in skin of acne vulgaris and effects of Tanshinone therapy. Methods:To detect the expression of hBD2 in the lesional skin and nonlesional skin of acne vulgaris by immunohistochemistry before and after Tanshinone therapy, changes of the lesions and side effects were also documented. Results: Tanshinone has favorable effects on acne vulgaris patients. The expression level of hBD2 in lesional skin of acne vulgaris was elevated significantly, comparing with the nonlesional skin and normal controls. After Tanshinone therapy, the expression in lesional skin was downregulated while the lesions improved, but still higher than nonlesional skin. Tanshinone therapy had no effects on the expression of hBD2 in nonlesional skin. Conclusion: The expression of hBD2 in lesional skin of acne vulgaris was upregulated significantly, and decreased as the lesions get better, which indicates hBD2 takes part in the pathogenesis of acne vulgaris.

　　[KEY WORDS] Acne vulgaris; Human β defencin2; Tanshinone; Immunohistochemistry

　　寻常痤疮是好发于青年人的常见皮肤病，人β防御素2(hBD2)是一种小分子内源性抗微生物多肽，具有多种生物学活性，尤其是具有广谱高效的抗微生物活性。目前丹参酮用于治疗痤疮已取得了较好疗效。为研究hBD2及丹参酮在治疗寻常痤疮中的作用机理，我院应用丹参酮治疗寻常痤疮患者，并检测了治疗前、后患者皮肤hBD2的表达水平，现报道如下。

　　1 临床资料

　　1.1 一般资料

　　选取我院皮肤科门诊2006年6月～2007年9月就诊的44例寻常痤疮患者作为治疗组，其中男性24例，女性20例，年龄17～31岁，平均(22.74±2.28)岁，病期3个月～5年，平均(3.18±1.21)年，其中14例患者失访，未完成疗程。入选标准为具有寻常痤疮典型临床表现，治疗前2周内未接受抗生素、性激素、皮质类固醇及维甲酸等对寻常痤疮有影响的药物;无肝肾功能及血脂异常;非哺乳及孕妇患者，服药后半年内不准备妊娠者。20例健康志愿者作为正常对照组，其中男性12例，女性8例，年龄18～25岁，平均(21.60±1.30)岁，两组性别及年龄构成差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

　　1.2 方法

　　治疗组口服丹参酮胶囊(希力药业集团公司生产，每粒0.25 g，批号：20060313)，4粒/次，3次/日，连续4周后改为3粒/次，3次/日，8周疗程结束后判定疗效。每2周复查1次，观察并记录皮疹变化及药物副作用。治疗前、后分别复查肝肾功能及血常规，所有患者未用其他口服及外用药物或化妆品，同时避免辛辣刺激性饮食。

　　1.3 免疫组化检测

　　治疗前从痤疮患者炎症性丘疹皮损处及非皮损处各取一次样本，治疗后取患者皮损消退处及非皮损处，所有患者及健康志愿者标本均取自背部皮肤，共取30例患者及20例健康志愿者标本。鼠抗人hBD2单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒及DAB显色盒均购自海南光威科技公司。标本经石蜡包埋切片，厚度约3 μm，10%多聚甲醛固定20 min，加过氧化物酶阻断剂孵育10 min，非免疫动物血清孵育10 min，滴加1抗(1∶200)过夜，滴加生物素化二抗20 min，生物素链霉亲和素过氧化物酶孵育10 min，DAB显色，苏木精复染，脱水，封片。以镜下细胞质内出现棕黄色的颗粒为阳性判断标准，在高倍镜下(×400)随机选择5个视野，用高清晰度图像采集处理系统分析阳性信号的表达和分布，并以积分吸光度为参数进行检测。用PBS代替一抗作为空白对照。

　　1.4 疗效判定标准[1]

　　痊愈：皮疹消退90%以上，无明显新皮疹发生;显效：皮疹消退70%～90%，有5个以下新皮疹发生;好转：皮疹消退40%～70%，有10个以下新皮疹发生;无效：皮疹消退在40%以下，且有新皮疹不断发生，或皮损较治疗前无明显变化。有效率=(痊愈+显效+好转)×100%。

　　1.5 统计学处理

　　应用SPSS 12.0统计软件对数据进行分析处理，实验数据以平均值±标准差(±s)表示，计量资料比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 临床疗效及副作用

　　丹参酮治疗寻常痤疮约在2周左右起效，首先炎症丘疹红肿逐渐减轻，其后丘疹、脓疱变平消失。疗程结束后治疗痊愈率为32.5%，总有效率为77.5%。在治疗过程中有5例(12.5%)出现不同程度的口唇干燥、皮肤脱屑或瘙痒，均可以耐受，继续用药后逐渐消失。治疗结束后复查肝、肾功能及血常规，与治疗前比较无明显异常。

