血清sCD40L和TGFβ1对系统性红斑狼疮活动性及治疗转

　　作者：徐红星,邱德华,宋恒蕊,王慧娟,季　　作者单位：南京医科大学附属苏州市立医院本部　检验科，皮肤科，江苏 苏州 215002;南京医科大学微生物与免疫学系，江苏 南京210029

　　【摘要】目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中共刺激分子sCD40L、转化生长因子TGFβ1的测定对疾病活动性的预测价值。方法： 采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SLE患者和正常人血清sCD40L和TGFβ1的水平，分析两种指标的含量与SLE患者的疾病活动度指数SLEDAI和免疫学指标(ANA，dsDNA等)的相关性，并进行SLE病例的前瞻性和治疗前后对照研究。结果： (1)SLE患者血清sCD40L水平为5.87 μg/L，显著高于正常对照组2.31 μg/L;而SLE患者血清TGFβ1为48.3 μg/L，显著低于正常对照组70.4 μg/L。 (2) SLE患者血清sCD40L水平活动期高于稳定期(P<0.05)，ANA高滴度组高于ANA低滴度组，dsDNA抗体阳性组高于dsDNA抗体阴性组，并与SLE患者SLEDAI呈正相关(r=0.253);SLE患者血清TGFβ1水平活动期与稳定期差异无统计学意义(P>0.05)，与SLE患者SLEDAI亦无明显相关(r=-0.071)。(3)以SLE非活动性组的±s作为评判临界值，定量检测sCD40L对SLE活动性的预测具有较好的灵敏度、特异度。结论： sCD40L与SLE发病有关，可反映SLE患者的疾病活动性，定量检测可有助于预测患者的病情活动和转归。

　　【关键词】 系统性红斑狼疮; sCD40L; TGFβ1; SLEDAI

　　Study of the serum sCD40L and TGFβ1 correlating with　the disease activity and the value of therapeutic prediction in

　　systemic lupus erythematosus　XU Hongxing, QIU Dehua, SONG Hengrui, WANG Huijuan, JI Xiaohui

　　(Department of Clinical Laboratory, Department of Dermatology,the Affiliated Suzhou Municipal Hospital of Nanjing Medical University, Suzhou Jiangsu 215002;Department of Microbiology & Immunology,Nanjing Medical University, Nanjing Jiangsu 210029,China)

　　[Abstract]Objective: To study the serum sCD40L and TGFβ1 correlating with the value of therapeutic prediction of the disease activity in systemic lupus erythematosus (SLE).Methods： Mensurated Serum sCD40L and TGFβ1 levels in patients with SLE and healthy controls were detected by using a commercially available ELISA system and the correlation of the levels of two detecting indexes in SLE patients were analyzed with SLEDAI scores and other immune markers (ANA, dsDNA etc) . The judgment of disease activity with the levels of sCD40L and TGFβ1 was also studied. Results： (1)The average level of sCD40L in SLE patients was 5.87 μg/L, higher than 2.31 μg/L in the healthy controls. The average level of TGFβ1 in SLE patients was 48.3 μg/L, lower than 70.4 μg/L in the healthy controls. (2)Serum level of sCD40L was significantly higher in active SLE patients than those in inactive patients (P<0.05), serum level of sCD40L was significantly higher in patients with higher concentration of ANA, positive dsDNA antibody than in patients with lower concentration of ANA, negative dsDNA antibody. The serological level of sCD40L was shown to have a positive correlation with SLEDAI scores(r=0.253).There was no difference between serum level of TGFβ1 in active SLE patients and serum level of TGFβ1 in inactive SLE patients(P>0.05). The level of TGFβ1 was shown to have no correlation with SLEDAI scores(r=-0.071) . (3)The average level ±s of inactive SLE patients was used as the critical value, the determination of serum sCD40L has higher sensitivities and specificities to the value of therapeutic prediction. Conclusion： sCD40L might play certain roles in the pathogenesis of SLE, and might be correlated with the disease activity. The determination of serum sCD40L has the value of therapeutic prediction in systemic lupus erythematosus.

