FEZ1和p16在宫颈上皮内瘤变中的表达及临床意义

宫颈癌是女性生殖系统第三大恶性肿瘤,几乎所有的宫颈癌都是由宫颈上皮内瘤变(CIN)进展而来,cIN的诊断和治疗对预防宫颈癌尤为重要,本研究着重探讨新的抑癌基因FEZ1及p16在CIN中的表达及其两者的相关性。

对象与方法

1.研究对象:选取我院2O10年1月至2011年6月手术切除或活检正常宫颈组织10例,CIN I20例、CINⅡⅡ例、CINⅢ们例。患者术前均未接受治疗。所有组织均经病理学检查证实,分级按WHo(1999年)分级标准。

2.主要试剂:鼠抗人p16单克隆抗体(工作液)购自福州迈新生物技术开发公司,兔抗人FEz1多克隆抗体(浓缩液)购自nta cTuz公司。

3.方法:采用免疫组织化学P法,实验步骤按试剂盒说明书进行,以柠檬酸缓冲液高温高压进行抗原修复,DAB显色,同时用PBS代替一抗作为染色阴性对照。用已知的p16染色阳性的肺癌组织片和已知的FEZ1染色阳性的乳腺癌组织片分别作为二者的阳性对照,p16在细胞质和细胞核中均有表达。FEZ1在细胞质中表达,FEZ1稀释浓度1:400。

4.判断标准:根据着色的强弱,不着色为0分,轻度着色为1分,中度着色为2分,强着色为3分;根据着色肿瘤细胞的百分比,无为0分,sO%为3分;两种评分相加,根据0分为-,1~2分为+,3~4分为++,5~6分为+++,进行半定量判断;根据)2分(++和+++)为阳性,≤2分←和+)为阴性,进行定性判断。

5.统计学方法:应用SPSS13.0软件进行统计分析,计数资料比较采用严检验,两样本间相关性分析采用协earman秩相关检验。P<0.O5为差异有统计学意义。

结果

在正常宫颈组织、CIN I、αNⅡ、αNⅢ中,FEZ1的阳性表达率分别为90.0%(9/10)、臼9%(19汐8)、⒗。0%(9⒓5)、20.5%(9/zIO),p16的阳性表达率分别为10.0%(l/10)、1%(9/28)、76.0%(19/95)、92.5%(37/10)。FEZ1在C1N中的阳性表达率明显低于正常宫颈组织(P<0.05),p16则高于正常宫颈组织(P<0.O5)。二者在CIN I与αNⅢ间阳性表达率比较差异均有统计学意义(P<0.01),在αNⅡ与CINⅢ间阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05)。FEZ1在CIN中的表达逐渐减弱(图1~4),p16表达逐渐增强(图5~8)。FEz1与p16在CIN中的表达呈负相关(r=Cl.712,P(0.01),见表1。

讨论  

Ishii等利用微卫星技术对原发性食管癌进行研究,发现在8p22D8s261位点附近存在一个大约2Mb的共同杂合性缺失区域。通过分析发现其中一个候选片段F37在正常组织中有表达,而在癌细胞系中检测不到。Ishii等R将全长F37基因克隆并命名为F37食管癌相关基因编码亮氨酸拉链基因序列。FEZ1定位于sp21,编码一个5%个氨基酸的蛋白质,富含亮氨酸重复序列,主要位于细胞质中向。FEz1参与了保持Ⅱ4c10-clin B1复合体在G9/M期的稳定性四。研究发现,FEZ1蛋白与p3型v蛋白在转染的移行细胞癌株sW780细胞的G舰期发生免疫沉淀印迹反应,在转染的sW780细胞的p34磷酸化活性增加了3倍囹。p3胛溲激酶的活性诱使细胞进人M期,此激酶的失活是细胞结束M期的必要条件。而FEZ1的缺失则导致了此激酶不稳定,使细胞生长繁殖失控。FEZ1和p34cIu-clin B1复合体共同存在于有丝分裂细胞中,FEZ1参与调节有丝分裂,复合体共同发挥作用。目前,国内外研究学者在肺癌、胃癌、乳腺癌、膀胱癌、卵巢癌中对FEZ1有一定的研究阝刈,研究结果均显示FEz1在多种肿瘤中表达下调或不表达,而在良性上皮组织中均表达。因此推测FEZ1的表达缺失与下调可能与肿瘤的发生、发展密切相关。目前对CIN中FEZ1的研究相关报道罕见。本研究结果显示,在CIN中,FEZ1的阳性表达率显著低于正常宫颈组织,并且随着αN分级的增加,FEZ1的阳性表达率降低。提示FEZ1的表达缺失或下调参与了CIN的发生、发展。p16基因是近年发现的一种新型抑癌基因,又称多肿瘤抑制基因1,是Kamb等田于19%年报道的一种新型抑癌基因,位于9号染色体短臂(9`1)上,由3个外显子和2个内含子组成,全长8.5kb。含有一个由148个氨基酸组成的开放阅读框架,具有一个由4个an0Ⅰn序列组成(回钩状重叠的空间构型的蛋白质结构)。p16对细胞周期G1期有特异性调节作用。正常情况下,p16与细胞周期素D竞争CDKz+和CDK6,抑制其活性,使其一系列底物(如Rb)保持持续去磷酸化高活性,而不能解除PRb对转录因子E2F等的抑制,阻止细胞G1期进人期,从而对有丝分裂进行负反馈调节,直接抑制细胞增殖ll9l。已经有研究表明,p16在αNⅡ/Ⅲ或宫颈癌中有较高的阳性表达llR-l。Gu等究显示p16在αN I、Ⅱ、Ⅲ及宫颈癌中的阳性表达率分别为%%(7侈7)、弘%(15沦8)、91%(29/32)、90%(26仡9)。Gurrc,laD饧等卩叼于究p16阳性表达率在αNI、Ⅱ、Ⅲ中分别为20。7%、%.7%和99.4%。本研究结果显示p16阳性表达率在CIN I、Ⅱ、Ⅲ中分别为32.1%(9/28)、(19/25)、92.5%(37//I0),与文献报道基本一致。

本研究结果提示,FEZ1在CIN中异常低表达,p16在CIN中异常高表达,二者表达呈负相关。FEZ1和p16在αNⅡ、Ⅲ中的阳性表达率比较差异无统计学意义,原因可能是CINⅡ、Ⅲ为高级别上皮内瘤变,蛋白表达水平也相近。p16在CIN中的表达研究有较多报道,FEz1目前研究较少,而二者在CIN中的表达关系的报道更少。通过研究二者在αN中的表达及二者的相关性,能够为CIN的诊断提供一个有意义的联合的指标,为临床工作提供帮助。

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