多药耐药基因在乳腺癌组织中的表达及其与预后的关系

　　作者：张剑虹,张飞,刘军超,赵秀芳,白睿　　作者单位：1.河北北方学院附属第一医院病理科，河北 张家口 075000; 2.河北北方学院附属第一医院放疗科，河北 张家口 075000

　【摘要】 目的：研究Pgp、ToPoⅡ、GSTπ在乳腺癌中的表达及与预后的关系。方法：乳腺癌标本78例行SP法免疫组化法染色。结果：Pgp 阳性率为65.4%(51/78)，Ⅲ期乳腺癌Pgp阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ期，Pgp 阳性率与5年生存率呈负相关(P<0.05)。GSTπ阳性表达率为70.5%(55/78)，在乳腺癌临床Ⅲ期中其阳性表达率高达76.2%，与临床Ⅰ、Ⅱ期相比有显著性差异(P<0.05)，其阳性表达率与5年生存率呈明显负相关(P<0.05)。ToPoⅡ的表达为64.1%(50/78)，临床Ⅲ期表达明显低于Ⅰ，Ⅱ期。结论：化疗前检测Pgp,ToPoⅡ,GSTπ的耐药基因蛋白，对判断乳腺癌的预后及指导化疗有一定的价值。

　　【关键词】 乳腺肿瘤;多药耐药基因;P糖蛋白;DNA拓扑异构酶;谷胱甘肽S 转移酶

　　Expression of Multidrug Resistance Gene in Breast Carcinoma and Its Relationship with Prognosis

　　ZHANG Jianhong,ZHANG Fei,LIU Junchao,et al

　　The First Affiliated Hospital,Hebei North University,Zhangjiakou,075000,Hebei,China

　　【ABSTRACT】 Objective：To explore expression of Pgp,ToPoⅡ,GSTπ in breast carcinoma and its relationship with prognosis.Methods：Routine section preparation from 78 cases with breast cancer were measured with SP Immunohistochemistry method.Results：The positive rate of Pgp is 65.4%(51/78)and that in stage Ⅲ of breast carcinoma was obviously higher than that of stageⅠand stageⅡ,the positive rate was negative correlation with 5year survival rate(P<0.05).The positive expression rate of GSTπ was 70.5%(55/78),that in clinical stage Ⅲ of breast carcinoma was up to 90.9%,and there was significant difference among clinical stage Ⅲ and clinical stage Ⅱ,Ⅰ(P<0.05),the positive expression rate was obviously negative correlation with 5year survival rate(P<0.05).The positive expression rate of ToPoⅡ was 64.1%(50/78),and that in clinical stage Ⅲ was obviously lower than stageⅠand stageⅡ.Conclusion：It is valuable to measure Pgp,ToPoⅡ,GSTπ before chemotherapy for judging the prognosis of breast carcinoma and guiding the chemotherapy.

　　【KEY WORDS】 Breast Carcinoma,MDR,Pgp,ToPoⅡ,GSTπ

　　乳腺癌是女性易患的恶性肿瘤之一，其发病率呈逐年上升趋势，严重危害广大妇女的健康。化疗是临床上常用的治疗手段，但多药耐药(MDR)是导致乳腺癌化疗失败的重要原因之一。本研究应用免疫组化染色方法检测乳腺癌组织中的Pgp、GSTπ及TopoⅡ的表达,探讨其与乳腺癌TNM临床分期和预后的关系,为乳腺癌患者术后选择合理的化疗方案提供参考。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 河北北方学院附属第一医院2007—2008年间经病理证实的术前未接受化疗的原发性乳腺癌78例，全部组织经病理确诊，均为女性患者,患者年龄在26 ～70岁之间(平均53.5岁)。<50岁者31例，>50岁者47例。其中浸润性导管癌49例，浸润性小叶癌19 例，导管内癌6例，印戒细胞癌4例。按国际临床分期标准，Ⅰ期25例，Ⅱ期32例，Ⅲ期21例。

