内源性尿激酶及其受体在冠心病患者中的临床意义

　　作者：郑振达,陈璘,赵长林,熊肇军　　作者单位：中山大学附属第三医院 心内科， 广东 广州

　　【摘要】【目的】 探讨内源性u-PA及u-PAR在不同类型冠心病患者中的临床意义。【方法】 急性心肌梗死(AMI)组30例，不稳定型心绞痛(UA)组25例，稳定型心绞痛(SA)组20例，非冠心病(NCAD)组30例，分别检测四组研究对象入院时及入院后2周血浆u-PA浓度和全血中性粒细胞表面u-PAR表达率。【结果】 四组研究对象入组时和入组后2周血浆u-PA浓度及全血中性粒细胞表面u-PAR表达率差异均有统计学意义，AMI组明显高于UA组(P < 0.001)，UA组明显高于SA组(P < 0.001)，而SA组与NCAD组相比，差异无统计学意义(P > 0.05);入组后2周血浆u-PA浓度及全血中性粒细胞表面u-PAR表达率与入组时比较差异无统计学意义(P > 0.05)。【结论】不同类型的冠心病患者，内源性u-PA及u-PAR的变化情况是不同的，稳定型心绞痛即有上升趋势，不稳定型心绞痛升高较明显，而急性心肌梗死升高最明显。

　　【关键词】 冠心病;纤溶;尿激酶型纤溶酶原激活物;尿激酶受体

　　Significance of Endogenous Urokinase-type Plasminogen Activator and Its Receptor in Patients with Coronary Heart Disease ZHENG Zhen-da， CHEN Lin， ZHAO Chang-lin， XIONG Zhao-jun， QIAN Xiao-xian， PENG Zhao-quan， ZHOU Han-jian， LIU Jin-lai ( Department of Cardiology， The Third Affiliated Hospital， SUN Yat-sen University， Guangzhou 510630， China ) Abstract： 【Objective】 To uncover the clinical roles of endogenous u-PA and u-PAR in different types of coronary heart disease. 【Methods】 We divided all the cases into four groups： 30 cases in NCAD group， 20 cases in SA group， 25 cases in UA group， 30 cases in AMI group. In all these groups， the expression of u-PAR on neutrophile with flow cytometry and measured the levels of u-PA in plasma were measured with a solid phaseenzyme-linked immuneosorbent assay (ELISA) when the cases were brought into this study and two weeks after they were brought into this study. 【Results】 The difference between the expression levels of u-PAR on neutrophile and the plasma levels of u-PA when the cases were brought into this study and two weeks after they were brought into this study was significant. The AMI group were higher than the UA group (P < 0.001); the UA group were higher than the SA group (P < 0.001); however the different between the SA group and the NCAD group was not significant (P > 0.05); the difference of the expression of u-PAR on neutrophile and the plasma levels of u-PA between the cases were brought into this study and two weeks after was not significant (P > 0.05).【Conclusion】 The change of endogenous u-PA and its receptor are different in different types of coronary heart disease patients. There is an ascending trend of u-PA and its receptor in the SA group， the ascending trend is more significant in the UA group， and the most significant in the AMI group.

　　Key words： coronary heart disease， fibrinolysis; urokinase-type plasminogen activator; urokinase-type plasminogen activator receptor

　　斑块破裂及其继发血栓形成是导致急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome，ACS)的主要机理。纤溶系统中的尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator， u-PA，简称尿激酶)及其受体—尿激酶型纤溶酶原激活物受体(urokinase-type plasminogen activator receptor，u-PAR，简称尿激酶受体)能够通过激活纤溶酶原，使纤溶酶生成增多而影响血栓形成。目前关于尿激酶及其受体的研究多集中在肿瘤方面[1，2]，在冠心病方面的研究很少。本研究旨在探讨尿激酶及其受体在冠心病患者中的临床意义，现报告如下：

