乳腺癌及癌前病变中EphA2 ERβ的表达

　　作者：秦艳 梁建芳 郑绘霞 作者单位：山西医科大学第一临床医院(030001)

　　【摘要】目的：通过检测乳腺癌及癌前病变中EphA2蛋白的表达情况，探讨其与ERβ表达的关系及其在乳腺癌发生中的作用。方法：采用免疫组织化学Envision法，检测20例乳腺纤维腺瘤组织、30例乳腺导管上皮不典型增生组织、35例乳腺导管内癌组织及60例原发性浸润性导管癌组织中EphA2及ERβ表达情况。结果：EphA2蛋白在60例浸润性乳腺癌组织中表达显著高于其余三组(P<0.01)。EphA2蛋白表达与绝经状态、病理分级、临床分期及淋巴结转移相关(P<0.05)，ERβ表达与绝经状态、病理分级、及淋巴结转移无关(P>0.05)，仅与临床分期有关(P<0.05)。乳腺癌中EphA2与ERβ的表达呈负相关关系(P<0.05)。结论：EphA2与ERβ的表达与乳腺癌的发生发展有关。

　　【关键词】 免疫组织化学　乳腺癌　EphA2　ERβ

　　Expression of EphA2 and ERβ in Premalignant Lesion and Carcinonm of Breast

　　Qin Yan，Liang Jianfang，Zheng Huixia

　　Dept of Pathology First Clinical Medical College，Shanxi Medical University

　　Abstract Objective：To investigate the expression of the EphA2 and the ERβ in premalignant lesion and carcinoma of breast.Methods：The expression of RASSF1A and CyclinD1 were detected by immunohistochemistry in 20 cases fibroadenoma of breast tissues、30 cases duct atypical hyperplasia tissues、35 cases intraductal carcinoma tissues and 60 cases primarily infitrating ductal carcinoma tissues. Results：There were significant diferences of EphA2 or ERβ expression among four groups(P<0.01).There was statistically difference in the expression of EphA2 in menopause、TNM stage、lymph node metatasis and pathological changes(P<0.05).There was no statistically difference in the expression of ERβ in menopause、pathological changes and lymph node metatasis(P>0.05),but it correlated with the TNM stage(P<0.05).Negative correlation was found between the expression of EphA2 and ERβ in breast cancer.Conclusion：The expression of EphA2 and ERβ may play an important role in breast cancer pathogenesis.

　　Key words Immunohistochemistry;Breast carcinoma; EphA2;ERβ

　　EphA2(又名Eck)是酪氨酸激酶受体Eph亚家族的成员之一，Lindberg利用简并引物从人角化细胞cDNA文库中筛选而得到，广泛表达于上皮来源的细胞。研究表明[1]，EphA2具有双重作用，当其正常表达时，可与配体ephrin-A1结合而抑制细胞的生长，但异常表达又可促进细胞的转化，促进肿瘤细胞的恶变、侵袭和转移。雌激素受体是和乳腺癌密切相关的指标，决定了乳腺癌的内分泌治疗和预后。本研究以新近发现的雌激素受体亚型ERβ和EphA2为对象，探讨两者在乳腺肿瘤发生发展中的作用。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料

　　收集我院病理科2004年1月～2006年7月乳腺切除标本，按最新WHO乳腺病理组织学分类标准，其中乳腺纤维腺瘤组织20例，乳腺导管上皮不典型增生组织30例，乳腺导管内癌组织35例，原发性乳腺浸润性导管癌组织标本60例。所有病例术前均未行放、化疗治疗且术后均经两位以上病理医师确诊。

　　1.2 试剂

　　EphA2、ERβ多克隆抗体(北京博奥森生物技术有限公司)，二步法检测试剂盒、DAB(北京中杉生物技术有限公司)。

　　1.3 方法

　　1.3.1 免疫组织化学检测：免疫组化采用Envision方法，严格按照Envision试剂盒说明书操作。EphA2、ERβ抗体稀释度分别为1∶300、1∶400，以PBS代替一抗作阴性对照，以已知阳性切片作阳性对照。

