肺癌患者丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)表达水平及临床意义

　　肺癌是严重危害人类健康的疾病，2012美国肿瘤公布的资料显示，其发病率(I3.8%)及病死率(27.4%)均居癌症前列[‘’。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)信号转导通路是生物体内的重要信号通路之一:z，参与细胞的炎症性反应、生长、分化、增殖和生存等生理过程中起重要调控作用。丝裂原活化蛋白激酶1(M.APKl)又称为细胞外信号调节激酶2(extracellularsignal-regulatedkinase2，ERK2)，其分子量41390Da。本文采用ELISA法，检测肺癌患者、良胜肺部疾病患者和健康对照者血浆中MAPKl/ERK2表达水平并进行统计分析，探讨其在肺癌发生发展中的作用。　　对象和方法　　一、本文收集了浙江省宁波市李惠利医院2011年12月一2012年3月具有完整临床和病理资料的一首诊肺癌患者78例。其中男性60例，女性18例。平均年龄63岁(35一83岁)。良性肺部疾病组为同期住院患者27例。其中男性18例，女性9例。平均年龄55岁(25一73岁)。健康对照组为同期门诊健康体检者14例。其中男性9例，女性5例。平均年龄35岁(22~56岁)。　　二、试剂与仪器　　ERK2ELISA试齐、{食(美国UscnLifeScienceInc).酶标仪(BIO-RAD,model680)。　　三、标本采集　　待检查组均空腹无菌抽取外周静脉血2ml手术患者术前，内科患者为放化疗前采血)，EDTA抗凝处理，采集后于30min内2一80(:1000xg离自15min，取上清置于一80℃保存待测。所有标本均无溶血、脂血。　　四、方法　　使用美国Uscn公司制备的ERK2ELISA试剂盒测定待测样本的ERK2浓度。具体操作严格按照试剂盒说明书进行。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)。建立标准曲线后计算待测样品的浓度。　　五、统计学分析　　采用SPSS18.0统计软件进行统计学处理。对两组数据分析采用T检验;对三组及以上数据采用卡方检验，若尸<0.05，再采用SNK-q检验法。结果以无士、表示。　　结果　　一、肺癌组ERK2水平均明显高于良性肺部疾病组和健康对照组(P<0.05)，良险肺部疾病组也高于健康对照组(P<0.05)，采用卡方检验后再采用SNK-q检验法，差异有统计学意义，见表to二、肺癌组中不同病理类型的比较肺癌组ERK2水平的小细胞与非小细胞的比较，采用T检验，差异无统计学意义(P>0.05)，在非小细胞中，鳞癌与腺癌的比较，采用T检验，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2.　　三、非小细胞肺癌ERK2水平在不同临床分期、TNM分期的比较根据第七版NSCLCTNM分期系统标准。非小细胞肺癌血浆ERK2在不同临床分期中表达的比较，采用卡方检验，差异无统计学意义(P>0.05)，见表3;在关于不同的T/N/M分期中表达的比较，其中T分期中3例未确定，N分期中1例未确定，采用卡方检验，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表4.　　四、非小细胞肺癌ERK2水平与性别、年龄、吸烟状况的特征关系吸烟定义:每天吸烟1支以上，连续吸烟6个月;戒烟定义:曾吸烟但戒烟在20年以上。非小细胞肺癌ERK2水平在性别、年龄、吸烟中的比较，差异均无统计学意义(P>0.O5)，见表5.　　讨论　　丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)是细胞内一系列丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，具有高度保守性。活化前的MAPK位于胞浆，一旦活化进人核内激活靶基因。它是细胞内的连续磷酸化的三级酶促级联反应，由MAPKKK(MAPK-kinasekinase)，MAPKK(MAPKkinase)和MAPK三大类组成，其中MAPKK同时具有丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸的双功能激酶。MAPK家族有多个亚族，目前已较为确定的有4个:ERK,JNK,p38和ERKSoERK是第一个被克隆分离鉴别出的MAPKs家族的成员。ERK有ERK1和ERK2两种亚型，分子量分别是44kD和42kB}ERKI/ERK2MAPKs的激活取决于刺激的强度和持续时间，该通路的激活会导致细胞增殖分化。各种有毒物质的刺激可激活ERK通路，促进肺癌细胞增殖。研究〔s「发现在肺腺癌形成早期阶段ERK通路已被激活。理论上，在ERK信号通路中，Ras/Ra#/MEK/ERK任何一个环节的阻断，都有可能使信号转导中断，从而来降低ERK活性抑制肺癌细胞的生长。而蛋白激酶ERK是ERK通路中从胞浆进人细胞核内进而调控细胞转录，可作为肿瘤治疗的分子靶点〔67。