乳腺浸润性导管癌微血管计数和VEGF及MMP3的表达及其意义
发表时间：2012-04-26 浏览次数：465次
作者：原学斌 张建斌
摘要 目的:研究乳腺癌组织中微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶3(MMP3)与乳腺癌侵袭转移、预后的关系。方法:采用免疫组化S-P法检测50例乳腺癌及8例正常乳腺组织的VEGF和MMP3的表达。结果:乳腺癌组织MVD值，VEGF，MMP3阳性表达率显著高于正常乳腺组织(P<0.05)，乳腺癌组织MVD，VEGF，MMP3的表达强度与乳腺癌临床分期，淋巴结转移有显著相关关系(P<0.05)。结论:MVD值增高提示乳腺癌侵袭转移潜能增加，VEGF、MMP3可能作为乳腺癌转移及预后的重要指标。
关键词 乳腺癌;微血管密度;血管内皮生长因子;基质金属蛋白酶3
肿瘤的生长和转移不仅依赖于肿瘤实质细胞的增殖，而且与肿瘤间质内新生血管的形成及细胞外基质的降解有关 [1] 。新生血管(angiogenesis)形成是肿瘤发生、发展中的关键环节之一。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是内皮细胞最有效和特异的生长因子。基质金属蛋白酶3(matrix metalloproteinases，MMP3)可通过细胞外基质的降解，促进肿瘤血管形成和肿瘤转移。本文研究了微血管密度MVD，VEGF，MMP3在乳腺癌中的表达，探讨其临床病理意义。
1 材料方法
1.1 一般资料
收集我院1989年～2002年经手术切除的乳腺癌标本50例，年龄20岁～70岁，平均45岁，全部病例均行乳腺癌根治术或改良根治术，并经病理证实，术前均未行放疗、化疗。另取正常乳腺组织8例作为对照。
1.2 主要试剂和方法
鼠抗人CD34单克隆抗体，兔抗人VEGF多克隆抗体、鼠抗人MMP3单克隆抗体及S-P试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司，参考试剂盒说明书进行。石蜡切片，厚度4μm，免疫组化S-P法，阴性对照以PBS液代替一抗，阳性对照为结肠癌组织。
1.3 结果判断
1.3.1 CD34阳性判断及MVD计数采用Weid-ner [2] 法来判断阳性结果:以与肿瘤细胞和结缔组织成分明显有别的任何一个染成棕色的内皮细胞或细胞丛作为一个血管相，先在低倍镜下(10×10)寻找肿瘤内血管高密度区(hotspot)，然后在高倍镜下(10×40)计数5个血管高密度区的微血管数，取其平均值代表MVD。
1.3.2 VEGF、MMP3阳性表达均为肿瘤细胞染成棕黄色，评价均采用Frank [3] 等提出的半定量记分法，高倍镜计数1000个肿瘤细胞，将阳性肿瘤细胞的百分率及染色强度分别计分。染色强度:阳性细胞染色强度为无染色为0分，染成棕黄色为1分，染成中等棕黄色为2分，染成深棕黄色或胞浆中出现深棕黄色斑块为3分;阳性细胞数<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分，两项指标之和0分为阴性，1分～3分为弱阳性(+)，4分～7分为强阳性()。
1.4 统计学方法
计量资料数据以均数±标准差表示，单因素方差分析，计数资料采用秩和检验，χ 2 检验。P<0.05表示有显著意义。
2 结果
2.1 乳腺癌组与对照组MVD，VEGF、MMP3比较。乳腺癌组MVD值(50.36±26.92)与正常组(14.38±3.58)比较显著增高P<0.05;乳腺癌组VEGF阳性32例(64%)，MMP3阳性1例(62%)，正常乳腺组织VEGF，MMP3阳性率均为12%，二者与正常乳腺组织之间均差异显著P<0.05(见表1)。
表1 乳腺癌组与对照组MVD、VEGF、MMP3比较 (略)
2.2 乳腺癌组MVD与肿瘤大小无显著性意义，临床Ⅲ期比Ⅰ期～Ⅱ期，有淋巴结转移比无淋巴结转移MVD值显著增高P<0.05，VEGF和MMP3的表达与肿瘤大小、临床分期及淋巴结转移有显著相关关系(见表2)。
表2 MVD、VEGF和MMP3的表达与临床病理的关系(略)
注:*与>5cm比较P>0.05;**P<0.01;△与Ⅰ～Ⅱ期比较P<0.01;▲与有淋巴结转移组比较P<0.05
3 讨论
新生血管为肿瘤快速生长提供营养，促使肿瘤增殖，在血管新生过程中有大量促血管生成因子的参与，其中VEGF不但有促血管新生作用，还有促淋巴管形成作用。本研究显示肿瘤组织的MVD平均值显著高于正常乳腺组织，提示血管新生同样在乳腺癌的发展中起重要作用，MVD与临床分期及淋巴结转移有密切关系，由此推测MVD可能与乳腺癌的转移和预后有关。
VEGF是一种选择性促内皮细胞有丝分裂原，能直接刺激血管生长。Folkman [4] 等研究认为，当实体肿瘤直径≥2mm时，为了保持恶性肿瘤的无 限制性侵袭生长，肿瘤必须依赖持续和广泛的新生血管形成。有报道VEGF与乳腺癌的不良预后有关。MMP3(亦称溶基质素)是一种重要的蛋白水解酶，通过降解细胞外基质中的粘蛋白、纤维连结蛋白、层粘连蛋白，使癌细胞侵袭能力明显增强。有报道MMP2在乳腺癌浸润转移中具有重要作用，而对MMP3的报道较少。
乳腺癌等肿瘤细胞均有VEGF、MMP3高表达，而正常乳腺VEGF、MMP3表达极弱或不表达，本组50例乳腺癌标本VEGF、MMP3阳性率明显高于对照组，提示癌细胞分泌VEGF，可促进肿瘤血管形成并参与血管内皮细胞增殖，同时癌细胞还分泌MMP3促进瘤细胞外基质降解，利于肿瘤侵袭和转移。研究表明，VEGF、MMP3与肿瘤病理有关，本实验显示VEGF、MMP3与肿瘤大小、临床分期及淋巴结转移有显著相关关系P<0.05，由此推测VEGF、MMP3可能是乳腺癌淋巴结转移的重要指标。
乳腺癌侵袭转移和预后与血管生成有密切关系，MVD值增高提示乳腺癌转移侵袭潜能增加，VEGF和MMP3在同一种肿瘤中高表达，显示二者之间具有相互诱导和支持作用，利于癌细胞浸润转移，我们同时检测MVD、VEGF、MMP3作为乳腺癌浸润转移的指标，对展开肿瘤治疗和研究具有重要意义。
参考文献
1.王 岩，刘晓霞，侯正文，等.基质金属蛋白酶及其抑制剂在乳腺癌浸润转移中的作用.临床与实验病理杂志，2002，18:273
2.Weidner N，Semple JP，Welch WR，et al.Tumor angiogenesis and metastasis:correlation in invasive breast carcinoma[J].N Engl J Med.1991，324:(1):1～8
3.Frank B，Michael V，Sylvia C，et al.Ras p21expression in progres-sion of breast cancer.Hum Path，1987，1268～1275
4.Folkman J，Shing Y.Angiogenesis.J Biol Chem，1992，267:10931～10934