　　1.3.2 结果判断：EphA2、ERβ分别以胞浆、胞核着色为阳性细胞。结果判定参见文献[2]，采用9分评分制，按“阳性细胞×染色强弱”计总分，总分<3为阴性，4～6为阳性，>6为强阳性。染色结果由两位病理医师诊断核实。

　　1.3.3 统计学分析：采用SPSS 11.5软件进行χ2 检验分析及Spearman相关性分析，P<0.05有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1. EphA2、ERβ在乳腺组织中的表达(见图1)

　　随着病变从纤维腺瘤-不典型增生-导管内癌-浸润性导管癌的进展，EphA2阳性表达率逐渐升高，其阳性细胞数及染色强度亦增加，差异有统计学意义(P<0.05)。而ERβ阳性表达率逐渐降低，其阳性细胞数及染色强度亦减少，纤维腺瘤组织、不典型增生组织、导管内癌组织及浸润性导管癌组织中，EphA2表达阳性率逐渐增加, 差异有统计学意义(P<0.05)，而ERβ阳性率呈递减趋势，差异有显著性(P<0.05)。见表1。表1 EphA2与ERβ在4种不同乳腺组织间的表达四组间比较*χ2 =27.3，P<0.01;#χ2=14.2，P<0.01

　　2.2. EphA2、ERβ表达与乳腺癌临床病理特征间的关系

　　EphA2蛋白的过表达与乳腺癌患者绝经状态、临床分期、组织学分级及有无淋巴结转移有关(P<0.05)。ERβ蛋白的表达与月经状态、组织学分级、有无淋巴结转移无关(P>0.05)，仅与临床分期有关(P<0.05)。见表2。

　　2.3. EphA2与ERβ蛋白表达的相关性

　　通过Spearman相关性分析，可知EphA2与ERβ两种蛋白表达呈显著负相关(P<0.05)。见表3。表2 EphA2及ERβ蛋白表达与乳腺癌临床病理特征间的关系EphA2ERβ阳性阴性rP阳性1532

　　3 讨论

　　酪氨酸激酶受体(RTKs)在细胞增生、分化以及胚胎发育过程中起着关键性的作用， EphA2为其Eph亚家族成员之一。近期研究[1]表明EphA2不仅与胚胎发育、细胞生长有关，而且与细胞恶性转化、肿瘤侵袭转移等密切相关。Zelinski等[3]研究发现，EphA2的过表达能诱导非转化乳腺上皮细胞的恶性转化，还可削弱肿瘤细胞之间的连接，促进肿瘤的转移侵袭。郝宝岚等[4]的研究表明，EphA2蛋白的高表达与食管癌的癌变及侵袭转移有关，认为EphA2蛋白可以在一定程度上反映癌细胞的侵袭能力。以上研究均显示EphA2与肿瘤的发生发展有关。本研究结果显示：随着乳腺肿瘤恶性程度的增高，浸润性导管癌组织中EphA2蛋白的阳性表达率较其它三组显著增高，提示EphA2在乳腺癌的发生发展中发挥重要作用，其异常过表达可能导致肿瘤的恶性转化。在浸润性乳腺癌组织中，随着病理分级及临床分期水平的递增其表达显著升高，且与绝经及淋巴结转移情况密切相关。提示EphA2蛋白表达与肿瘤的恶性进展有关，其表达水平升高可能导致肿瘤向恶性表型发展。绝经者与未绝经者相比，其乳腺癌组织EphA2蛋白表达水平较低，提示雌激素可能下调了EphA2的表达水平[5]。

