鼻咽癌中ki67与ezrin蛋白的表达及意义

　　作者：韦祝新1,李萍2,马姗姗1　　作者单位：1.广西医科大学第一附属医院放疗科，广西 南宁　530021;2. 广西医科大学第一附属医院病理科，广西 南宁

　　【摘要】目的：探讨ki67与ezrin蛋白在鼻咽癌组织中的表达，探讨它们之间的关系及临床意义。方法：采用免疫组织化学方法检测66例鼻咽癌组织中ki67及ezrin蛋白的表达，分析两种蛋白的表达与患者性别、年龄、临床分期、颈部淋巴结转移的关系及它们之间的相关性。结果：ki67在所有鼻咽癌组织中均有表达，其中高表达者43例(65.2%)，低表达者23例(34.8%)，其表达率在女性及临床分期晚者(Ⅲ+Ⅳ期)中显着高于男性及临床分期早者(Ⅰ+Ⅱ期)。ezrin在66例鼻咽癌组织中表达阴性18例(27.2%)，阳性(+) 34例(51.5%)，强阳性(++)14例(21.2%);临床分期晚者(Ⅲ+Ⅳ期)中表达率显着高于临床分期早者(Ⅰ+Ⅱ期)。ki67与ezrin蛋白的表达间无显着相关性。结论：ki67及ezrin的表达率对鼻咽癌的生物学行为、恶性进展有一定的提示意义，但二者间的相互作用尚不明了。

　　【关键词】 ki67; ezrin; 鼻咽癌

　　[ABSTRACT] Objective： To investigate expression of ki67 and ezrin in nasopharyngeal carcinoma， and to explore the association of these two proteins and their clinical significance. Methods： The expression of ki67 and ezrin in 66 cases of nasopharyngeal carcinoma were detected by immunohistochemistry methods. The relationships between expression of two proteins and patients′ gender， ages， clinical stages， cervical lymph node metastasis were analyzed. Besides， the association between two proteins was also analyzed. Results： ki67 was detected in all of 66 cases of nasopharyngeal carcinoma. The highly expressing of ki67 was observed in 43 cases (65.2%)， low expression in 23 cases(34.8%). And the expression rate was significantly higher in female patients and patients at Ⅲ&Ⅳ. ezrin was negative in 18 cases(21.2%)， positive(+) in 34 cases(51.5%)， and strong positive(++) in 14 cases(20.6%).The ezrin expression rate was significantly higher in patients at Ⅲ&Ⅳ stage. The expression of ki67 showed no significant correlation with that of ezrin. Conclusions： The expression rates of ki67 and ezrin are indicative indexes in biological behaviour and malignant progression of nasopharyngeal carcinoma， but their interaction remains unclear.

　　[KEY WORDS] ki67; ezrin; Nasopharyngeal carcinoma

　　作为中国南方高发的恶性肿瘤，鼻咽癌是影响南方人群健康的重要疾病之一。过去10～20年中，鼻咽癌患者的5年生存率未见明显改善，这与不同患者有着不同的分子标志物表达有一定关系。即使是具有相同性别、年龄、临床分期的患者，也可因分子标志物表达的不同而表现不同的预后。故研究鼻咽癌患者分子标志物的表达及其机制对鼻咽癌的病因研究、治疗、预后判断等有重要意义。本文旨在研究ki67与ezrin蛋白在鼻咽癌中的表达，探讨它们之间的关系及其临床意义。

　　1　材料和方法

　　1.1　临床资料

　　收集本院放疗科2003年～2006年鼻咽癌患者66例。其中男性49例，女性17例;年龄15～73岁[(44.91±1.46)岁];颈淋巴结转移者39例，无颈淋巴结转移者27例;临床分期Ⅰ期2例，Ⅱ期21例，Ⅲ期23例，Ⅳ期20例;病理类型除1例未分化癌，2例泡状核细胞癌外，其余均为低分化鳞状细胞癌。所有患者取材前均未接受任何治疗。

　　1.2　免疫组化试剂及方法

　　鼠抗人ki67单克隆抗体购自福州迈新公司。鼠抗人ezrin抗体及免疫组化试剂盒购自上海长岛生物技术有限公司。所有标本经4%多聚甲醛液固定，石蜡包埋，5 μm连续切片，按试剂盒说明书进行操作。用已知阳性片作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。

