复方隔山消颗粒对慢性萎缩性胃炎模型大鼠白细胞介素-1β和肿瘤坏死因子-α的影响

慢性萎缩性胃炎(CAG)是以胃黏膜腺体萎缩为特征的一种常见消化系统疾病,其伴发的肠上皮化生和中、重度异型增生与胃癌的发生密切相关。阻止和逆转CAG向胃癌发展,对减少胃癌发生率有重要意义。复方隔山消颗粒由隔山消、黄连、白术、三七等1l味中药组成,对大鼠实验性CAG胃部相关病变有较好的治疗作用[1]。本实验进一步观察了复方隔山消颗粒对热盐水诱导CAG模型大鼠白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死囚子-α(TNF-α)含量的影响,旨在探讨其治疗CAG的作用机制。

1 实验资料

1.1 动物 清洁级雄性SD大鼠,体质量(200±20)g,由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供(动物生产许可证号:医动字第19-025号)。

1.2 试药 复方隔山消颗粒,宜昌市夷陵医院制剂室制备,批号:20101025。处方组成为隔山消30g、黄连12g、枳实18g、党参12g、白术12g、茯苓12g、三七7g、白芍9g、法半夏9g、甘草9g、干姜5g,临用时用蒸馏水配制成合适浓度的混悬液;IL-1β和TNF-α试剂盒,北京华英生物技术研究所提供。

1.3 仪器 SN-682型放射免疫γ计数器(上海核福光电仪器有限公司生产),DL-8R冷冻离心机(上海离心机械研究所生产)。

1.4 模型制作及给药方法 取健康SD大鼠110只,随机分为5组,即正常对照组,模型对照组和复方隔山消颗粒低、中、高剂量组,每组22只。除正常对照组外,其余各组均采用热盐水灌胃方法制作CAG动物模型[2]。即用55℃15%氯化钠溶液灌胃,每日1次,每次25mL,共12周。实验开始,先处死5只正常组大鼠,并留取胃大体标本作为对照,以后各造模组每2周处死2只大鼠,取胃标本进行病理检查,以观察胃黏膜萎缩情况,判断造模是否成功。从第13周开始灌服药物治疗,至第20周末结束。其中复方隔山消颗粒低、中、高剂量组分别予复方隔山消颗粒相当于原生药1.25,2.5,5g/(kg·d)剂量灌胃,正常对照组和模型对照组予等量蒸馏水灌胃。

1.5 检测指标及方法 各组动物于末次给药后禁食20h,在麻醉下经腹主静脉采血,3500r/min离心10min,分离血清于-70℃下保存。按试剂盒说明书操作,采用放射免疫法测定血清IL-1β和TNF-α的含量。将大鼠剖腹取全胃,沿大弯剖开,生理盐水漂洗摊平作大体观察,包括黏膜色泽、弹性、皱襞多少,黏液是否丰富。然后沿大鼠胃小弯条状取材,包括胃窦及部分胃体,放人10%甲醛中固定,作病理切片,将腺胃前壁、小弯和后壁自幽门到前胃各取材一条约62.5px×7.5px切片,苏木精-伊红(HE)染色,常规光镜下观察胃黏膜糜烂、萎缩、肠化、增生等情况。

1.6 统计学处理 用SAS6.12统计软件处理。计量数据以X±s表示,组间差异显著性比较采用t检验。以P<0.05s为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃黏膜病理组织学观察 大鼠造模后,从第6周开始,胃黏膜组织病理切片可见腺体萎缩变窄,黏膜肌层和固有层之间有纤维结缔组织增生。到第12周腺体萎缩变窄,可见肠上皮化生,黏膜肌层和固有层之间纤维结缔组织呈束状增生向囝有层插人。治疗12周后,复方隔山消颗粒低剂量组腺体排列尚规则,固有层中可见少量纤维结缔组织增生;复方隔山消颗粒中剂量组腺体排列较规则,固有层中可见少量纤维结缔组织轻度增生;复方隔山消颗粒高剂量组腺体排列较规则,无萎缩,固有层中无纤维结缔组织增生。而模型对照组腺体排列不整齐,萎缩变窄,可见肠上皮化生,黏膜肌层和固有层之间纤维结缔组织呈束状增生向固有层插人。正常对照组腺体排列整齐,黏膜肌层和固有层中无纤维结缔组织增生和炎性细胞浸润。