　　2.2 免疫组化结果

　　hBD2在寻常痤疮患者治疗前皮损中有阳性表达，阳性细胞主要位于毛囊皮脂腺细胞以及部分的角质细胞，在这些细胞的细胞质中可见棕褐色至棕黑色的颗粒沉积，强染色区域呈带状或片状分布(图1A)。治疗后的皮损切片毛囊及皮脂腺周围浸润的炎症细胞明显减少，其阳性细胞也主要分布于毛囊皮脂腺单位，染色强度较弱，呈淡黄色至棕黄色(图1B)。而患者非皮损部位及正常对照组仅于表皮见少量阳性细胞(图1C、D)。

　　经图像分析处理，治疗组在治疗前皮损部位hBD2的表达水平(吸光度，43.12±8.81)较非皮损部位(8.56±1.47)及正常对照组(7.97±1.73)明显升高，差异具有统计学意义(P<0.01)，治疗后患者皮损部位hBD2表达(31.81±4.14)较治疗前下降，差异有统计学意义(P<0.05)，仍明显高于非皮损部位(8.66±1.32)和正常对照组(P<0.01)。治疗前、后患者非皮损部位hBD2的表达差异无统计学意义，与正常对照组比较亦无统计学差异(P>0.05)。图1 hBD2在不同部位皮肤中的表达情况

　　3 讨论

　　目前认为痤疮的发病可能与皮脂腺分泌旺盛、毛囊皮脂腺导管角化和阻塞以及感染等因素有关，治疗以去脂、溶解角质、杀菌及消炎为主，临床上常采用维A酸、抗生素及雌性激素类等药物，配合外用药进行治疗[2]，其中痤疮棒状杆菌过度增殖在疾病的病情发展中起重要的作用。由于许多患者存在不规则治疗、反复发作等因素，使临床耐药菌株增多，另外抗生素应用副作用较多等也给痤疮的治疗造成了困难。

　　丹参酮是中药丹参根的乙醚提取物，其中有效成分为隐丹参酮。丹参酮对痤疮棒状杆菌有较强的抗菌活性，可减少由该菌异常增生导致的毛囊上皮细胞破坏和游离脂肪酸增多，发挥抗炎作用。同时丹参酮还具有抗雄激素、温和的雌激素样活性和抑制皮脂分泌的作用，可以对痤疮发挥综合治疗的效果。本研究结果表明丹参酮治疗寻常痤疮的疗效良好，总有效率达77.5%，与宋韬等[3]报道相近，而较陈红[4]报道的有效率稍低，可能与本研究例数偏少，患者粉刺、角化过度性皮损较多，疗效观察时间较短有关。治疗中仅有5例患者出现轻微不良反应，但不影响继续治疗，提示丹参酮治疗安全有效，副作用少，耐受性好。

　　hBD2主要表达于上皮组织，为一种阳离子小分子抗菌肽，对革兰氏阳性和阴性菌、真菌、包膜病毒及分支杆菌等都有广谱高效抗菌作用，目前尚未发现耐药菌株，此外hBD2还有免疫调节活性[5]。在正常机体的上皮组织中hBD2的表达很少，而在炎症和肿瘤状态下才大量表达[6]。本研究采用免疫组化法检测寻常痤疮患者hBD2的表达情况，结果显示在寻常痤疮患者皮损处hBD2表达水平较对照组明显增高，丹参酮治疗后痤疮皮损好转，hBD2的表达水平亦较治疗前明显降低，且仍然高于非皮损部位及正常对照组;而非皮损部位hBD2的表达很少，在丹参酮治疗前、后及与正常对照组比较差异均无统计学意义，提示hBD2在痤疮皮损部位的高表达可增强其抗菌作用，同时其表达水平随着炎症的减轻而下调，说明其参与痤疮的炎症反应。本实验观察到丹参酮治疗后hBD2的表达减少并不如临床及组织病理中炎症减轻的程度明显，是否因丹参酮有活血化瘀、增强机体免疫的特性，通过增强hBD2的表达而发挥其抗炎作用还有待进一步研究。

　　【参考文献】

　　1 付宏伟.丹参酮胶囊结合阿达帕林凝胶治疗痤疮80例疗效观察[J].现代中西医结合杂志,2007,16(20):28512852.

　　2 张学军.皮肤性病学[M].第6版.北京:人民卫生出版社,2004.164.

　　3 宋韬,盛晚香,孙祥银,等.丹参酮治疗寻常性痤疮及对皮脂分泌的影响[J].中国麻风皮肤病杂志,2006,22(9):793.

　　4 陈红.丹参酮治疗痤疮66例疗效观察[J].皮肤病与性病,2007,29(2):1113.

　　5 方向明.β防御素2研究进展[J].浙江大学学报(医学版),2006,35(6):581584.

　　6 旷燕飞,曾昭武,杨志波.人β防御素2基因在衣原体感染女性生殖道组织中的表达[J].医学临床研究,2006,23(9):13721374.

　　(责任编辑 李晶)海南医学院学报 2009，15(5)Journal of Hainan Medical College 海南医学院学报 Vol.15 No.5 May.2009