　　1.3　结果判断

　　ki67阳性结果为细胞核着色，着色强度均较强，为棕黄色。光镜下随机计数5个高倍镜视野，阳性细胞百分率<5%时为“-”;5%～20%为“+”;20%～40%为“++”;40%～75%为“+++”;≥75%时为“++++”。 表达为“-”、“+”、“++”者为低表达，表达为“+++”、“++++”者为高表达。 ezrin阳性结果为细胞膜或细胞浆着棕黄色。结果先按癌细胞阳性百分率记分：<5%为0 分，5%～25%为1 分，26%～50%为2 分，51%～75%为3 分，>75%为4 分;而后按着色强度记分：0 分为无着色，1分为淡黄色，2 分为黄色，3 分为棕黄色;两者积分之和：0～1分为“-”，2～3 分为“+”， 4～7 分为“++”。

　　1.4　统计学分析

　　采用SPSS 16.0 统计软件处理，统计方法包括卡方检验、Spearman 相关分析。P<0.05 为差异有统计学意义。

　　2　结果

　　2.1　ki67和ezrin蛋白在鼻咽癌组织中的表达

　　66例鼻咽癌组织均有ki67蛋白表达，无1例阴性; 表达“+”者6例(9.1%)，“++”者17例(25.8%)，“+++”者25例(37.9%)，“++++”者18例(27.3%)。其中低表达者23例(34.8%)，高表达者43例(65.2%)。ezrin蛋白在18例鼻咽癌组织中无表达(“-”，27.2%);表达“+”者34例(51.5%);表达“++”者14例(21.2%)(图1、2)。ki67阳性信号定位于细胞核图1　ki67蛋白在鼻咽癌组织中的表达(免疫组化 40×10)ezrin阳性信号定位于细胞浆图2　ezrin蛋白在鼻咽癌组织中的表达(免疫组化 40×10)

　　2.2　ki67与ezrin蛋白与鼻咽癌临床参数的关系

　　ki67的表达仅在不同性别及临床分期之间表现出显着差异，而在年龄、有无颈部淋巴结转移间无显着差异。由表1可见，17名女性的ki67高表达率显着高于49名男性的表达率。临床分期Ⅰ、Ⅱ期者的ki67表达率显着低于Ⅲ、Ⅳ期患者，可见随着临床分期的增高，ki67的表达率显着上升。ezrin蛋白的表达临床分期低者(Ⅰ+Ⅱ期)阳性表达率显着低于临床分期高者(Ⅲ+Ⅳ期)。但ezrin蛋白的表达在性别，年龄，淋巴结转移间未显示显着性差异。表1　ki67与ezrin蛋白与临床参数的关系

　　2.3　ki67与ezrin蛋白在鼻咽癌组织中表达的相关性

　　Spearman相关分析结果显示，二者的相关系数为0.081，P值=0.517。鼻咽癌组织中ki67的表达与ezrin的表达无显着相关关系。

　　3　讨论

　　ki67蛋白是1983年Gerdes等用霍奇金瘤系L428细胞的粗核成分免疫鼠后首次制备出的一种核抗原[1]。ki67基因定位于人染色体上10q25(ter)上，是一个周期相关基因，也是细胞核增殖相关基因，与细胞增殖成正比， 在有丝分裂中起着维持DNA规则结构的重要作用[2]。ki67蛋白的分子结构为双链，重量分别为345 kD和395 kD。ki67的表达情况反映了细胞增殖状态， 其标志指数的高低与肿瘤增殖的活跃程度及预后呈正相关， 是目前应用最广泛的增殖细胞标记之一。

　　ezrin 是1981年由Bretscher在鸡的小肠上皮细胞刷状缘中首次被纯化而[3]，是ERM (Ezrinradixin-moesin)家族中第一个被发现的成员。ezrin基因定位于人染色体6q25-6q26，长约24 kb，含有13个外显子。ezrin蛋白的相对分子量约为81 kD，由585个氨基酸组成。ezrin氨基端与细胞膜相连，羧基端与肌动蛋白的核心相连，通过不同的膜表面分子信号传导及跨膜信号传导途径，发挥不同的功能[4]，参与细胞的生存、黏附、增殖、迁移等过程。

　　众所周知，ki67在多种实体恶性肿瘤中的表达远高于正常组织， 并与恶性肿瘤如乳腺癌[5]、子宫内膜癌[6]等的发生、转移及预后有关。有研究者认为ki67可作为评估鼻咽癌患者放射敏感性、预测预后的独立指标之一[7]。有学者研究发现，ki67的表达与患者临床分期有关[8]，本研究表明，当患者处于临床分期较早期(即Ⅰ+Ⅱ期)时，其癌组织的高表达率为47.8%，显着低于临床分期晚者(即Ⅲ+Ⅳ期)(74.4%)。随着临床分期的增高，ki67的表达率增高。而本研究还发现，ki67的高表达情况在不同的性别间也有显着差异，女性较男性表达高，但在国、内外同类研究中未发现相似结果，可能与样本本身的代表性及样本量的多少有一定关系。