2.2 各组大鼠血清IL-1β和TNF-α含量比较 造模后模型对照组大鼠血清IL-1β和TNF-α含量明显高于正常对照组(P均<0.01)。经复方隔山消颗粒治疗后,各治疗组大鼠血清IL-1β和TNF-α含量明显低于模型对照组(P<0.O5或0.01)。见表1。

3 讨论

CAG在中医学中属于“胃脘痛”、“痞满”等范畴,病因主要是饮食不节、情志不畅、劳倦内伤,基本病机多认为是阴虚、气滞和瘀血,而益阴行气、活血祛瘀是治疗本病的理想措施[3]。复方隔山消颗粒的组方中,以隔山消养阴补虚、健脾导滞、和胃消胀,辅以党参、茯苓、自术、白芍益气养阴、健脾养血,法半夏、焦三仙、枳实祛痰化食、消积导滞,三七活血化瘀,黄连清胃热,甘草调和诸药,共奏养阴益气、健脾导滞、祛瘀生新之功效。本实验通过观察复方隔山消颗粒对热盐水诱导CAG模型大鼠胃黏膜病理组织学的影响,结果表明,大鼠经12周热盐水连续刺激后,胃黏膜受到不同程度损伤,黏膜腺体萎缩变窄,可见肠上皮化生。经不同剂量的复方隔山消颗粒治疗后,胃黏膜损伤和萎缩程度明显减轻。

IL-1β是一种前炎症因子炎性活细胞素,主要由单核细胞、巨噬细胞等在摄取抗原抗体复合物或抗原递呈过程中产生。在正常生理条件下,IL-1β可以调节全部类型的胃黏膜上皮细胞的功能,抑制胃酸分泌,由于其抑制作用强烈故可导致胃萎缩,甚至发生胃癌[4]。IL-1β基因多态性不仅增加胃癌发病风险,且关联持续存在于癌前病变各阶段,与胃酸过少症及萎缩性胃炎的发生有关[5]。TNF-α主要由T细胞、单核吞噬细胞分泌。适量的TNF-α可参与免疫细胞的活化炎症反应,具有抗感染、抗病毒和抗肿瘤作用;而过量的TNF-α则增强微血管壁通透性,改变黏膜血管内皮细胞反应性,致微血管内凝血,导致细胞破坏,溶酶体漏出,炎性递质释放,使黏膜营养不良。同时,还可以趋化中性粒细胞,增强其吞噬杀伤能力,增强炎症局部淋巴细胞浸润和增殖。TNF-α在胃黏膜组织炎症的发生发展中起着重要的作用,可能是胃黏膜炎症形成初始阶段重要细胞因子之一[6]。本实验结果显示,CAG模型大鼠血清IL-1β和TNF-α水平显著升高。而复方隔山消颗粒各治疗组大鼠血清IL-1β和TNF-α含量明显降低,提示复方隔山消颗粒治疗CAG的机制可能与其抑制IL-1β、TNF-α等细胞因子活性有关。

4 参考文献

[1]李文胜,屈亚莉,屈克义,等.复方隔山消颗粒对大鼠慢性萎缩性胃炎的治疗作用[J].中国中西医结合消化杂志,2006,14(6):363-368.

[2]张沥.热盐水致大鼠萎缩性胃炎动物模型建立[J].世界华人消化杂志,2002,10(5):571-574.

[3]苑述刚.阴虚气滞瘀血与慢性萎缩性胃炎的关系[J].中国中西医结合消化杂志,2003,11(5):293-294.

[4]EL-Omar M.The importance of interleukin1βin Helicobacter pylo-ri associated disease[J].Gut,2001,48(6):743-747.

[5]Rad R,Dossumbekova A,Neu B,et al.Cytokine gene polymorph-isms influence mucosal cytokine expression,gastric inflammation,and host specific colonisation during Helicobacter pylori infection[J].Gut,2004,53(8):1082-1089.

[6]Fujiwara Y,Arakawa T,Fukuda T,et al.Interleukin-8simulates leukocyte migration across a monolayer of cultured rabbit TNF,IL-1,IL-8and IL-lra in Monosodium Uratecrystalinduced rabbitar-thritis[J].Lab Invest,1998,78(5):559.