Plk1、P53在结直肠腺瘤和瘤癌变组织中的表达及相关关系

　　作者：陈彦杰 作者单位：054001 河北省邢台市第一医院病理科

　　【摘要】 目的 研究结直肠腺瘤癌变转化过程中Plk1和P53表达及二者关系。方法 采用免疫组织化学MaxVisionTM法检测45份结直肠腺瘤癌变标本中Plk1蛋白和P53蛋白在腺瘤癌变区、重度异型增生区及轻度异型增生区的表达。结果 45例结直肠腺瘤癌变标本中Plk1、P53蛋白在腺瘤癌变区、重度异型增生区及轻度异型增生区的表达分别为77.8%和71.1%，60.0%和64.4%，13.3%和17.8%，癌变和重度异型增生的PlK1和P53阴性表达率与对照组和轻度异型增生比较差异有统计学意义(P<0.01);在癌变区Plk1和P53蛋白表达呈正相关(r=0.603，P<0.01)。结论 Plk1和P53共同参与了结直肠腺瘤癌变的转化过程且关系密切。

　　【关键词】 Plk1;P53;结肠直腺瘤;瘤癌变;免疫组化

　　Expression of Plk1 and P53 in colorectal adenomas and tumor cancerous tissue and their correlation CHEN Yanjie. Department of Pathology, The First Hospital of Xingtai City,Hebei,Xingtai 054001,China

　　【Abstract】 Objective To observe the expression of Plk1 and P53 in colorectal adenomas cancerous conversion process and their relationship.Methods The expression of Plk1 and P53 was detected in adenoma cancerous area of 45 cases of colorectal adenomas and tumor cancerous tissue, and in severe atypical hyperplasia area and mild atypical hyperplasia area by MaxVisionTM immunohistochemical method.Results In the adenoma cancerous area, severe atypical hyperplasia area and mild atypical hyperplasia area, the expression rates of Plk1 and P53 were 77.8% and 71.1%, 66.7% and 64.4%, 13.3% and 17.8% respectively. There were significant differences in the negative expression rate of PlK1t and P53 in adenoma cancerous as well as severe atypical hyperplasia and control group as well as mild atypical hyperplasia (P<0.01). The expression of Plk1 was positively correlated with that of P53 in tumor cancerous area(P<0.01).Conclusion Plk1 and P53 are involved in colorectal adenomas cancerous transformation process, which suggests that P53 is a target of Plk1.

　　【Key words】 Plk1;P53;colorectal adenomas;cancerous tumors; immunohistochemistry

　　PoloLike激酶1(Plk1)是参与有丝分裂调控的重要因子，与细胞增殖密切相关，近年研究表明人体许多恶性肿瘤中Plk1存在过度表达[1]。P53是肿瘤中最常发生突变的的抑癌基因，也是Plk1的作用靶点之一，Plk1分子通过调节Topors磷酸化机制从而抑制了P53的功能，Plk1分子表达增加而P53分子表达减少将导致肿瘤形成[1]。我们采用免疫组织化学MaxVisionTM法检测Plk1和P53在结直肠腺瘤及瘤癌变区的表达，探讨二者在癌变过程中蛋白质水平上的相关关系，为分子病理学研究提供组织学依据。由于组织中野生型P53的表达水平很低，半衰期很短，常规免疫组化方法无法测出。突变型P53抑癌功能消失，半衰期明显延长，可通过常规免疫组化方法检测。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料 收集我院2008年3月至2010年5月结直肠腺瘤癌变的电切和手术标本45例，其中男21例，女24例;最小年龄27～78岁，平均年龄58.2岁;肿瘤大小：<2 cm者20例，>2 cm者25例;管状腺瘤15例，绒毛状腺瘤15例，管状绒毛状腺瘤15例;所有腺瘤癌变标本均伴有重度(Ⅲ级)、轻度异型增生(Ⅱ级和Ⅰ级)异型增生。另选10正常黏膜组织为对照组。

