ELISA联合甲苯胺红不加热血清试验检测梅毒螺旋体感染的
发表时间：2011-08-23 浏览次数：551次
作者：周亮,李杰,周松伟,陈志 作者单位：：(兴化市人民医院输血科，江苏 兴化 225700)
【关键词】 梅毒; 检测; 酶联免疫吸附试验; 甲苯胺红不加热血清试验
梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA法)是公认的梅毒特异性抗体确证试验，但该方法难以实现“三化”自动化、标准化和规范化，资料也难以保存。目前血站和医院输血科检测梅毒螺旋体抗体多采用ELISA法。其灵敏度和特异性都较高，与TPPA法间差异无统计学意义[1]，可实现“三化”，资料也易保存。但ELISA法梅毒抗体阳性，尚不能判定是否为现症感染，不能为医生提供诊治依据。甲苯胺红不加热血清试验(TRUST法)存在着较大的漏检率[2]，血站和医院输血科不单独应用于检测梅毒，但TRUST法检测为阳性可辅助判断为现症感染，能为医生提供诊治依据。现许多血站已同时采用ELISA和TRUST法对献血者进行初复检检测[3-5]，两方法互补，灵敏度和特异性同TPPA法，又发挥出了ELISA法的优点。
我们自2004年至2005年用ELISA、TRUST、TPPA三种检测方法对385例梅毒阳性标本进行了比较。2006年至2008年又采用ELISA法联合TRUST法检测需输血者7 656例，性病门诊就诊者355例，共8 011例标本，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 标本来源
主要有两个时期标本：2004年1月至2005年12月无偿献血者、输血前检测者利用ELISA法检测显示梅毒阳性标本385例，同期到性病门诊就诊者87例，共472例标本; 2006年1月至2008年6月在我院住院患者中需输血者7 656例，同期到性病门诊就诊者355例，共8 011例标本。
1.2 检测试剂
ELISA试剂盒(北京现代高达公司提供);TRUST试剂盒(上海荣盛生物技术有限公司提供);TPPA试剂盒(日本富士公司提供)。
1.3 仪 器
酶标仪(奥地利Anthos 2010型)和洗板机(奥地利Anthos fluido型)，梅毒自动旋转仪(姜堰市天力医疗器械TL2000A型)。
1.4 方 法
对2004年至2005年的472例标本分别采用TRUST，ELISA，TPPA三种方法检测梅毒。检测所用试剂在有效期内使用，严格按照试剂操作说明书操作。
对2006年至2008年的共8 011例标本联合使用ELISA法和TRUST法检测梅毒。检测所用试剂在有效期内使用，严格按照试剂操作说明书操作。
1.5 统计学方法
采用SPSS 14.0软件统计数据，不同方法间的比较采用χ2检验，P<0.01，差异有统计学意义;P>0.05为差异无统计学意义。两种方法的检测结果采用配对χ2检验。
2 结 果
385例经ELISA检测显示阳性的标本再分别采用TRUST和TPPA法检测，结果见表1。表1同时包含有同期性病门诊接受3种方法检测的87例就诊者标本的检测结果。表1 梅毒3种检测方法的比较表2 8 011例输血及性病门诊就诊者梅毒检测结果
3 讨 论
梅毒螺旋体亦称苍白螺旋体(treponema pallidum,TP),是引起人类梅毒的病原体。在感染的所有阶段，梅毒患者能产生两类抗体。一类是抗TP抗体(15 ku,17 ku,47 ku)，当补体存在时，可将螺旋体杀死或溶解，也能对吞噬细胞发挥调理作用，如47 ku抗体等;另一类是抗心磷脂抗体，称反应素(reagin),能同生物组织中的脂质发生反应，反应素无保护作用，仅可用作梅毒血清学诊断。所以临床血清试验主要分为两大类：一类为密螺旋体抗原血清学试验，另一类为非密螺旋体抗原血清学试验。通常将前者作为确认试验方法，如TPPA法与ELISA法，后者检测的抗体不是梅毒特异性抗体，一些其他疾病如结核、 自身免疫性疾病、猩红热等也可出现阳性反应，加之其灵敏度和特异性也只在 70%～80%[3],故认为TRUST法等并非理想的梅毒感染筛检试验,一般列为常规试验方法。
TP抗体在梅毒潜伏期即产生。一期梅毒时增高，主要是IgM型;二期梅毒时达高峰，有IgG型、IgM型;三期梅毒略降低，主要是IgG型。该抗体在病程中免疫作用不大，病后也无预防再感染的作用，可在实验室被检测出来，具有很高的灵敏度和特异性，晚期梅毒和治疗后仍保持阳性。反应素在一期梅毒阶段即增加，二期梅毒时达到高峰，三期梅毒时有部分会逐渐降低。治疗结束后，应定期复查。在治疗3个月至1年后血清学TRUST转阴者表示治愈，否则要继续治疗。
表1说明ELISA法与TPPA法检测结果间的差异无统计学意义，与国内许多报道观点一致[1，6，7]。
表2显示ELISA法与TRUST法检测均阳性者225例，经TPPA法确证均为阳性，通过询问病史，观察症状，符合梅毒现症感染诊断，均给予药物治疗;ELISA阳性而TRUST阴性189例，表示曾经感染梅毒，经过治疗或未经治疗自身产生抗体，梅毒感染并不在活动期，这类患者不需药物治疗;TRUST法阳性中有3例ELISA法检测阴性可能为TRUST法的假阳性结果，也不需药物治疗。
ELISA一步法梅毒试剂存在钩状效应，用TRUST法补充检测梅毒，可防范这个问题[3]。刘运保等[5]报道，TRUST+ELISA联合检测方法灵敏度97.24%，特异性99.99%，与PCR检测TPDNA相关性好。我们的结果提示，ELISA+TRUST法不仅是检测梅毒的良好方法，而且ELISA方法可实现自动化、标准化和规范化,质量可控制,结果易长期保存，用TRUST法进行补充检测，可作为判断是否为现症感染以及疗效观察和随访有无复发或再感染的指标，同时对控制医院感染率、降低医疗风险、防范医患纠纷十分重要。
【参考文献】
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