C-erbB-2在乳腺癌中的表达及其与血管生成的关系

　　作者：施万义 林飞 侯凤娟 作者单位：(包头医学院第一附属医院肿瘤外科,内蒙古包头 014010;包钢三医院手术室)

　　【摘要】 目的：探讨原癌基因C-erbB-2在乳腺癌组织中的表达及其与肿瘤微血管密度(MVD)之间的关系。方法：采用 S-P免疫组化法检测215例乳腺癌组织中C-erbB-2基因蛋白表达和MVD值。结果：C-erbB-2的表达与肿瘤微血管密度密切相关，而且呈正相关关系(r=0.48,P<0.05)。结论：C-erbB-2在乳腺癌血管生成中起重要作用，C-erbB-2可作为判断肿瘤生物学行为及预后的指标。

　　【关键词】 乳腺癌;原癌基因C-erbB-2;血管生成;免疫组织化学

　　The Expression of C-erbB-2 and Its Correlation to Tumor Angiogenesis in Primary Breast Carcinoma

　　SHI Wanyi, LIN Fei, HOU Fengjuan

　　( Department of Oncosurgery,the First Affiliated Hospital of Baotou Medical College, Baotou 014010,China)

　　Abstract Objective: To study the expression of Proto-oncogene C-erbB-2 in the tissues of breast cancer and to find out its relationship with microvessel density (MVD). Methods: The S-P immunocytochemical staining was used to determine the expression of C-erbB-2 and MVD, respectively,in 215 cases of breast cancer. Results: There was closely relationships between the expression of C-erbB-2 and MVD in breast cancer. In addition, there was a positive correlation between them (r=0.48,P<0.05). Conclusion: The overexpression of C-erbB-2 plays crucial roles in angiogenesis in breast carcinoma and the expression of C-erbB-2 can be taken as an index for judging carcinoma biology, its prognosis and, thus, a guidance to clinical treatment as well.

　　Key words Breast carcinoma; Proto-oncogene C-erbB-2; Angiogenesis; Immunocytochemistry

　　原癌基因C-erbB-2(HER-2/neu)在多种上皮肿瘤，尤其是乳腺癌、卵巢癌、胃癌等多种癌症中扩增及过度表达，与患者预后密切相关[1-2]。实体肿瘤的生长和转移依赖于血管生成，而血管生成依赖于多种相关因子的诱导和调节，肿瘤血管生成是调节血管生成的正、负性因子之间相互作用的结果，作为判断血管生成强度指标之一的微血管密度和血管生成正性调节因子之间呈显著的正相关性。因此，微血管密度(microvessel density ，MVD)值可以反映血管生成强度。本研究采用免疫组化方法对乳腺癌组织C-erbB-2表达、MVD值进行相对定量观察，探讨C-erbB-2基因和乳腺癌血管生成之间的关系。

　　1 资料与方法

　　1.1 病例与标本 搜集1999年2月至2004年4月包头医学院第一附属医院手术治疗并经临床病理证实的原发性乳腺癌组织石蜡包埋标本215例，患者均为女性，年龄29～78岁，平均53.5岁。组织病理学均为浸润性导管癌，所有病例均行根治性手术，术前未经抗癌治疗。

　　1.2 主要试剂 链霉素抗生物素过氧化酶免疫组化染色超敏试剂盒(Ultrasensitive,S-Pkit)、CD34单克隆抗体、C-erbB-2单克隆抗体均购自福州迈新生物技术开发公司，所有抗体均为即用型;抗原修复缓冲液为0.01mol/L枸橼酸盐缓冲液(pH6.0)。

　　1.3 方法 本文所有组织均为石蜡包埋，做厚度为4μm的连续切片。免疫组织化学染色采用S-P法，DAB显色，免疫组织化学染色过程中以PBS代替一抗作阴性对照，用已知的CD34阳性、C-erbB-2阳性的乳腺癌组织切片做阳性对照。

　　1.3.1 肿瘤内微血管计数与分级 CD34抗体在乳腺癌间质血管内皮细胞(EC)的胞质内出现棕黄色颗粒为阳性，不着色为阴性，对照Weidner[3]报道的方法，在100倍光镜下挑选微血管分布最密区域，200倍视野下计数5个不重复视野中被CD34染成棕黄色的血管数目，取其均值作为MVD，依每个视野微血管密度不同将切片分为三级：Ⅰ级为0～50个，Ⅱ级为51～100个，Ⅲ级>100个。

　　1.3.2 C-erbB-2计数与分级 参照第四军医大学赵彤等免疫组织化学反应结果的判断标准，采用着色强度积分与数量积分相加的方法，C-erbB-2阳性物质定位于细胞膜。将阳性细胞百分比分成五级：无阳性细胞为0分，阳性细胞≤25%者为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。着色强度：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。着色强度积分与数量积分相加：0～1分为(–)，2～3分为(+)，4～5分(++)，6～7分(+++)。