　　1 材料与方法

　　1.1 入组对象

　　75例冠心病患者均为2005年6月～2006年4月我院心内科住院病例，均符合WHO冠心病诊断标准，并经冠脉造影所证实，病程均小于3个月，同时选择了同期30例冠脉造影正常的非冠心病(non-coronary artery disease，NCAD)患者作为对照组。共分为4组：①急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)组：30例，男20例，女10例，年龄50 ～ 80(63 ± 8)岁;②不稳定型心绞痛(unstable angina，UA)组：25例，男17例，女8例，年龄51 ～ 79(66 ± 8)岁;③稳定型心绞痛(stable angina，SA)组：20例，男13例，女7例，年龄48 ～ 81(66 ± 6)岁;④非冠心病(NCAD)组：30例，男20例，女10例，年龄58 ～ 78(65 ± 5)岁。四组研究对象间的年龄、性别构成比差异没有统计学意义(P > 0.05)。

　　1.2 入选标准及排除标准

　　1.2.1 冠心病组诊断标准 根据1999年ACC/AHA/ACP-ASIM慢性稳定型心绞痛处理指南[3]、2002年ACC/AHA不稳定型心绞痛和非ST段抬高性心肌梗死处理指南[4]和2004年ACC/AHA/急性心肌梗死处理指南[5]。

　　1.2.2 非冠心病组 冠脉造影完全正常的同期住院患者，经询问病史、体格检查及实验室检查，均无冠心病依据。

　　1.2.3 排除标准 行溶栓治疗者不纳入本研究，且所有入选者均须排除以下疾病：其他心脏疾病如扩张型心肌病、病毒性心肌炎、风湿性心脏病等以及外周血管疾病;合并脑血管意外或其他神经系统疾病;合并感染、DIC、肝肾功能不全、肿瘤、血液系统疾病或免疫系统疾病。

　　1.3 标本的采集及制备

　　NCAD组和SA组入选者于入院次日清晨空腹状态下从外周静脉取血，UA和AMI入选者于急性发病当日从外周静脉取血;四组研究对象均于入院后2周清晨空腹状态下从外周静脉取血。每次采血量均为3 mL，其中1 mL全血置于1 ∶ 9枸橼酸钠抗凝管中立即行流式细胞术检测;剩余2 mL全血置于1 ∶ 9枸橼酸钠抗凝管中在30 min内2000 r/min(r=5 cm)离心20 min，分离血浆于-70 ℃冰箱保存待检。

　　1.4 观察指标

　　1.4.1 全血中性粒细胞表面u-PAR/CD87表达率 采用流式细胞术检测，流式细胞仪(FACS Calibur BD公司)激光光源为氩离子激光器，激光波长为488 nm。利用Cell Quest软件进行资料采集和分析，用前向角散射对侧向角散射散点图区分血细胞群体，用门技术圈出欲分析的细胞群体，每份检测10 000个细胞，通过荧光散点图和荧光直方图分析细胞上CD87的表达。

　　1.4.2 血浆u-PA浓度 采用R&D公司的u-PA ELISA检测试剂盒，按照其中的手动操作步骤进行检测。

　　1.5 统计学分析

　　所有数据均采用SPSS11.0软件进行处理，以均数±标准差表示，根据方差齐性检验结果，组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较用LSD-t检验，使用自身配对T-检验方法分析配对资料的差别。检验水准α=0.05。

