乳腺良恶性肿瘤患者血清Th1/Th2细胞因子中IL-2特点
发表时间：2010-12-24 浏览次数：410次
作者：邹德宏 杨红健 谢尚闹 凌雨田 钱丽娟 俞洋 作者单位：310022 浙江省肿瘤医院
【摘要】 目的 分析乳腺良、恶性肿瘤患者血清Th1/Th2细胞因子中IL-2的特点及其意义。 方法 用流式荧光免疫微球分析技术(Flow Fluorenscence Immunmicrobeads Assay, FFIA)检测乳腺良、恶性肿瘤患者血清Th1/Th2细胞因子水平。Th1型细胞因子包括IL-2、TNF-α、 IFN-γ，Th2型细胞因子包括IL-4、IL-5、IL-10。结果 乳腺良、恶性肿瘤患者血清IL-2水平在检测线以下(IL-2=0)的分别为34.1%(15/44)和42.8%(20/47)，明显不同于其他细胞因子。在乳腺良、恶性肿瘤患者中，血清IL-2=0组，IFN-γ、 IL-4、IL-5、IL-10水平均相应较低，与血清IL-2>0组比较差异有统计学意义(P<0.01)，其中TNF-α水平差异无统计学意义(P>0.05)。乳腺恶性肿瘤中，IL-2水平与肿瘤大小及淋巴结转移状态无相关性。 结论 乳腺良、恶性肿瘤患者血清IL-2水平可能影响IFN-γ、 IL-4、IL-5、IL-10表达，在乳腺恶性肿瘤中IL-2水平状态与肿瘤大小及淋巴结转移状态无相关性。
【关键词】 乳腺肿瘤 细胞因子 TH1/TH2 IL-2
【Abstract】 Objective To analyze features of IL-2 among Th1/Th2 cytokines in serum from patients with breast cancer and with breast benign Tumour and its clinical significance . Methods The level of Th1 and Th2 cytokines in serum were detected by flow fluorenscence immunmicrobeads assay (FFIA) from 44 patients with breast cancer and 47 cases of patients with breast benign Tumour. Th1 type cytokines include Interlukine-2(IL-2), tumor necrosis factor alpha(TNF-α) and interferon-gamma (IFN-γ) and Th2 type cytokines include interlukine-4(IL-4), interlukine-5(IL-5) and interlukine-10(IL-10). Results The level of IL-2 was not detectable(IL2=0)in 34.1%(15/44) patients with breast cancer and in 42.8% (20/47) patints with breast benign Tumour,which was different compared with other Th1/Th2 cytokines . The levels of IFN-γ、 IL-4、IL-5、IL-10 of the patients with IL2=0 were significantly lower than those of the patients with IL2>0(P<0.01). There is no relationship between the level of IL-2 and the the size of tumour or states of lymph nodes in patients with breast cancer. Conclusions The level of IL-2 may affect the levels of other Th1/Th2 cytokines in patients with breast caner and with benign tumor.The role of IL-2 in Th1/Th2 cytokine network and its theoretical and clinical significance need further study.
【Key Words】 breast neoplasms cytokines Th1/Th2 flow cytometry flow fluorenscence immunmicrobeads assay
1991年Romagnani 研究证实，人体内存在稳定的Th1、 Th2型细胞，Th1主要分泌IL-2、TNF-α、 IFN-γ，以介导细胞免疫反应为主;Th2主要分泌IL-4、IL-5、IL-10，以介导体液免疫反应为主。Th1型和Th2型免疫应答之间存在相互的调控平衡，这种平衡的失调被认为与某些疾病包括自身免疫性疾病、感染、肿瘤等的发生、发展有关，更得到许多临床研究结果的支持[1]。本院用流式荧光免疫微球分析技术(Flow Fluorenscence Immunmicrobeads Assay, FFIA)检测44例乳腺良性肿瘤和47例恶性肿瘤患者血清Th1/Th2型细胞因子的表达情况,总结如下。
1 材料与方法
1.1 一般资料
取2003年1月至2004年12月经本院确诊的乳腺浸润性导管癌患者47例，术前未行化疗或放疗。年龄14～77 岁，年龄中位数47岁;按UICCTNM分期系统(2004)T0～1 10例，T2～3 37例，N0 20例，N1～2 27例，Ⅰ期10例，Ⅱa期14例，Ⅱb期17例，Ⅲa期5例，Ⅲb期1例;乳腺增生症伴纤维腺瘤形成患者44例，年龄17～75岁，年龄中位数41岁。
1.2 主要试剂
人Th1/Th2细胞因子流式检测试剂盒，购于美国BD公司。主要组分：人Th1/Th2细胞因子原液;分析稀释液;被覆抗人Th1/Th2 细胞因子抗体的微球液(Beads);PE试剂。
1.3 操作方法
