胶质瘤bcl-2的表达及其临床意义

　　作者：买正军，马小琴，孙涛，夏玉成 作者单位：1.宁夏医科大学附属医院，宁夏 银川 750004　2.宁夏银川市第一人民医院，宁夏银川 750001

　　【摘要】 目的 测定bcl-2在胶质瘤的表达水平，探讨其在人胶质瘤中的作用。方法 用免疫组化法测定在61例不同级别星形细胞瘤以及10例正常脑组织和瘤旁组织中的bcl-2蛋白表达。结果 61例胶质瘤中，47例(77.05%)bcl-2蛋白表达，I、II级组低于III级组，IV级组最高;bcl-2蛋白表达与肿瘤恶性程度成正相关(R=0.552,P<0.01)。正常脑组织中，bcl-2蛋白在小脑及大脑皮质颗粒细胞层有表达。结论 bcl-2蛋白表达与肿瘤恶性程度成正相关。

　　【关键词】 胶质瘤;bcl-2

　　Expression and significance of Bcl-2 protein in patients with gliomas

　　MAI Zheng-jun, SUN Tao, XIA Yu-cheng.

　　(The Affiliated Hospital of Ningxia Medical University, Yinchuan 750004, China)

　　[Abstract]Objective To detect bcl-2 expression level in astrocytomas and to explore their roles in human gliomas with histologic maligmancy. And to explore the cell proliferation, apoptosis and their relationship.Methods Expressions of bcl-2 were examined in normal brain tissues, adjacent tissues of gliomas and 61 human astrocytomas with different malignant grades by immunohistochemistry.Results Out of the 61 gliomas, 47 (77.05%) expressed bcl-2 protein. The expression levels of bcl-2 protein were higher in grade IV than that in grade III gliomas, and the expression was lower in grade I and II gliomas (P<0.05). The expression levels of bcl-2 protein were correlated positively with histological malignancy (R=0.552 P<0.01). bcl-2 protein was observed from granular layer in cerebral and cerebella cortex in normal brain tissue.Conclusion The expression levels of Bcl-2 protein were correlated positively with histological malignancy.

　　[Key words]Gliomas, Bcl-2

　　胶质瘤是颅内最常见的原发肿瘤，约占颅内肿瘤的44.69%，而星形细胞瘤又是胶质瘤中最常见的肿瘤，约占21.2%-50.6%。大多数肿瘤呈浸润性生长，表现出其恶性生物学行为，肿瘤细胞的增殖是首先考虑的问题。bcl-2家族被认为是凋亡调控机制中重要的一类蛋白酶，具有抑制细胞凋亡的作用[1,2]。本文用免疫组方法检测bcl-2蛋白在胶质瘤中的表达，以明确它们在胶质瘤中的作用。

　　1 材料和方法

　　1.1 标本来源：收集1996-2000年宁夏医科大学附属医院手术切除的脑胶质瘤标本61份，男38例，女23例，平均年龄35.6岁。病人术前均未行放疗或化疗。肿瘤标本包括61例星形细胞瘤，根据WHO标准[3]进行分级和分类，其中I级14例(毛细胞性星形细胞瘤8例，室管膜下巨细胞性星形细胞瘤6例)，II级13例(纤维性星形细胞瘤5例，原浆性星形细胞瘤5例，多形性黄色星形细胞瘤3例)，III级22例(间变性星形细胞瘤)，IV级12例(胶质母细胞瘤)。10例取自尸检的非精神和神经性疾病的正常脑组织作为对照;收集星形细胞瘤的瘤旁组织10例。

　　所取标本均经4%福尔马林固定，石蜡包埋，4-5μm连续切片，HE染色行病理组织学诊断。

　　1.2 抗体与试剂：小鼠抗人bcl-2单克隆抗体、过氧化物酶标记的链霉素亲合素试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色剂，均为美国ZYMED公司产品;柠檬酸组织抗原修复液(Maixin.Bio公司产品)，多聚左旋赖氨酸(Poly-L-Lysine，Sigma公司产品)。以上试剂均自福州迈新生物技术开发公司购进。

