DNA修复酶和热休克蛋白70在乳腺癌中表达的意义

　　作者：张晓丽 闫爱春 薄爱华 邸韶华 作者单位：(河北北方学院电镜室，河北 张家口 075029)

　　【摘要】目的 探讨DNA修复酶和热休克蛋白70(HSP70)在乳腺癌中的表达及临床意义。方法 采用免疫组织化学(SP)法检测6氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)和HSP70在59例乳腺癌组织和26例乳腺腺瘤组织中的表达。结果 乳腺癌中MGMT和HSP70阳性表达率显著高于乳腺腺瘤(P<0.05);MGMT在乳腺癌中的表达与组织学类型、部位及淋巴结转移有统计学意义;HSP70在乳腺癌中的表达与组织学类型及淋巴结有无转移有统计学意义(P<0.05)。结论 MGMT和HSP70与乳腺癌的发生密切相关，检测MGMT和HSP70对乳腺癌的早期诊断、治疗及预后有重要意义。

　　【关键词】 6氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶;热休克蛋白70;乳腺癌;免疫组织化学

　　乳腺癌是危害女性健康的主要恶性肿瘤，发病率一直居高不下，有低龄化和非肥胖人群高发趋势，因而愈来愈引起人们的关注。6氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6methylguanine DNA methytransferase，MGMT)是一种高效的DNA直接修复酶〔1〕。HSP70是热休克蛋白家族中最重要的成员之一，它具有“分子伴侣”功能，参与蛋白质合成、加工、折叠、转运等过程〔2〕。HSP70和MGMT在乳腺癌中的表达及其相关性报道较少，本研究检测了它们在乳腺组织中的表达情况，并探讨与患者病理特征等因素间的关系。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料 收集2004～2005年张家口地区女性乳腺癌手术切除标本59例，年龄从27～70(平均48.25)岁。乳腺腺瘤26例，年龄从19～45(平均34.53)岁。

　　1.2 标本处理 标本经10%中性甲醛固定，梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，连续切片6张，切片厚度5 μm。

　　1.3 试剂及染色 采用SP免疫组织化学染色方法。兔抗人MGMT、兔抗人HSP70多克隆抗体和SP试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。严格按照实验操作规程进行。每批实验阳性对照片用已知阳性片作对照;阴性对照片用PBS代替第 Ⅰ 抗。

　　1.4 染色结果判定 每张切片随机观察10个高倍视野(×400)，取阳性细胞均值，凡阳性细胞数超过5%定为阳性病例(+)，否则为阴性病例(-)。

　　1.5 统计学处理 组间比较采用χ2检验，相关性采用Pearson相关分析。

　　2 结果

　　2.1 MGMT和HSP70在乳腺腺瘤及乳腺癌中的表达 光镜下阳性物为棕黄色，MGMT分布于细胞质,HSP70分布于细胞质和胞核。MGMT和HSP70在腺瘤中阳性率分别为26.90%(7/26)和38.5%(10/26)，它们在乳腺癌中的阳性率分别为59.3%(35/59)、77.9%(46/59)，与腺瘤组比较均有显著差异(P<0.05)。

　　2.2 MGMT和HSP70的表达与乳腺癌临床病理学的关系 见表1。MGMT在乳腺癌中的表达与组织学类型、部位及淋巴结转移有统计学意义(P<0.05)，但是MGMT的表达与年龄无显著相关性(P>0.05);HSP70在乳腺癌中的表达与组织学类型及淋巴结转移有统计学意义(P<0.05)，与发病部位、年龄无明显相关性(P>0.05)。

　　表1 HSP70和MGMT的表达与乳腺癌临床病理学的关系(略)

