T淋巴瘤侵袭转移诱导基因1在头颈部鳞状细胞癌中的表达及意义
发表时间：2014-10-08 浏览次数：882次
近年来的研究显示因I(Tlymphomainvasion多种肿瘤细胞系中表达，T淋巴瘤侵袭转移诱导基（Tiaml)在其与肿瘤的浸润转移关系密切。我们采用RT-PCR技术检测了基因Tiam1在头颈部鳞状细胞癌中的表达情况，探讨Tiam1表达与头颈部鳞状细胞癌浸润转移的关系，现将结果报告如下。资料与方法一般资料:标本取自广西医科大学附属第一医院耳鼻咽喉科和广西医科大学附属肿瘤医院头颈外科新鲜手术标本，取材后立即置人液氮中保存备用。91例头颈部恶性肿瘤标本经病理检查为鳞状细胞癌男性65例，女性26例，年龄39一75岁，平均年龄58.31岁。91例头颈部恶性肿瘤组织中，鼻咽癌43例，其中I一>I期11例;III期18例，IV期14例;喉癌30例其中声门癌15例，声门下癌3例，声门卜癌12例;8例颈部淋巴结转移癌取自8例声门上癌;上领窦癌6例;扁桃体癌2例;中耳癌2例。正常头颈部组织30例，男性18例，女性12例，年龄20一56岁，平均年龄45.81岁。30例对照组标本经病理检查均证实为头颈部正常组织。2.方法:(1)总RNA的提取、鉴定:，取5Omg冻存组织加人1mlTrizol试剂(lnvitrogen产品)，冰浴中匀浆，按操作说明提取总RNA二用双光束分光光度计测A260值定量，测A260/280值检测其纯度。1.8%变性凝胶电泳分析总RNA完整性。(2)cDNA制备:按逆转录试剂盒(RevertAidTMFermentas产品)说明书操作。取2.0},g总RNA，加人随机引物1},l，再加纯水至12},l。再加5xbuffer4N.,l,RNA酶抑制剂1N 1,10mmol/LdNTP2N,l,25℃水浴5min，加逆转录酶10,1，水浴250C10min,420C60min，再水浴700C:10min停止反应。冰浴后备用。(3)PCR反应条件:①PCR引物序列:Tiaml上游引物为5'-AAGACGTACTCAGGCCA`I'GTCC-3'，下游引物5'-GACCCAAATGTCGCAGTCAG-3'(上海生工产品)。内参照日z微球蛋白上游引物为5'-ACCCCCACT-GAAAAAGATGA-3'，下游引物5'-ATCTTCAAAC-CTCCATGATG-3'(上海生工产品)。②反应体系:应用PCR打一增试剂盒(SK2492上海生工产品)，于50},1反应体系中加人2mmol/I,dNTP5}.}.1,10xPCR缓冲液5闪,10}.a,mo1/LTiaml基因引物(上、下游)各0.8},1，内参照pz微球蛋白引物各1}.},1,25mmol/LMgCLzSN,,I,5U/}},1Taq酶0.6},l，模板DNA5},l,2dHz025.8},1。于MJPTC-220PCR仪循环。Tiaml和内参照(}z微球蛋白同时扩增。Tiaml扩增条件:940C变性45x,550C退火1min,720C延伸1.5min，最后一个周期延伸5min;③最适条件:Tiaml基因最适PCR循环数和用于逆转录的最适总RNA模板量通过1例头颈部鳞状细胞癌组织标本进行确定，以0.25},g,0.75},g,1.25},g的总RNA模板量进行逆转录，取其产物5},L各以29,32,35,38,41个循环数进行PCR，分析产物的值，确定Tiaml基因最适PCR反应条件。内参照}2微球蛋白应用同样的条件同时扩增。(4)半定量PCR:取PCR产物5},l于2.3%琼脂糖凝胶电泳，紫外光下观察结果。Tiaml及队微球蛋白的扩增片段分别为289帅、253by及118帅。用UVP自动凝胶图象分析系统测量各区带的(A值)。Tiaml相对表达水平=TiamlA值/姚微球蛋白A值。每例标本的相对A值重复测3次，取其均值减小误差。3.统计学方法:采用spsslo.o统计软件进行数据分析，计量资料采用均数士标准差(无士、)表示，组间比较使用配对t检验，计数资料的比较采用才检验，以p<o.O5为差异有统计学意义。结果1.TiamlmRNA在对照组和试验组中的表达:Tiaml在头颈部鳞状细胞癌、头颈部正常组织中均有不同程度的表达，其表达水平表1,RT-PCR产物的电泳图谱见图1。测序结果证实，RT-PCR产物为Tiaml基因，其碱基配对正确率为98.0%。2.TiamlmRNA在对照组、淋巴结癌、扁桃体癌及中耳癌中的表达:TiamlmRNA在淋巴结癌、扁桃体癌及中耳癌中的相对表达水平明显高于正常头颈部组织(P<0.001，表2)。3.TiamlmRNA与鼻咽癌、喉癌及上领窦癌各临床指标的关系:TiamlmRNA在不同分期、有无淋巴结转移的鼻咽癌、喉癌及上领窦癌中的表达差异均有统计学意义(P<0.05，表3)。讨论Tiam1基因是从鼠细胞中提取出来，命名为T淋巴瘤侵袭转移诱导基因、人Tiaml在人大脑和皋丸组织中呈高表达率，在肿瘤组织中呈高表达率，在正常组织中表达率很低，甚至不表达。有研究显示，Tiaml在肾细胞癌}2、乳腺癌}3一等组织中呈高表达。我们对头颈部鳞癌的研究结果表明，Tiam1mRNA在头颈部鳞状细胞癌组织中的表达水平明显高于头颈部正常组织，其差异均有统计学意义(尸<0.0l)}TiamlmRNA在淋巴结癌、扁桃体癌及中耳癌中的表达水平明显高于正常头颈部组织，其差异均有统一计学意义(P<0.01)。本研究结果Tiam1在大肠癌4、大细胞肺腺癌[5」中高表达率基本相同。提示Tiam1基因在头颈部鳞状细胞癌浸润过程中可能起重要作用。恶性肿瘤浸润转移是肿瘤和宿主细胞之间一系列复杂、多步骤相互作用的过程和结果。Bour-guign<m等研究发现，Tiam1是一种分离刺激因子(GDS)蛋白质，其与细胞骨架蛋白、锚蛋白相互作用，参与Tiam1-Rac信息传递通路影响，从而引起乳腺肿瘤细胞的致瘤信号转导和转移。本研究中，Ti-amlmRNA在不同分期、有无淋巴结转移的鼻咽癌、喉癌及上领窦癌中的表达差异均有统计学意义(P<0.05)。提示Tiam1mRNA表达与头颈部鳞状细胞癌转移有密切关系。Tiam1基因影响头颈部鳞状细胞癌浸润转移的确切机理尚不十分清楚，但本研究结果显示，Tiaml基因与头颈部鳞状细胞癌的浸润和转移有关，头颈部鳞状细胞癌组织中TiamlmRNA高表达率可为颈部鳞状细胞癌的综合治疗提供潜在的信息指导。参考文献Habets GG，van der Kammen RA .Slam JC，et al. Sequence ofthe human invasion-inducing TIArVII gene，its conservation in e-volution and its expression in tumor cell lines of differeW tissueorigin.Oncogene， 1995，10:1371一1376.Engers R, Zwaka TP, Gohr L, et al. Tiaml mutations in humanrenal-cell carcinomaslf J}.Int J Cancer, 2000, 88:369-376.