　　[Key words]systemic lupus erythematosus; sCD40L; TGFβ1; SLEDAI

　　近年来研究发现，多种免疫因子的异常在系统性红斑狼疮(SLE)的发病及病程转归中起重要作用。sCD40L属TNF/NGF受体超家族成员，是表达于B细胞或其他抗原递呈细胞(APC)表面的CD40分子的配体，sCD40L与CD40间的相互作用构成了一组重要的共刺激信号，此信号与B细胞的增殖、分化和凋亡密切相关[1，2]。TGFβ是转化生长因子，可通过阻断细胞周期而抑制免疫细胞增殖 [3]。已有研究报告SLE患者血清sCD40L和TGFβ1水平异常，并与病情活动有关。本文通过检测SLE患者血清sCD40L和TGFβ1水平，探讨其与SLE疾病活动性的关系，并采用前瞻性和前后对照研究方法，分析其用于判断SLE患者治疗后转归情况的临床价值。

　　1 对象与方法

　　1.1 病例

　　选自2005年3月至2006年12月本院门诊或住院的SLE患者66例，其中女62例，男4 例，年龄9～64岁，平均年龄33岁(其中36例进行sCD40L、TGFβ1与疾病活动性关系的研究，另30例进行前瞻性和自身对照研究)。所有SLE病例均符合美国风湿病协会(ARA)的诊断标准。根据临床表现及实验室检查指标，参照SLEDAI [4]评分标准，判断SLE的病情活动性，将SLE患者分为活动期(SLEDAI≥10)及缓解期(SLEDAI<10);根据尿蛋白(++)以上和(或)尿红细胞>5个/HP和(或)有无颗粒管型作为有无肾损害判断标准[5]，将患者分成肾损害组及无肾损害组;补体降低组为C3小于0.9 g/L;抗核抗体(ANA)≥1∶1 000为异常高滴度组，ANA<1∶1 000为低滴度组。自身对照研究中，激素治疗方案常规采用泼尼松龙0.5～2.0 mg/(kg•d)，疗程为60～90 d，平均75 d，确定疗程的标准为：根据SLEDAI积分，患者的病情由活动期转为缓解期。

　　正常对照组20例(男3例，女17例)，平均年龄35岁，选自本院健康体检者。

　　1.2 试剂和方法

　　1.2.1 sCD40L和TGFβ的检测

　　sCD40L检测试剂盒(高灵敏度)购自澳大利亚Bender MedSystems公司，TGFβ1检测试剂盒购于晶美生物工程有限公司，严格按说明书进行操作。结果判断：用MicroReader4酶标仪比色，得到D值，以标准品浓度作横坐标，D值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点，通过标本的D值可在标准曲线上查出其浓度。

　　1.2.2 其他实验室指标的检测

　　ANA用Hep2/猴肝为基质的间接免疫荧光法检测;dsDNA抗体用短膜虫为基质的间接免疫荧光法检测。两种试剂均由德国欧蒙公司提供。常规法检测尿常规、尿蛋白定量、补体等项目。

　　1.3 统计学处理

　　两样本均数比较采用t检验。血清sCD40L和TGFβ1与SLEDAI 之间相关性采用Spearman等级资料进行分析。其对SLE活动性评判的灵敏度、特异度计算按《医学统计学》[6]有关公式;疾病活动性的比较用χ2检验。

　　2 结果

　　2.1 SLE患者与正常对照组血清sCD40L,TGFβ1的水平

　　36例SLE患者血清sCD40L水平明显高于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.01);TGFβ1水平明显低于正常对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。进一步分析显示， SLE患者血清CD40L水平活动期高于稳定期(P<0.05)，ANA高滴度组高于ANA低滴度组，dsDNA抗体阳性组高于dsDNA抗体阴性组，肾损害组和补体C3降低组与正常组差异无统计学意义;SLE患者血清TGFβ1水平活动期与稳定期、各对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。表1 SLE患者血清中sCD40L,TGFβ1水平，Tab 1 Serum sCD40L and TGFβ1 levels in patients