　　1.2 试剂及实验方法 即用鼠型抗人Pgp、ToPoⅡ、GSTπ单克隆抗体及 SP试剂盒均为福州迈新生物技术公司产品。标本以10%福尔马林固定，石蜡包埋切片，分别作 HE 染色和 SP免疫组织化学染色，已知阳性片作阳性对照。

　　1.3 阳性结果判断 Pgp 阳性颗粒分布于胞膜和胞浆，GSTπ阳性颗粒分布于胞浆，ToPoⅡ定位于胞核。阳性判断标准：无阳性细胞反应为阴性;切片中阳性细胞>10%为阳性;阳性细胞<25%：+;阳性细胞25%～50%：++;阳性细胞>50%：+++。

　　1.4 统计学处理 采用SPSS10.0统计软件进行卡方检验及相关性分析。

　　2 结果

　　2.1 乳腺组织免疫组化染色结果。Pgp阳性表达阳性部位为胞浆和胞膜;GSTπ表达阳性部位呈棕黄色颗粒分布于胞浆,极少数伴核染色;TopoⅡ表达阳性部位呈棕黄色分布于胞核上，阳性细胞分布无规律，呈灶状或单个细胞散在分布。

　　2.2 乳腺癌组织中Pgp、GSTπ、TopoⅡ的表达与乳腺癌的预后关系在随访的73例患者中，5年内生存者Pgp、GSTπ表达阳性率低于5年内死亡者(P<0.05)，而5年内生存者TopoⅡ表达阳性率高于5年内死亡者(P<0.05) 见表2。2009年6月张剑虹等：多药耐药基因在乳腺癌组织中的表达及其与预后的关系表1 Pgp、GSTπ、TopoⅡ在乳腺癌组织中的表达与临床分期的关系注：与Ⅰ期比较*P>0.05;与Ⅰ、Ⅱ期比较** P<0.05  Pgp、GSTπ、TopoⅡ与乳腺癌预后的关系注：与<5年组比较*P<0.05

　　3 讨论

　　乳腺癌尤其是晚期乳腺癌化疗成功的主要障碍是癌细胞对化疗产生耐药性[1]。越来越多研究发现乳腺癌耐药为多基因，多步骤耐药，涉及Pgp、ToPoⅡ、及GSTπ等[24]。许多学者发现乳腺癌多药耐药基因及其编码的糖蛋白，在乳腺癌多药耐药中起主要作用，具有重要临床意义。它针对亲脂类药物，如阿霉素、长春新碱等多种药物产生耐药性。由于它们产生的机制相同，只要细胞对其中的一种药物产生耐药性，同时对许多化学结构不同的全部亲脂类药物产生耐药性即多药耐药性,对化疗极为不利。MDR可以在治疗一开始就出现即天然耐药性,也可以在治疗过程中由一种药物诱导而产生即获得性耐药,化疗的应用可导致MDR抗药性肿瘤的出现,这已经成为临床治疗肿瘤的一大障碍。在治疗前检测肿瘤的耐药性，对选择合适的治疗手段，尤其是行之有效的化疗方案具有重要参考价值。

　　本研究涉及患者化疗方案为CAF，该方案中阿霉素即为Pgp耐药药物，Pgp阳性组5年生存率明显下降，说明Pgp 耐药导致的化疗失败是5年生存率下降的主要原因之一。本文资料中Pgp表达的阳性率达65.4%，说明Pgp是导致肿瘤耐药的重要催化剂,也是导致化疗失败的重要原因之一。在乳腺癌临床Ⅲ期的病例中，Pgp阳性率与临床Ⅰ、Ⅱ期相比有显著性差异。而其≥5年生存者Pgp表达的阳性率显著低于5年内死亡者，说明Pgp的阳性表达率是评估预后的重要指标。