在许多肿瘤组织中都能检测到活化或高表达的ERK，如:肺、肾、乳腺、肝、前列腺等肿瘤。MAP-1脱磷酸化使P-ERKl/2失活，通过负反馈调节机制，直接影响ERK的数量和持续时间。　　Wang}}〕等人利用RT-PCR分析20例不同分化程度的SCC和5例正常肺组织标本，发现从正常到恶性程度越高的癌组织MKP-i表达逐步减少(P<0.05)，而P-ERKI/2逐渐增高(P<0.05)，认为两者与肿瘤有正负相关性，可能在SCC发展中起着重要作用，且可能为肺癌的治疗策略提供新的靶向。　　本研究结果显示，ERK2在肺癌血浆中的含量明显高于良性肺部疾病组和健康对照组，同时良性肺部疾病组也高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05);而与年龄、性别、吸烟状况、病理类型、临床分期及TNM分期无明显相关性。　　但是，国内已有研究显示，在肺癌组织标本中采用免疫组化检测ERK1/2或者p-ERKI/2的表达与淋巴结转移有关.　　同时，也有报道显示在喉鳞癌组织中，p-ERK表达与淋巴结转移无关止11。目前，国内外暂无肺癌血浆中ERK含量报道，且本研究与其他研究报道不符原因可能在于实验标本不同。　　以上实验结果表明，ERK信号通路的异常表达和激活与肺癌的发生发展有相关性，且血浆MAPK1/ERK2的检测对肺癌的辅助诊断有一定的临床价值，可作为一项新的肺癌生物标志物应用。　　参考文献　　Siegel R,Naishadham D,Jemal A. Cancer statistics[J].CA:A Cancer Journal for Clinicians,2012,(01):10-29.　　Orton RJ,Sturm OE,Vyshemirsky V,Calder M Gilbert DR Kolch W. Computational modelling of the receptor-tyrosine-kinase-activated MAPK pathway[J].Biochemical Journal,2005,(Pt 2):249-261.　　王冬梅,李为民. 吸烟与肺癌关系的Meta分析[J].中国呼吸与危重监护杂志,2009,(03):229-233.doi:10.3969/j.issn.1671-6205.2009.03.006.　　Marshall CJ. Specificity of receptor tyrosine kinase signaling:transient versus sustained extracellular signal-regulated kinase activation[J].Cell,1995,(02):179-185.　　Lopez-Malpartida AV,Ludena MD,Varela G. Differential ErbB receptor expression and intracellular signaling activity in lung adenocarcinomas and squamous cell carcinomas[J].Lung Cancer,2009,(01):25-33.doi:10.1016/j.lungcan.2008.10.009.　　Dancey J,Sausville EA. Issues and progress with protein kinase inhibitors for cancer treatment[J].Nature Reviews Drug Discovery,2003,(04):296-313.　　Wang K,Zhang M,Qian YY. Imbalanced expression of mitogen-activated protein kinase phosphatase-1 and phosphorylated extracellular signal-regulated kinases in lung squamous cell carcinoma[J].Journal of Zhejiang University Science B,2011,(10):828-834.doi:10.1631/jzus.B1100165.　　谷艳娇,包翠芬,魏嘉. ERK1/2和p-ERK1/2在肺癌组织中的表达及意义[J].中国组织化学与细胞化学杂志,2009,(03).doi:10.3870/zgzzhx.2009.03.018.　　刘宏侠,孙玉满,汪宏斌. pERK和MMP-9在非小细胞肺癌中的表达及临床意义[J].中国肿瘤临床,2008,(14).doi:10.3969/j.issn.1000-8179.2008.14.011.　　聂蓉,朱润庆,姚飞. 磷酸化ERK1/2与Cyclin D1、VEGF在非小细胞肺癌中表达的关系[J].武汉大学学报(医学版),2005,(03).doi:10.3969/j.issn.1671-8852.2005.03.002.