　　2 结 果

　　2.1 入组时外周血血浆u-PA浓度和中性粒细胞表面u-PAR的表达率

　　四组间血浆u-PA浓度和中性粒细胞表面u-PAR的表达率差异均具有显著统计学意义(P < 0.001，表1)。

　　2.2 入组后2周外周血血浆u-PA浓度和中性粒细胞表面u-PAR的表达率

　　四组间血浆u-PA浓度和中性粒细胞表面u-PAR的表达率差异均具有统计学意义(P < 0.001，表2)。

　　2.3 四组研究对象入组后2周与入组时血浆u-PA浓度及中性粒细胞表面u-PAR表达率

　　四组研究对象入组后2周与入组时血浆u-PA浓度及中性粒细胞表面u-PAR表达率之间的差异均无统计学意义(P > 0.05，表3)。

　　3 讨 论

　　CHD的发病形式有多种，大多数表现为ACS，目前认为斑块破裂及其继发血栓形成是导致ACS的主要机理。血栓形成机制很复杂，涉及血流动力学、血管内皮、血小板、凝血和纤溶系统等方面因素。纤溶系统能将沉淀于血管内外的纤维蛋白溶解，在防止血栓形成和溶解已形成的血栓方面发挥重要作用。而纤溶系统中的u-PA及其受体除了影响血栓形成外，在血管壁中u-PA可直接或通过与u-PAR结合发挥生物效应[6，7]，不但能够促进细胞的黏附[8]，而且能够促进平滑肌细胞增殖和内膜增生，还能够促进细胞外基质降解、重塑及细胞的迁移[9]。

　　本实验发现，四组研究对象入组时AMI组血浆u-PA浓度及中性粒细胞表面u-PAR表达率均明显高于UA组;UA组血浆u-PA浓度及中性粒细胞表面u-PAR表达率均明显高于SA组;而SA组与NCAD组相比，差异无统计学意义。亦即从NCAD组、SA组、UA组到AMI组，血浆u-PA浓度及中性粒细胞表面u-PAR表达率逐渐升高。本实验还观察到，4组研究对象入组后2周与入组时相比，外周血血浆u-PA浓度或中性粒细胞表面u-PAR表达率的差异无统计学意义(P > 0.05)。

　　Andreas等[8]研究发现AMI患者外周血单核细胞表面u-PAR的表达上调，能够增强单核细胞的黏附能力，从而认为在防止单核细胞过多地聚集、黏附于血管内皮细胞上，并引发一系列不良后果等方面，u-PAR将是一个新的、有效的调控目标。我们的研究发现，与SA组患者相比，AMI组患者血中中性粒细胞表面u-PAR的表达率明显上调(P < 0.001)，而SA组患者与NCAD组间差异无统计学意义(P > 0.05)，与Andreas报道的相似，不同之处是Andreas等研究的是单核细胞表面u-PAR的表达率，我们检测的是中性粒细胞表面u-PAR的表达率。我们知道，炎症是导致动脉粥样硬化的一个重要因素，血清C-反应蛋白是炎症的一种非特异但敏感的生物学指标[10]。有学者[11]发现，高敏C-反应蛋白水平越高，冠心病患者动脉粥样硬化斑块越不稳定;而中性粒细胞在炎症反应过程中起着非常重要的作用，故我们选择了检测中性粒细胞表面u-PAR的表达率。此外，我们还纳入了UA组，且所有病例均得到冠状动脉造影所证实，既较全面的包括了冠心病的常见类型，也保证了所选择病例诊断的准确性和结果的可靠性。Bradley[12]等发现血浆u-PA浓度增高和PAI-1浓度降低的患者，其再狭窄风险亦高，从而认为血浆u-PA和PAI-1水平能预测冠状动脉介入治疗后再狭窄的风险，选择性地抑制u-PA将是一个有效的治疗再狭窄的方法。我们的结果与Bradley相符，即入组时外周血血浆u-PA浓度越高，患者的危险性越大，入组时与入组后2周相比，血浆中u-PA浓度的差异无统计学意义(P > 0.05)。更重要的是我们还同时检测了u-PAR，并得出与u-PA同样的规律，而且我们的研究还纳入了冠心病常见的其他几种类型，保证了分析的全面性，而Bradley等的研究仅仅是针对慢性稳定型心绞痛。

　　我们的研究显示，患者血浆u-PA或中性粒细胞表面u-PAR表达率随着冠心病严重程度的加重而逐渐升高，故我们可以通过检测血浆u-PA或中性粒细胞表面u-PAR表达率，作为冠心病危险分层的指标之一。本研究由于时间的限制，入选的样本例数较少，在后续研究中可以进一步扩大样本量，以量化u-PA及u-PAR与冠脉病变的关系，更好的指导临床。

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