新疆维、汉妇女宫颈癌与人类乳头瘤病毒的关系研究

　　作者：刘开江　赵莉， 刘继文， 赵 峰， 马晓梅 作者单位：(新疆医科大学1附属肿瘤医院妇外一科， 2公共卫生学院劳动卫生与环境卫生学教研室， 3附属肿瘤医院病理科， 新疆 乌鲁木齐 830011)

　　【摘要】 目的：探讨新疆地区维吾尔族、汉族妇女宫颈癌发病率不同的原因中是否有人类乳头瘤病毒(HPV)感染型别特点的影响因素。方法：采用导流杂交基因芯片技术检测200例维吾尔族和200例汉族宫颈癌患者21种HPV亚型感染的分布情况。结果：(1)维吾尔族宫颈癌中HPV高危亚型的排序是HPV16、HPV58、HPV18、HPV52和HPV31;汉族宫颈癌的排序是HPV16、HPV31、HPV58、HPV18和HPV52。HPV58、HPV31分别在维吾尔族、汉族宫颈癌中占第二位,是维吾尔族、汉族宫颈癌除HPV16之外较易感染的类型。(2)维吾尔族宫颈癌组织中多重感染者43例，占HPV阳性患者的21.83%;汉族宫颈癌组织中多重感染者27例，占HPV阳性患者的13.78%，两者比较差异有统计学意义。(3)HPV高危亚型感染频率在维吾尔族、汉族宫颈癌中不同。维吾尔族宫颈癌HPV16、HPV58、HPV18、HPV52在HPV阳性的宫颈癌中占的比例分别为65.88%、8.63%、7.06%和2.75%。汉族宫颈癌HPV16、HPV31、HPV58、HPV18在HPV阳性的宫颈癌中占的比例分别为66.81%、6.90%、4.74%和3.88%。结论：维吾尔族、汉族宫颈癌的HPV感染谱不同;维吾尔族宫颈癌患者有较多的HPV高危亚型多重感染，维吾尔族妇女感染上HPV后更容易发展成子宫颈癌。

　　【关键词】 子宫颈癌; 维吾尔族; 汉族; 乳头状瘤， 人; 导流杂交

　　The study of the relationship between cervical cancer and human papilloma

　　virus on Uigur and Han in Xinjiang

　　LIU Kai-jiang, ZHAO Li, LIU Ji-wen, et al

　　(Department of Gynecology, Affiliated Cancer Hospital, Xinjiang Medical University,

　　Urumqi 830011, China)

　　Abstract: Objective: To approach whether there are influential factors of human papilloma virus (HPV) infection type characteristics from the reasons of different incidence rate of Xinjiang Uigur and Han cervical cancer. Methods: Use channelization hybridization gene chip technology detected 21 kinds of HPV subtypes on 200 cases of Uigur cervical cancer and 200 cases of Han cervical cancer. Results: (1) HPV infection spectrum of Uygur, Han cervical cancer were different. The subtypes of Uigur cervical cancer in high-risk HPV by turn were HPV16, HPV58, HPV18, HPV52 and HPV31; The subtypes of Han were HPV16, HPV31, HPV58, HPV18 and HPV52. HPV58 in Uigur cervical cancer was the second one. HPV58, HPV31 ranked second in Uigur, Han cervical cancer respectively. HPV58, HPV31 were likely more susceptible types besides HPV16 in Uigur and Han cervical cancer. (2)The cases of Uigur cervical cancer in multiple infections were 43, which was 21.83% in HPV-positive patients; The cases of Han cervical cancer in multiple infections were 27, which was 13.78% in HPV-positive patients. Compared with each other, there was a statistical difference. (3)The infection frequency of HPV high-risk subtypes was different between the Uigur and Han cervical cancer. The proportion of HPV16, HPV58, HPV18, HPV52 of Uigur cervical cancer in the HPV-positive cervical cancer were 65.88%, 8.63%, 7.06% and 2.75%. The proportion of HPV16, HPV31, HPV58, HPV18 of Han cervical cancer in the HPV-positive cervical cancer were 66.81%, 6.90%, 4.74% and 3.88%. Conclusion: Uigur and Han had different infection spectrums.Uigur patients with cervical cancer had more multiple high-risk HPV infection. This made Uigur women infected with HPV develop to cervical cancer more easily.

　　Key words: cervical cancer; Uigur; Han; papillary epithelioma; human; channelization hybridization

　　国内外科学家很早就怀疑子宫颈癌与某些感染因子有关，但不能锁定病因。近几十年来，大量的研究逐步证实人乳头瘤病毒(HPV)感染是子宫颈癌的主要流行因素，HPV与子宫颈癌高度相关[1]。研究还发现，在不同国家与地区，人乳头瘤病毒基因分型的流行病学分布不同[2]。以往的研究中发现在新疆地区HPV感染的主要型别以16型、18型为主，但有关其他HPV型别以及HPV混合多重感染的研究较少。新疆维吾尔族宫颈癌高发，是否有HPV感染型别的特点?尤其是HPV混合多重感染的特点?都值得进一步探讨。近年来，国内外使用HPV 分型基因芯片的方法检测HPV,该方法具有敏感性高、特异性强、检测结果准确可靠的特点[3]。本研究采用具有自动化、通量大、准确率高、特异性强的HPV基因芯片技术，完善以往因技术手段限制而不能同时进行更多型别的HPV 检测。旨在探讨维吾尔族、汉族宫颈癌发病差异与不同型别HPV感染关系，为临床解释维吾尔族宫颈癌高发的病因提供HPV感染特点的理论依据。