　　2.2 SLE患者血清sCD40L,TGFβ1水平与SLEDAI积分的相关性

　　SLEDAI积分与sCD40L存在正相关关系，r=0.253，P<0.05;TGFβ1水平与SLE患者SLEDAI无明显相关(r=-0.071，P>0.05)。SLE患者血清sCD40L与TGFβ1水平之间无相关关系(r=-0.007，P>0.05)。

　　2.3 SLE患者血清sCD40L,TGFβ1水平检测定性结果与病情的关系

　　以正常对照组±2s作为正常值范围，血清sCD40L>5.67 μg/L判定为水平异常升高阳性、TGFβ1<31.8 μg/L判定为水平异常降低阳性，分析SLE患者血清sCD40L,TGFβ1检测定性结果与病情的关系，结果见表2。表2 以正常对照组±2s作为正常值范围时sCD40L，TGFβ1检测定性结果的分布，Tab 2 Distribution of sCD40L and TGFβ1 qualitative results used ±2s of the control group　as the normal value(numbers/percent)。

　　这一结果显示，根据上述sCD40L,TGFβ1的正常值范围，SLE患者sCD40L的阳性例数明显高于TGFβ1阳性例数，显示了sCD40L变化的敏感性。同时，sCD40L阳性的检出率活动性SLE患者高于非活动性患者(χ2=5.4613，P<0.025)，ANA高滴度与ANA低滴度患者相比、抗dsDNA抗体阳性与抗dsDNA抗体阴性患者相比、有肾损害的与无肾损害的患者相比，也呈现增高的趋势，而TGFβ1的阳性检出率在SLE不同病情组别中并未呈现上述趋势。而且，本组20例正常人和18例非活动性SLE共38例血清标本中32例被判sCD40L阴性，显示血清sCD40L定性检查结果对判断活动性SLE的特异性可达84.2%。尽管TGFβ1相应的特异性可达94.7%(36/38)，然而敏感性太低，实际应用时协助诊断意义不大。这一结果提示，sCD40L比TGFβ1更能反映SLE病情。

　　如以非活动性SLE组±s即血清sCD40L>7.95 μg/L,TGFβ1<36.6 μg/L作为预测评判临界值，分析SLE患者血清sCD40L和TGFβ1检测定性结果与发病及病情的关系，结果依然显示, SLE患者sCD40L的阳性例数明显高于TGFβ1阳性例数(表3)，sCD40L阳性检出率活动性SLE患者高于非活动性患者(χ2=4.9846，P<0.05)、ANA高滴度与ANA低滴度患者相比、抗dsDNA抗体阳性与抗dsDNA抗体阴性患者相比，也呈现升高趋势。但对活动性SLE的检出敏感性明显降低，而特异性升高到94.7%(36/38)。表3 以非活动性组±2s作为评判临界值时sCD40L，TGFβ1检测定性结果的分布，Tab 3 Distribution of sCD40L and TGFβ1 qualitative results used ±2s of the inactive group as　the normal value(numbers/percent)

　　由表2,3分析可知，SLE患者血清sCD40L的阳性检出率明显高于TGFβ1的阳性检出率，并与病情相关度较高;当以正常对照组±2s(>5.67 μg/L)作为正常值范围时，sCD40L的阳性检出对活动性SLE有较高的敏感性，对活动性SLE的漏判率为33.3%，可作为对SLE活动性进行预测的初筛标准。当以非活动性SLE组±s(>7.95 μg/L)为临界值标准时，sCD40L的检测对活动性SLE的判断有相当高的特异性，可作为高度提示的标准，对活动性SLE的误判率为5.3%。