术前3～6d抽患者外周静脉血2ml，取新鲜血清备用。按试剂盒操作流程说明进行。主要步骤：(1)配制混合 Beads 液;(2)加样、反应，每只试管均加入Beads液、PE试剂、待测血清各50μl，充分混匀，室温闭光3h;加1 ml 洗液至每管，2000转/min 离心5min，弃上清液，加200μl 洗液混匀后立即上机检测。(3)使用相应数据处理软件，根据由标准品制作的曲线得出受检样品浓度(pg/ml)。Th1型细胞因子主要检测IFN-γ、IL-2、TNF-α，Th2型细胞因子主要检测IL-4、IL-5、IL-10。
1.4 主要仪器
流式细胞仪(美国BD公司)。
1.5 统计学处理
使用SPSS 10.0 for windows 统计软件对原始数据进行自然对数变换[ln(X+1)]后经正态性检验近似符合正态分布者,使用两独立样本间t检验;两样本间率的比较使用四格表确切概率法计算P值;等级资料使用非参数独立样本检验。
2 结果
2.1 47例乳腺癌患者中，细胞因子水平在检测线以下的IL-2为20例，占42.8%;44例乳腺良性肿瘤中，细胞因子水平在检测线以下的，IL-2为15例，占34.1%。IL-2水平在检测线以下的比率(IL-2=0)，在乳腺良恶性肿瘤间差异无统计学意义，使用四格表确切概率法计算， P=0.1220。
2.2 乳腺良性和恶性肿瘤中，以IL-2水平分组，即IL-2水平在检测线以下(IL-2=0)组和检测线以上(IL-2>0)组比较， IFN-γ、 IL-4、IL-5、IL-10水平在组间差异均有统计学意义(良性肿瘤组P值分别为0.004、0.001、0.002和0.035，恶性肿瘤组P值分别为0.001、0.000、0.017和0.003)，且与IL-2水平一致。但是，TNF-α除外(良性肿瘤组P值为0.512，恶性肿瘤组P值为0.245)。
2.3 在乳腺恶性肿瘤中，IL-2水平在检测线以下(IL-2=0)组和检测线以上(IL-2>0)组比较，肿瘤大小(P=0.860)和淋巴结转移状态(P=0.620)之间，差异无统计学意义(使用非参数独立样本检验)。
3 讨论
IL-2主要由激活的CD+4的T细胞产生，CD+8的T细胞产生量较少，是T细胞自分泌和旁分泌细胞因子，其主要的生物学活性是刺激靶细胞的增殖，增强靶细胞的辅助或杀伤功能，并可以诱导杀伤细胞产生IFN-γ、TNF-α等细胞因子。本组资料特点：(1)在乳腺良、恶性肿瘤中，IL-2水平在检测线以下组(IL-2=0)与检测线以上组( IL-2>0)之间，IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-10的水平差异显著，且与IL-2水平一致。推测在Th1/Th2细胞因子网络中，IL-2水平可能影响IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-10水平。体外实验能否通过IL-2水平的变化影响Th1/Th2细胞产生其他细胞因子的水平，其作用机制、理论和临床意义值得进一步研究。另外，实验操作和试剂因素可能对结果产生影响，对实验结果进行核查分析， IL-2及其他细胞因子水平检测结果无成批次或集中时段，出现同时低或同时高的现象，可排除此可能性。 TNF-α的水平虽然和IL-2水平的高低一致，但在IL-2低水平组与高水平组之间差异无显著性，推测可能与TNF-α主要由巨噬细胞产生有关;(2)34.1%的乳腺良性肿瘤和42.8%的乳腺癌患者血清IL-2水平在检测线以下，IL-2的水平状态明显不同于其他的细胞因子,但这种状态在乳腺良、恶性肿瘤之间差异无统计学意义，在乳腺癌组中，不同的IL-2水平状态之间，肿瘤大小和淋巴结转移状态无显著性差异，推测乳腺癌患者血清IL-2水平与其他细胞因子水平比较虽然明显低下，但不一定是癌对机体免疫状态的影响所致，其临床意义是，不支持给予外源性IL-2 治疗乳腺癌，这与IL-2治疗乳腺癌的多中心随机对照临床研究结果及 IL-2治疗多种实体瘤的临床资料荟萃分析结果一致[2，3]。在乳腺良、恶性肿瘤中，不同的IL-2水平状态在进一步随访中是否具有临床意义，如在预后等方面是否不同尚待证实。
Rayman 等研究发现，肾细胞癌组织可溶性物质如神经接苷脂可能在基因转录水平上抑制T淋巴细胞产生IL-2，并可抑制T细胞的增殖，认为因此削弱了T淋巴细胞的抗肿瘤作用，有利于肿瘤细胞逃逸机体免疫监视[4]。临床上IL-2治疗肾细胞癌的疗效肯定，甚至有转移性肾细胞癌术后单纯使用IL-2治疗，获10年以上生存的报道[5]，可能肾细胞癌有其与乳腺癌不同的特性，肾细胞癌与乳腺癌患者肿瘤局部和外周血中IL-2水平及癌细胞表面IL-2受体表达之间，有无显著差别等尚待探讨。将外周血和肿瘤局部组织中肿瘤浸润淋巴细胞比例及细胞因子的水平联合检测可能更有利于评价肿瘤与机体免疫状态之间的相互关系。
【参考文献】
1 刑同京，章廉， 主编.Th类细胞极化群体的基础与临床.北京：军事医学科学出版社，2002.123.
2 Isaacs C, Slack R, Gehan E,et al.A multicenter randomized clinical trial evaluating interleukin-2 activated hematopoietic stem cell transplantation and post-transplant IL-2 for high risk breast cancer patients. Breast Cancer Res Treat， 2005，93(2):125～134.
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4 Rayman P, Uzzo RG, Kolenko V,et al.Tumor-induced dysfunction in interleukin-2 production and interleukin-2 receptor signaling: a mechanism of immune escape. Cancer J Sci Am， 2000，6(1):81～87.
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