P-gp、GST-π、TopoⅡ、p53在乳腺癌中的表达及相关性

　　作者：孙希印　周晓秋　高虹　李新功 作者单位：山东省东营市人民医院　病理科　(山东　东营　257091)

　　【摘要】目的:探讨乳腺癌中P-糖蛋白(P-gp)，谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)，拓扑异构酶(TopoⅡ)和P53的表达及相关性。方法:应用ElivisionTMplus免疫组化法对28例乳腺癌进行检测。结果:正常乳腺组织P-gp、GST-π表达阳性颗粒位于细胞质或(和)细胞膜，TopoⅡ阳性颗粒定位于胞核，p53无阳性表达。乳腺癌P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达强度及p53蛋白的表达率均高于正常乳腺组织。结论:P-gp、GST-π、TopoⅡ和p53的表达与乳腺癌各临床病理因素无关，p53蛋白的表达与P-pg表达呈正相关，P<0.001。

　　【关键词】 乳腺癌·P-糖蛋白　胎盘型谷胱甘肽-S-转移酶　拓扑异构酶　蛋白质p53　免疫组织化学

　　Expression of P-gp, GST-π, TopoⅡ and p53 in

　　breast carcinoma and their correlationship

　　SUN Xi-yin, ZHOU Xiao-qiu, GAO Hong, LI Xin-gong

　　Department of Pathology, Dongying People’s Hospital (dongying 257091 ,China)

　　【ABSTRACT】 Objective: To investigate the expression and their correlation of P-gp,GST-π,TopoⅡ and p53 in breast carcinoma. Methods: Twenty-eight cases of tissue samples of breast carcinoma were examined by ElivisionTM plus immunohistochemical staining. Results: The positive expressions of P-gp, GST-π of normal breast tissue locate in the cytoplasm and membrane, and that of TopoⅡ in the nucleur. There is not positive particle of p53 in normal breast tissue. And the expression amount of P-gp, GST-π, TopoⅡ and the positive frequency of p53 expression in breast carcinoma was more than normal breast. Conclusion：There is no correlation between the expression of P-gp, GST-π,TopoⅡ, p53 and each clinical factor, and the expression of p53 is positively correlated with P-gp.(P<0.001)

　　【KEY WORDS】 Breast carcinoma·P-glycoprtoein·GST-π·DNA topoisomerase( DNA TopoⅡ)·Protein 53·Immunohistochemistry

　　联合化疗是乳腺癌病人常用的治疗手段，而肿瘤细胞的多药耐药(multi druy resistance,MDR)是造成化疗失败的主要原因。肿瘤细胞的耐药性是多种机制共同作用的结果，P-糖蛋白(P-gp)，胎盘型谷胱甘肽转移酶(GST-π)和DNA拓扑异构酶(TopoⅡ)等多种细胞内物质是恶性肿瘤产生MDR的物质基础，我们研究了2005年7月～2006年3月之间的28例乳腺癌病人，应用免疫组化染色方法检测乳腺癌组织中P-gp、GST-π、TopoⅡ和p53蛋白表达，并探讨乳腺癌耐药基因表达情况与临床病理的相关性及p53蛋白与P-gp、GST-π、TopoⅡ表达的相关性。

　　1　资料与方法

　　1.1　临床资料　选取我院2005年7月～2006年3月经病理证实的乳腺癌根治切除标本28例，所有标本经10%福尔马林液固定，石蜡包埋，年龄32～61岁，平均48.6岁。组织学类型：浸润性导管癌18例，浸润性小叶癌3例，导管原位癌3例，复合型癌2例，黏液癌、乳腺Paget病各1例。另选择5例癌旁正常乳腺组织作为对照。

　　1.2　检测方法

　　1.2.1　试剂　P-gp(克隆号C494)、GST-π(克隆号353-10)、TopoⅡ(克隆号JH2.7)和p53(克隆号DO-7)蛋白及ElivisionTMplus试剂盒，均为福州迈新公司产品。

　　1.2.2　免疫组化染色　采用ElivisionTMplus法进行免疫组化染色。严格按照试剂盒说明书进行操作，中性树胶封固，显微镜观察。

　　1.3　阳性结果判断　P-gp、GST-π阳性定位于细胞质或细胞膜，p53定位于细胞核。肿瘤阳性细胞数，<25%为阴性，>25%为阳性，根据癌细胞的染色强度分为-、+、++、+++。TopoⅡ定位于胞核，根据阳性细胞数<25%为Ⅰ级，25%～50%为Ⅱ级，～75%为Ⅲ级，>75%为Ⅳ级。用福州迈新公司提供的阳性对照片作为阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。