　　2.4 30例SLE病例前瞻性及自身对照研究

　　根据以上分析，以正常对照组±2s作为临界值，对另外30例SLE患者，进行sCD40L检测，预测其活动性。同时按SLEDAI评分标准，通过记录临床表现和相关实验室检查，确立其活动性评分。待活动性评分完成后与检测预判结果进行比对。活动性评分结果显示，30例中SLEDAI≥10的活动性者有20例，SLEDAI<10的缓解期或非活动性者为10例，对照sCD40L检测预判结果，其符合率为70.0%(表4)。同时，对其中15例活动期病例进行了治疗前后自身对照，治疗前真阳性11例，假阴性4例;治疗后真阴性10例,假阳性5例。治疗前和治疗后病情活动性判别的符合率分别为73.3%、66.7%。

　　如果用非活动性SLE组±s作临界值来校正，17例原阳性者(14例真阳性，3例假阳性)有12例为阳性(10例真阳性，2例假阳性)，特异性由70%(7/10)上升至80%(8/10)。因此，血清sCD40L水平高于非活动性SLE组±s时，可视为高度提示SLE活动期。

　　3 讨论

　　SLE为典型的自身免疫性疾病，是由于体内免疫系统异常活化，导致免疫失衡所致。近年来各种免疫因子在SLE发病中的作用备受重视[7]，本文主要研究免疫因子中的TNF/NGF受体超家族成员CD40L和转化生长因子TGFβ1在SLE发病中的作用。CD40L主要表达于活化的T细胞上，也表达于B细胞、NK细胞、单核细胞、巨噬细胞和肥大细胞上。大量研究表明，CD40CD40L的作用贯穿于B细胞分化与发育的各个阶段，在T细胞依赖性B细胞的成熟过程中，辅助性T细胞CD40L激发生发中心的CD40分子，使生发中心细胞免于凋亡[8]。 TGFβ1在骨、血小板和成纤维细胞中含量最丰富，是具有多种广泛功能的细胞因子，对细胞外基因表达，基质降解，细胞增殖分化，细胞凋亡功能具有明确作用。正常机体TGFβ1维持着动态平衡，当TGFβ1分泌过多，会引发多种纤维化等疾病;当TGFβ1分泌过少，又会引发自身免疫反应[9]。因此推测此两种因子在SLE的发病过程中起着重要的作用。

　　我们首先检测了36例SLE患者血清sCD40L水平，发现其显著高于正常对照组，活动期水平又高于缓解期，与文献报道一致[10,11];而SLE患者血清TGFβ1水平低于正常对照组，活动期与缓解期差异无统计学意义。同时相关分析表明，血清sCD40L水平与SLEDAI呈正相关;TGFβ1水平与SLEDAI无相关，与赵臣等[12]的研究结果相符，与冯小欣等[13]的结果不符。进一步分析显示，SLE患者血清sCD40L水平与SLE病情(如ANA滴度、dsDNA抗体、肾损害等)的关联程度高于血清TGFβ1水平的关联程度。因此，我们进一步分析了sCD40L异常增高对SLE活动性评判的灵敏度、特异性，当以正常人组±2s为正常值范围时，sCD40L异常增高对预判活动性SLE的灵敏度、特异性分别为66.7%，84.2%，可用作初筛指标;当以此指标进行SLE病例前瞻性及治疗前后自身对照研究时，其符合率分别为70.0%，73.3%，66.7%。如以非活动性SLE组±s为临界值标准，则对活动性SLE的预判特异性可明显提高，但敏感性则明显下降。因此，血清sCD40L水平高于非活动性SLE组±s时，可视为高度提示SLE活动期。将此标准应用于前瞻性及治疗前后自身对照研究，可有助于排除假阳性。而对于血清水平界于正常人组±2s和非活动性SLE组±s之间时，应结合临床进一步观察和评估。

　　比较我们前面研究的[14]同时检测sFas和sICAM1水平用于SLE病情的预测价值(符合率在前瞻性研究为80.0%，在治疗前后自身对照研究中分别达86.7%，73.3%)，sCD40L水平用于SLE病情的预测价值低于同时检测sFas和sICAM1对于SLE病情的预测价值。

　　本研究结果显示，SLE患者血清sCD40L，TGFβ1水平异常，sCD40L与病情活动性相关，测定sCD40L水平对判断SLE的病情活动性具有一定的参考意义。

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