　　1.3 试验方法：采用S-P法(链霉素亲生物素-过氧化物酶连接法)，用慢性扁桃体炎及淋巴结炎为阳性对照，阴性对照用PBS液作为一抗。

　　用装有目镜网格测微尺400倍视野计数8个网格中bcl-2阳性肿瘤细胞数和阴性肿瘤细胞数，取其均值以百分数表示，根据阳性肿瘤细胞所占百分比分为4级：<5%为-;5%-25%为+;26%-49%为++;≥50%为+++。

　　1.4 统计学方法：组间比较用χ2检验，确切概率法，等级相关分析用Spearman相关分析。

　　2 结果

　　2.1 bcl-2蛋白表达：bcl-2蛋白阳性肿瘤细胞为膜着色。61例肿瘤组织中有47例(77.05%)肿瘤细胞不同程度表达bcl-2蛋白。bcl-2蛋白阳性等级构成与肿瘤病理分级经等级相关检验证实呈正相关(R=0.552，P<0.01，表1)。阳性率随肿瘤级别增高而增加。经检验证实，I、II级组与III级组及IV组阳性率差别有统计学意义(P<0.05-0.01，表2)。表1 bcl-2蛋白在不同级别胶质瘤的表达(略)注：经Spearman等级相关证实bcl-2蛋白表达与病理分级成正相关(R=0.552 ，P<0.01)表2 bcl-2蛋白质在不同级别胶质瘤组间阳性率的比较(略)注：各组间阳性率比较，χ2=9.486，P<0.01;组间两两比较，I、II级组与III级组比较，P<0.05;I、II级组与IV级组比较，P<0.01;III级组与IV级组比较，P>0.05

　　2.2 正常脑组织中：bcl-2蛋白在小脑皮质颗粒细胞层浅层，大脑皮质颗粒层呈条带状均匀分布。

　　2.3 瘤旁组织中：在瘤旁组织中并未见到bcl-2蛋白表达。

　　3 讨论

　　肿瘤的发生是多种基因综合作用结果，这些基因作用在肿瘤细胞增殖和凋亡的不同环节中互相作用，平衡失调或凋亡抑制，导致肿瘤细胞过度增殖，从而肿瘤细胞表现出其无限蓄积的恶性行为[4]。在胶质瘤研究中发现，随着胶质瘤病理分级的增加，增殖细胞核抗原(PCNA)阳性表达也随之增高，说明星形细胞瘤随着恶性程度增加，表现出肿瘤细胞增殖旺盛的生物学行为。但星形细胞瘤的凋亡发生情况又是如何，本文用抗凋亡蛋白bcl-2蛋白在星形细胞瘤组织中的表达，以明确星形细胞瘤的凋亡发生情况。实验证实，bcl-2蛋白在肿瘤细胞阳性等级构成与肿瘤病理分级成正相关，I、II级组与III级组、IV级组有统计学意义。胶质细胞瘤有bcl-2蛋白的过度表达，随着肿瘤恶性程度增加而递增，说明在星形细胞瘤中，肿瘤细胞有较强的增殖活性[5,6]，肿瘤生物学行为表现出恶性进展的过程，从而引起肿瘤细胞的蓄积，表现出恶性生物学行为。

　　在实验中发现瘤旁组织神经元未发现bcl-2的表达，肿瘤对周围正常组织的侵袭有局部压迫，局部破坏或干扰正常器官的功能，而侵袭是肿瘤生长所必需的早期过程[7]。研究认为胶质瘤的侵袭有多因素参与，bcl-2蛋白在实验中见于小脑皮质颗粒细胞层浅层及大脑皮质颗粒细胞层，而有人证实在人海马锥体细胞层的神经元及齿状回和内嗅区的颗粒细胞层有bcl-2蛋白的表达，也有报道在小脑皮层的Golgi细胞发现有bcl-2蛋白的表达，说明其在正常神经细胞的存活中起着作用[8-10]。

　　总之，肿瘤的增殖、凋亡、抗凋亡之间的动态平衡的失调与肿瘤的发生、发展密切相关，是一个多因素复杂过程，明确肿瘤增殖和凋亡的机制以及相互作用关系，对肿瘤的治疗会提供有益的帮助。

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