　　1.2 实验方法 采用MaxVisionTM即用型快速免疫组化一步法。鼠抗人Plk1单克隆抗体原液、抗体稀释液购自美国Santa Cruz公司(1∶80稀释);即用型鼠抗人P53和MaxVisionTM即用型试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司。所有标本均用13%甲醛固定，石蜡包埋，3 μm连续切片，玻片经APES防脱处理，常规脱蜡和水化。染色前经高温、高压抗原修复法预处理，抗原修复液和洗液均采用pH值7.4磷酸盐(PBS)缓冲液。一抗室温孵育1.5 h，二抗室温孵育20 min，DAB显色，苏木素复染。用已知阳性结肠癌标本做阳性对照，用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。

　　1.3 结果判断 Plk1蛋白表达主要定位于细胞浆，P53蛋白阳性定位于细胞核。每张切片选5个具有代表性的高倍视野，每个视野计数100个细胞,观察免疫组织化学的染色情况。采用IHS评分，评分方法如下:(1)阳性细胞染色强弱(记为a):未着色为0分，淡黄色1分，黄色为2分，棕黄色为3分。(2)阳性细胞百分比(记为b):<5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～80%为3分81%～100%为4分。(3)a与b乘积为IHS评分进行半定量分析:0～1为阴性(-)，2～4分为弱阳性(+)，5～8分为中度阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。

　　1.4 统计学分析 应用SPSS 18.0统计软件，计数资料比较采用χ2检验，相关性分析Spearman相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 Plk1和P53蛋白在正常黏膜、腺瘤轻度/重度异型增生区及瘤癌变区的表达 轻度异型增生PlK1和P53阴性率与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，瘤癌变区和腺瘤重度异型增生区的Plk1和P53阴性率间达差异无统计学意义(P>0.05)，二者均较轻度异型增生和正常对照组差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

　　3 讨论

　　细胞周期与肿瘤的关系是近年来生命科学研究中的热门课题之一，目前的研究认为肿瘤是一类细胞周期性疾病。Plk1是Plk家族中的一员，在细胞的有丝分裂中起广泛调节作用,具有调控细胞周期、抑制细胞凋亡等作用。Plk1的主要功能表现在细胞周期G2/M交界点转换过程中通过磷酸化下游底物而实现其功能，阻断Plk1表达可导致体外肿瘤细胞分裂停滞及凋亡，Plk1的过表达能促进肿瘤的恶转化在肿瘤发生发展中发挥着重要作用[2，3]。P53是肿瘤中最常发生突变的抑癌基因，Yang等[1]关于P53分子致癌机制的研究发现P53是Plk1的作用靶点之一，Plk1分子通过调节Topors磷酸化机制从而抑制了P53的功能，Plk1的过表达可以导致野生型P53的突变，抑制P53的抑癌作用，Plk1分子表达增加而P53分子表达减少将导致肿瘤形成。

　　本实验结果显示正常结直肠黏膜上皮Plk1蛋白弱表达P53蛋白无阳性表达。腺瘤及癌变区均有过度表达，轻度、重度异型增生区及癌变区阳性率分别为13.3%、17.8%;64.4%、60.0%;77.8%、71.1%，表明随着腺瘤异型增生的程度加重，Plk1蛋白与P53蛋白表达率逐渐增高，阳性强度也依次增强。二者在轻度异型增生区的表达与正常组比较差异无统计学意义(P>0.05)。在癌变区和重度异型增生区的二者的表达均较轻度异型增生区明显增高，差异有统计学意义(P<0.01)。二者在癌变区和重度异型增生区的表达上差异无统计学意义(P>0.05)。在癌变区Plk1蛋白与P53蛋白表达的相关性分析中，二者呈正相关关系，这与P53作为Plk1作用靶点的结论相符，检测Plk1蛋白和P53蛋白亦可作为早期诊断结直肠腺瘤恶变的参考指标之一。

　　【参考文献】

　　1 Yang XM,Li HC，Zhou ZA.Plk1mediated Phosphorylation of Topors Regulates P53 Stability.The Journal of Biological Chemistry, 2009，284：1858818592.

　　2 董宪喆，张鹏，毕明刚.丝/苏氨酸激酶PLK1研究进展.中国药理通报,2010，26：289293.

　　3 朱有法，朱景旭.早期大肠癌p53癌基因蛋白的表达及意义.实用肿瘤杂志,1997，12：7374.