　　1.4 统计学处理 研究结果利用SPSS11.0统计软件，应用方差进行统计学分析。

　　2 结果

　　MVD值在C-erbB-2阴性和三个阳性组间有差异(P<0.05)，阳性组MVD值高于阴性组，且呈正相关(相关系数r=0.48，P<0.05)，见表1。

　　表1 C-erbB-2阳性和阴性间MVD值比较(略)

　　*与C-erbB-2阴性比较P<0.05;**与C-erbB-2(+)比较P<0.05;***与C-erbB-2(++)比较P<0.05

　　3 讨论

　　C-erbB-2基因是定位于染色体17q21编码分子量为185kD的跨膜蛋白，该蛋白与表皮生长因子受体(EGFR)具有高度同源性，故称人表皮生长因子相关基因。正常情况下处于非激活状态，参与细胞生长、分化的调节。当受到体内外某些因素的作用而激活时，具有肿瘤转化活性，其方式主要是基因扩增和蛋白过度表达，在细胞信号传递系统中起桥梁作用，刺激细胞增生、浸润和转移，与乳腺癌等多种肿瘤的生物学行为有关[4]。

　　恶性肿瘤的生长、侵袭及转移过程受到多种因素影响，其中肿瘤诱导的血管生成反应与其生物学行为关系密切，血管生成受血管生成因子的调控，血管内皮生长因子(VEGF)是诱导血管生成的主要调节因子，作为判断血管生成强度指标之一的MVD和血管生成正性调节因子之间呈显著的正相关性[5]，因此，MVD可以反映血管生成强度。有研究表明，C-erbB-2可以上调黏附分子E-cadheris和整合素α的表达[5]。而E-cadheris和整合素α可以上调VEGF、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等相关因子的表达[6-7] 。这可能是C-erbB-2促进肿瘤血管生成的部分原因。Alicia等[8]用突变的C-erbB-2转化N1H3T3成纤维细胞，显著诱导VEGF/血管通透因子(VPF)，这一作用因缺氧而进一步增强。用抗C-erbB-2抗体处理C-erbB-2过表达的乳腺癌细胞株SKBR-3，使VEGF/VPF蛋白表达随剂量增加而降低。说明C-erbB-2至少部分通过对VEGF/VPF强烈的上调作用刺激肿瘤新生血管生成介导致癌作用。本研究发现，MVD值在C-erbB-2阴性和阳性组间差异有统计学意义(P<0.05)，说明C-erbB-2可以通过上调血管生成相关因子的表达而促进肿瘤的血管生成。

　　目前认为，肿瘤的发生发展是多基因协同作用的过程。本研究结果显示，C-erbB-2与乳腺癌组织血管生成有密切关系，其机制有待于进一步探讨，在临床病理工作中开展C-erbB-2检测对指导临床治疗、预测患者的预后有十分重要的意义。

　　【参考文献】

　　[1] 吴唯,唐中华,易文君,等. c-erbB-2基因在青老年乳腺癌中的表达及其意义[J].中国普通外科杂志，2003, 12(5):377-379.

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　　[3] Weider N. Current pathologic methods for measuring intratumoral microvessel density within breast carcinoma and other solid tumors[J].Breast Cancer Res Treat,1995,36(2):169-180.

　　[4] 赵光明,邢征英,吴洪波,等.浸润性乳腺癌c-erbB-2,nm23的表达及意义[J].中国误诊学杂志,2004,4(6):884-885.

　　[5] Toi M, Inada K, Suzuki H,et al. Tumor angiogenesis in breast cancer:its importance as a prognostic indicator and association with vascular endothelial growth factor expression[J].Breast Cancer Res Treat, 1995,36:193.

　　[6] Laughner E,Taghavi P, Chiles K,et al.HER-2(neu) signaling increases the rate of hypoxia-inducible factor lalpha(HIF-lalpha) synthesis:novel mechanism for HIF-l-mediated vscular endothelial growth factor expression [J]. Mol Cell Biol,2001,21(12): 3995-4004.

　　[7] Giatromanolaki A, Koukourakis MI, Sivridis E, et al. Relation of hypoxia inducible factor 1( and 2( in operable non-small cell lung cancer to angiogenic/molecular profile of tumors and survival[J]. Br J Cancer, 2001,85(6):881-890.

　　[8] Alicia ZS, Blanca OS,Mariana GH, et al. Rapid production of candida albicans chlamydospores in liquid media under various incubation conditions[J]. Nippon Ishinkin Gakkai Zasshi, 2006,47(3):231-234.