　　与浸润组比较：1)P<0.05;与左乳腺组比较：2)P<0.05;与无淋巴结转移比较：3)P<0.05

　　2.3 MGMT和HSP70表达的相关性 MGMT和HSP70在乳腺癌中的表达无明显相关性(r=0.059,P>0.05)。

　　3 讨论

　　烷化剂是一类重要的抗肿瘤药物，主要造成DNA 碱基的烷基化损伤(如甲基化或乙基化等)，其中形成O6甲基鸟嘌呤(简称O6mG)导致碱基的错误配对，即O6甲基化后，G不与C配对，而与T配对，造成细胞突变与死亡〔3〕。MGMT是一种独特DNA修复酶，同时发挥转移酶与甲基接受体的作用，能够将烷化基团从O6位转移到自身的半胱氨酸残基上，使DNA链上的鸟嘌呤损伤修复，同时使自己失去活性。因此MGMT在肿瘤化疗中发挥双重作用：一方面，保护正常组织免受烷化剂的损伤及二次癌症的发生，另一方面，引起肿瘤组织对烷化剂类化疗药物的耐受性。研究发现对烷化剂耐药性与MGMT的表达呈正相关，提示MGMT是减低烷化剂对肿瘤细胞杀灭效应的一个关键因素〔4〕，因此抗癌治疗中可以利用阻断MGMT mRNA转录水平，而提高烷化剂疗效。在本研究中MGMT在乳腺癌的表达明显高于乳腺肿瘤;同时MGMT的表达与组织学类型、部位及有无淋巴结转移有关，与年龄无明显关系，与国内多数学者报告结果一致〔5，6〕，但也有不同报告，可能与实验方法和病例多少有关。

　　HSP70在肿瘤组织特别是恶性肿瘤组织中有高表达现象，尹万忠等〔7〕报道HSP70在腮腺腺瘤及腮腺癌中均有表达，但腮腺癌中HSP70的表达明显高于腮腺瘤，而且HSP70的表达与肿瘤的恶性程度有关。Tuna等〔8〕应用免疫组化法发现直肠癌中HSP70的表达水平明显高于癌旁正常组织，与直肠癌的组织学类型有关。HSP70在肿瘤中的表达，随肿瘤的恶性程度升高而阳性表达增强。郭云鸿等〔9〕在研究宫颈鳞癌时也得出上述结论。本研究显示HSP70在乳腺腺瘤中的表达远远低于乳腺癌，而且与乳腺癌的组织学类型、有无淋巴结转移有关，与乳腺癌的部位、年龄无关。此结果与国外学者Torronteguy等〔10〕研究一致。通过对肿瘤组织中HSP70的检测可帮助对肿瘤病人进行预后判断和治疗。

　　本研究提示MGMT和HSP70在乳腺癌中均有较高表达，为了提高烷化剂的抗癌效果，可以通过基因干扰技术可降低肿瘤细胞内MGMT基因的表达，可以增加肿瘤细胞对于烷基化药物的敏感性，另外，通过转染野生型的p53基因增加肿瘤细胞对烷基化药物的敏感性，提高乳腺癌病人的生存期。热化疗是近年来发展起来的一种新的治疗肿瘤的方法，它可以通过促进癌药物敏感细胞株表达HSP70，提高免疫效应细胞对靶细胞的杀伤活性，随着对MGMT和HSP70研究的继续深入，将为肿瘤治疗开辟新径。

　　【参考文献】

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　　3 张晓丽，赵 荧，薄爱华，等.老年性大肠癌中MGMT的表达及临床意义〔J〕.中国老年学杂志，2007;27(9)：8645.

　　4 王金科，张 辉，赵秋振，等.乳腺癌MGMT和TopoⅡα表达及临床意义〔J〕.陕西医学杂志，2006;35(7)：8179.

　　5 左文述，魏 玲，宋现让，等.乳腺癌组织和癌旁组织MGMT和GSTπ蛋白表达的流式细胞术分析〔J〕.肿瘤防治研究，2006;33(8)：55860.

　　6 Liu LL,Schwartz S，Davis BM,et al.Chemotherapyinduced O6Benzylguanine resistant alkyltransferase mutarion in mismatch deficient colon cancer〔J〕.Cancer Res,2002;62(11):30706.

　　7 尹万忠，祝 威，潘雨利，等.腮腺癌中HSP70、P27 的表达及意义〔J〕.中国实验诊断学，2005;9(16)：9113.

　　8 Tuna B，Sokmen S，Sarioglu S,et al.P52 and HSP70 expression in rectal adenocarcinomas an immunohistochemical investigation of 45 case〔J〕. Appl Immunohistochem Mol Morphol，2006;14(1):316.

　　9 郭云鸿，田晓云，米建强，等.宫颈鳞癌组织中HSP70和Bcl2的表达及意义〔J〕.山东医药，2006;46(24)：112.

　　10 Torronteguy C，Frasson A，Zerwes F,et al.Inducible heat shock protein 70 expression as a potential predictive marker of metastasis in breast tumors〔J〕.Cell Stress Chaperones,2006;11(1):3443.