　　雌激素作为乳腺癌重要的有丝分裂刺激剂，主要是通过雌激素受体(ER)介导。经典的雌激素受体ERα，临床上已将其作为乳腺癌能否接受内分泌治疗的依据，但其中仍有大约40%ERα阳性患者对内分泌治疗有抵抗，这给临床工作带来很多困扰。有研究认为[6]，新的雌激素受体ERβ可能与乳腺癌的激素治疗有关，有望为乳腺癌的临床治疗提供新的突破口。因此，对乳腺肿瘤中ERβ的研究则亦显得尤为必要。本实验结果显示，随着病变从纤维腺瘤-不典型增生-导管内癌-浸润性导管癌的进展，ERβ表达水平逐渐降低，提示该受体对乳腺可能有保护作用[7]，其表达缺失与乳腺癌发生、发展有关。Roger[7]以良性乳腺增生(BBD)和原位癌为研究对象，应用定量免疫组化法检测ERβ表达水平，发现非增生性BBD组织中ERβ阳性率高达85%，而增生性BBD和原位癌中较低。Iwao等[8]应用RT-PCR分析，亦发现正常组织中ERβ mRNA远高于乳腺癌组织。同时我们的实验显示，在乳腺癌晚期患者，其组织中的ERβ表达显著降低，而与绝经状态、病理分级及淋巴结转移无关。这与韩晶等[9]的研究结论一致。与绝经状态无关则提示ERβ表达可能与体内雌激素水平无明显关系。临床早期的乳腺癌组织中的ERβ表达较高，而该期患者的预后亦较好，则间接提示ERβ表达可能作为乳腺癌预后评估的指标。

　　我们在对EphA2蛋白与ERβ蛋白表达的相关性研究中发现，两者呈显著负相关。雌激素可通过经典ERα诱导原基因c-myc表达，从而下调其下游靶蛋白EphA2的表达[10]，ERα和ERβ作为雌激素受体的两种亚型，都参与了雌激素的信号传导。因此，两者有可能通过某种较为复杂的调节机制而影响EphA2的表达，但具体机制目前尚不清楚。

　　本实验研究了与乳腺癌发生机制密切相关的两个重要蛋白EphA2和ERβ，发现随着乳腺肿瘤恶性程度的进展，EphA2表达呈递增趋势，而ERβ表达则呈递减趋势，两者在乳腺癌中呈负相关表达。研究乳腺癌组织中EphA2蛋白及ERβ受体的表达，可更好地了解乳腺癌的生物学行为及其形成的内分泌环境，可为乳腺癌的早期诊断、临床治疗和预后判断提供理论依据。

　　【参考文献】

　　[1] Walker-Daniels J,Hess AR,Hendrix MJ，et al.Diferential regulation of EphA2 in normal and malignant cells[J].Am J Pathol,2003,162(4):1 037～1 042.

　　[2] Miyazaki T,Kato H,Fukuchi M,et al.EphA2 overexpression correlates with poor prognosis in esophageal squamous cell carcinoma[J]. Cancer,2003,103(5):657～663.

　　[3] Zelinski D. P., Zantek N.D.,Stewart J.C.,et al. EphA2 overexpression causes tumorigenesis of mammary epithelial cells[J].Cancer Res,2001,61:2　301～2 306.

　　[4] 郝宝岚,李珊珊,张红燕，等.食管癌组织中KAI1、EphA2蛋白的表达及其意义[J].临床与实验病理学杂志,2006,22(4):429～432.

　　[5] Lu M,Miller KD,Gokmen Polar Y,et al.EphA2 overexpression decreases estrogen dependence andtamoxifen sensitivity[J].Cancer Res,2003,20(1):59～68.

　　[6] Jarvinen TA, Pelto-Huikko M, Holli K, et al.Estrogen receptor beta is coexpressed with ER alpha and PR and associated with nodal status, grade, and proferation rate in breast cancer. Am J Pathol，2000,156(1):29～35.

　　[7] Shigmasu H,Lin L,Takahashi T,et al.Clinical and biological features associated with epidermal growth factor receptor gene mutations in lung cancers[J].J Natl Cancer Inst,2005,97:339～346.

　　[8] Iwao K, Miyoshi Y, Egawa C, et al.Quantitative analysis of estrogen receptor-beta mRNA and its variants in human breast cancers[J].Cancer,2000,88(5):733～736.

　　[9] 韩 晶,王培军,汤如勇，等.ERβ在乳腺癌中表达的意义[J].肿瘤,2006,26(3):264～266.

　　[10] Zelinski DP,Zantek ND,Walker-Danniels J,et al.Estrogen and Myc negatively regulate expression of the EphA2 tyrosine kinase[J].Cell Biochem,2002,85(4):714.