　　1.4　统计学处理　应用PEMS3.1医学统计软件包对数据进行χ2检验与Spearman等级相关检验。α=0.05。

　　2　结果

　　正常乳腺组织中仅有1例P-gp、GST-π表达阳性，2例TopoⅡ表达阳性，p53无阳性表达。 乳腺癌中27例P-gp表达阳性、20例GST-π表达阳性、22例TopoⅡ表达阳性，28例患者各临床病理因素与P-gp、GST-π、TopoⅡ表达无关，与p53表达也无相关性(表1)。P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达强度均较正常乳腺组织强。p53的表达与P-gp表达呈正相关(r=0.6333，P<0.001),而与GST-π、TopoⅡ的表达未显示相关性(表2)。

　　3　讨论

　　肿瘤的耐药模式有多种不同的作用机制，肿瘤细胞对多种分子结构不同，作用机制各异的抗肿瘤药物产生的交叉耐药性，称为MDR，MDR是最为常见的一种耐药模式[1]，肿瘤的耐药机制可表现为P-gp的过表达，GST-π活性增强以及TopoⅡ含量减少，检测P-gp、GST-π、以及TopoⅡ的表达，有助于临床对化疗药物的选择。

　　肿瘤细胞膜上有一种能量依赖性跨膜糖蛋白(P-gp)，它能将细胞内的药物转运出细胞，使细胞内药物浓度下降或完全丧失而产生耐药。P-gp表达水平与细胞膜通透性、细胞内药物浓度以及细胞的耐药程度有关，28例乳腺癌中，13例P-pg阳性(46.4%)为原发性耐药，对植物碱类，阿霉素耐药[2]。说明P-gp高表达可因肿瘤原发性耐药，使化疗失败。

　　GST-π是机体中催化谷胱甘肽与亲电性物质发生结合的一类酶系，也与亲脂性细胞毒药物结合增加其水溶性，促进药物的代谢，从而降低抗癌药物的细胞毒作用。本组乳腺癌组织中的表达率为25% ，而正常组织为20%，且强度不及乳腺癌，提示乳腺癌对化疗药物不敏感可能与GST-π表达增强有关。GST-π过度表达与顺铂，氮芥，环磷酰胺，阿霉素耐药有关[2]。

　　TopoⅡ是机体内的重要的核酶，参与DNA的转录，翻译、复制及染色体分离等遗传过程，它有两种功能：一是作为细胞的增殖指数，表达于S-G2/M期，它的高表达使肿瘤细胞复制加快，增加肿瘤的恶性程度;二是作为抗癌药物的作用靶点指数，细胞内TopoⅡ水平下降直接影响TopoⅡ抑制剂的抗肿瘤活性，TopoⅡ含量和活性的降低可导致肿瘤细胞的耐药。

　　P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达水平对恶性肿瘤的MDR起重要作用，其作用发生在蛋白水平。本研究显示P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达与乳腺癌各临床因素无关(P>0.05),表明其作用影响可能只针对恶性肿瘤的MDR，而和肿瘤的发生发展并无显著关系，不能依据一般临床病例资料判断肿瘤的MDR程度，因此检测P-gp、GST-π、TopoⅡ的表达对指导临床化疗是必要的。

　　p53是重要的抑癌基因，乳腺癌中p53基因突变率高，本组28例乳腺癌中，p53蛋白阳性11例(39.3%)，野生型p53具有抑制MDR基因转录的作用，降低P-gp的生成，而突变型p53能增加MDR的表达，并通过抗细胞凋亡使肿瘤细胞产生耐药[4]，本研究显示乳腺癌组织中p53蛋白的表达与P-pg表达呈正相关(rs'=0.6333,P<0.001)，而与GST-π、TopoⅡ的表达未显示相关性(P>0.05)，其意义还需进一步研究。

　　【参考文献】

　　[1] Joncourt F, Buser K, Altermatt H, et al. Multiple drug resistance parameter expression in ovarian cancer[J]. Gynecol Oncol, 1998,70(2):176-82.

　　[2] 施作霖，多药耐药基因免疫组化研究进展[J].诊断病理学杂志，1997，4：122-124.

　　[3] Geirtz DA. Dose bulk damage to DNA explain the cytostatic and cytotoxic effects of topoisomeraseⅡinhibitors[J]. Biochem Phar, 1991,42(12):2253-2258.

　　[4] Nguyen KT, Liu B, Ueda K, et al. Transactivation of the human multidrug resistance(MDR) gene promoter by p53 mutants[J]. Oncol Res, 1994,6(2):71-77.