　　GSTπ是GST 家族中的一种主要的同工酶，具有解毒功能。目前认为是肿瘤细胞产生耐药的一种标记，所介导的抗癌药物主要为顺铂等。GSTπ是一种催化谷胱甘肽和各种亲电子化合物(包括致癌剂和抗癌剂)结合的多功能酶系。在正常组织中低表达，而在许多耐药细胞株中高表达，特别是在有多药耐药(MDR)表型的细胞系中。其作用是通过降解化疗药物的杀伤作用，造成癌细胞耐药[4]。本研究其阳性表达高达70.5%，说明GSTπ是导致肿瘤耐药的重要催化剂，也是导致化疗失败的重要原因之一。在乳腺癌临床Ⅲ期中其阳性表达率高达90.9%，与临床Ⅰ、Ⅱ期相比有显著性差别。5年内死亡者GSTπ阳性表达率显著高于≥5年生存者，提示GSTπ表达越高，肿瘤分期越晚，对化疗药物的耐受性越高，预后越差。

　　TopoⅡ是一种核酶，参与DNA的转录、翻译、复制及染色体分离等过程，能促进肿瘤细胞内DNA合成，使增殖能力提高，与肿瘤的恶性程度有关;它是多种抗癌药物如拓扑异构酶抑制剂作用的靶酶，不同的表达量和活性与耐药表型的维持密切相关。表达水平下降则肿瘤对抗癌药物敏感性下降，耐药性增加[5，6]。本研究中TopoⅡ活性为64.1%(50/78)，在乳腺癌临床Ⅰ、Ⅱ期组织中分别为72%和68.7%,两者间无显著性差异，而在临床Ⅲ期组织中TopoⅡ活性只为47.6%,与前两者相比具有显著性差别。因此Topo活性的下降是肿瘤耐药的重要机制之一。

　　乳腺癌化疗的耐药性常常是多种耐药基因参与不同机制共同作用的结果[79]。本文结果表明，Pgp、ToPoⅡ、GSTπ等耐药基因均参与了乳腺癌耐药的形成，因此，在临床耐药逆转时要同时考虑多方面的耐药因素。Pgp、ToPoⅡ、GSTπ的表达对临床分期及预后有影响意义。通过检测乳腺癌Pgp、ToPoⅡ、GSTπ的表达，对乳腺癌化疗方案的选择有指导意义。

　　【参考文献】

　　1 Tsuruo T.Molecular Cancer the rapeutics recent progress and targets in drug resistance[J].Zntern Med,2003,42(3):237243

　　2 Li EX,Li Y,Yang J,et al.Influence of Pglycoprotein expression on chemotherapeutic response of metastatic breast carcinoma[J].Ai Zheng,2002,1(4):430432

　　3 Cardoso F,Durbecy V,Larsimont D,et al.Correlation between complete response to anthracyclinebased chemotherapy and topoisomerase Ⅱalpha gene amplification and protein overexpression in locally advanced/metastatic breast cancer[J].Int J Oncel,2004(1):201209

　　4 Kim SU,Lee KM,Park SK,et al.Genetic polymorphism of glutathione Stransferase P1 and breast cancer risk[J].J Biochem Mol Biol,2004,37(5):582585

　　5 Durbecq V,Paesmans M,Cardoso F,et al.TopoisomeraseⅡalpha expression as a predictive marker in a population of advanced breast cancer patientes randomly treated either with Singleagent doxorubicin or singleagent docetaxel[J].Mol Cancer Ther,2004,3(10):12071214

　　6 McGrogan G,Rudolph P,Mascarel Ⅱ,et al.DNA topoisomerase Ⅱ expression and the response to primary chemotherapy in breast cancer[J].Br J Cancer,2003,89:666671

　　7 Zurita AJ,Diestra JE,Insttorts ETEL,et al.Lung resistancerelated protein as a predictor of clinical outcome in advanced testicular germcell tumours[J].Brit J Cancer,2003,88:879886

　　8 Burger H,Foekens JA,Look MP,et al.RNA expression of breast cancer resistance protein,Lung resistancerelated protein,multidrug resistanceassociated proteins 1 and 2,and multidrug resistance gene lin breast cancer,correlation with chemotherapeutic response[J].Clin Cancer Res,2003,9:827

　　9 Suiowiak P,Materna V,Matkow SR,et al.Relationship between the expression of cyclooxygenase 2 and MDR1/Pglycoprotein in invasive breast cancers and their piognostic significance[J].Breast Cancer RES,2005,7(8):862871