　　近年来，有关ezrin与恶性肿瘤的发生、生物学行为及预后等方面的研究日益增多。如Chen 等发现，ezrin蛋白上的苏氨酸高磷酸化状态与肝癌的侵袭表现及坏结局紧密切密相关[9]。Ou-Yang 等发现敲除掉ezrin基因后导致的ezrin蛋白的完全缺失能使胃癌细胞株SGC-7901的迁移及侵袭力降低[10]。本研究表明ezrin在鼻咽癌组织的表达情况与ki67的表达有相似现象，即临床分期晚者的ezrin表达率(81.4%)显着高于临床分期早者(56.5%)。但ezrin的表达率与患者性别、年龄、颈部淋巴结转移情况等无明显关系。该研究结果与武丹等的相符合[11]。

　　本研究显示鼻咽癌中ki67的表达与ezrin的表达具有相似的表现，即都随着临床分期的增高表达率增加，这表明二者对鼻咽癌的生物学行为、恶性进展等有一定的提示意义。但本研究对66例鼻咽癌组织的ki67和ezrin的表达行相关分析却未发现二者的表达出现显着相关关系。这提示肿瘤细胞的增殖状态与肿瘤细胞的迁移、粘附等功能间存在着一系列复杂的过程，受诸多调控因素的控制。其作用机制仍有待进一步研究。

　　【参考文献】

　　1　Gerdes J， Schwab U， Lemke H， et al. Production of a mouse monoclonal antibody reactive with a human nuclear antigen associated with cell proliferation [J]. Int J Cancer,1983， 31(1)：13-20.

　　2　Sawhney N， Hall PA. Ki67-structure function and new antibodies[J]. J Pathology， 1992， 168(2)： 161-162.

　　3　Bretscher A. Purification of an 80 000-dalton protein that is a component of the isolated microvillus cytoskeleton， and its localization in nonmuscle cells[J]. J Cell Biol， 1983， 97(2)： 425-432.

　　4　Krishnan K， Bruce B， Hewitt S， et al. Ezrin mediates growth and survival in Ewing′s sarcoma through the AKT/mTOR， but not the MAPK， signaling pathway[J]. Clin Exp Metastasis， 2006， 23： 227-236.

　　5　Ellis MJ， Suman VJ， Hoog J， et al. Randomized phase II neoadjuvant comparison between letrozole， anastrozole， and exemestane for postmenopausal women with estrogen receptor-rich stage 2 to 3 breast cancer： clinical and biomarker outcomes and predictive value of the baseline PAM50-based intrinsic subtype-ACOSOG Z1031[J]. J Clin Oncol， 2011， 29(17)： 2342-2349.

　　6　Stoian SC， Simionescu C， Mrgritescu C. Endometrial carcinomas： correlation between ER， PR， Ki67 status and histopathological prognostic parameters[J]. Rom J Morphol Embryol， 2011， 52(2)： 631-636.

　　7　Ma BB， Poon TC， To KF， et al. Prognostic significance of tumor angiogenesis， Ki67， p53 oncoprotein， epidermal growth factor receptor and HER2 receptor protein expression in undifferentiated nasopharyngeal carcinoma-a prospective study[J]. Head Neck， 2003， 25 (10)： 864-872.

　　8　申玉梅， 齐文娟， 申洪.鼻咽癌组织中Ki67表达的阳性单位与癌转移、TNM分期及患者生存时间的关系[J]. 中国体视学与图像分析，2010， 15(2)： 213-218.

　　9　Chen Y， Wang D， Guo Z，et al. Rho kinase phosphorylation promotes ezrin-mediated metastasis in hepatocellular carcinoma[J]. Cancer Res， 2011， 71(5)： 1721-1729.

　　10　Ou-Yang M， Liu HR， Zhang YERM stable knockdown by siRNA reduced in vitro migration and invasion of human SGC-7901 cells[J]. Biochimie， 2011， 93(5)： 954-961.

　　11　武丹，罗元，姚忠强，等. Rho A和Ezrin蛋白在鼻咽癌组织中的表达及临床意义[J]. 中国癌症防治杂志， 2010， 2(4)： 276-279.