　　1 材料与方法

　　1.1 研究对象 选择2006年12月～2008年2月在新疆医科大学附属肿瘤医院住院患者的经病理证实的子宫颈癌患者石蜡标本400例，其中维吾尔族宫颈癌标本200例，汉族宫颈癌标本200例。采用凯谱生物技术有限公司提供的HPV基因芯片，含有5 种低危型(HPV6、11、42、43和44)、13 种高危型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)和中国人群常见的3种亚型(53、66、CP8304)。成套试剂盒和HybriMax医用核酸分子快速杂交仪。

　　1.2 HPV检测的实验步骤 采用酚/氯仿方法提取DNA：石蜡组织 6 mm切片放入 EP管中，二甲苯脱蜡，乙醇脱二甲苯后室温干燥。加入裂解液 50 ml充分震荡混匀，沸水中加热 10 min。13 000 r/min离心 10 min后取上清液，放4℃冰箱备用。PCR扩增、杂交过程、显色过程均按照试剂盒提供的操作流程进行。

　　1.3 试验结果分析 研究结果采用肉眼观察获得，检测结果阳性点为清晰可见的蓝紫色圆点。根据膜条HPV分型分布图，判断阳性点为何种HPV各亚型。如果只有左上两对照点显蓝紫色，其它不显色，则判定该标本中的HPV分型DNA检测结果为阴性。如果左上两对照点显蓝紫色，还有1个或1个以上点显蓝紫色，则判定该标本为阳性(代表该类型HPV检测阳性)。

　　1.4 统计学处理 将400例宫颈癌患者的HPV检测结果，输入到EXCEL表中。统计分析采用行×列表的卡方检验，检验水准α=0.05。

　　2 结果

　　2.1 维吾尔族、汉族宫颈癌中HPV各亚型检测结果 200例维吾尔族宫颈癌组织中检测到各类HPV感染197例(3例未检测出HPV亚型)，感染率为98.5%(197/200),其中154例为单一型别HPV阳性(单一感染)，43例为多型别HPV感染。200例汉族宫颈癌组织中检测到各类HPV感染196例(4例未检测出HPV亚型)，感染率为98.0%(196/200)，169例为单一型别HPV阳性，27例为多型别HPV感染。维吾尔族、汉族宫颈癌组织中HPV阳性率差异无统计意义。

　　2.2 维吾尔族、汉族宫颈癌中HPV 各亚型单一感染的分布情况 197例HPV阳性的维吾尔族宫颈癌组织中HPV的单一感染率为78.17%(154/197)，最常见的感染亚型依次为HPV16、HPV58、HPV18、HPV52、HPV68。196例汉族宫颈癌组织中HPV的单一感染率为86.22%(169/196)，最常见的感染亚型依次为HPV16、HPV31、HPV58、HPV18、HPV66、HPV52。

　　2.3 维吾尔族、汉族宫颈癌中HPV高危亚型多重感染的分布情况 197例HPV阳性的维吾尔族宫颈癌患者中，HPV多重感染43例，占21.83%(43/197)。大多数是HPV16与其他亚型混合感染，多为二重感染如HPV16+58、HPV16+18等，少数为三重、四重感染，如HPV16+18+59、HPV16+33+58+66。多重感染中低危型出现的少，只有2例HPV43与HPV16，68合并感染。196例汉族宫颈癌患者组织中HPV多重感染27例(13.78%)，以HPV16与其它HPV高危亚型混合感染为主，如HPV16+31、HPV16+52，少数为三重、四重感染，如HPV16+31+59、HPV16+43+53+CP8304等。维吾尔族、汉族宫颈癌HPV多重感染率差异有统计学意义(P=0.037)。

　　2.4 维吾尔族、汉族宫颈癌中HPV高危亚型出现的频率 197例HPV阳性的维吾尔族宫颈癌组织中各亚型出现的频率为255次。HPV16在HPV阳性的宫颈癌中出现的频率最高，达到65.88%，其次为HPV58(8.63%)、HPV18(7.06%)、HPV52(2.75%)、HPV31(2.35%)等。196例汉族宫颈癌组织中各亚型出现的频率为232次，其中HPV16阳性频率最高，达到65.81%，其次为HPV31(6.90%)、HPV58(4.74%)、HPV18(3.88%)、HPV52(3.88%)。维吾尔族、汉族宫颈癌中各HPV高危亚型出现的频率差异有统计学意义(P<0.01)。

　　3 讨论

　　3.1 维吾尔族、汉族宫颈癌HPV感染谱 Franceschi[4]对22个国家的宫颈癌标本进行HPV的检测，HPVl6在HPV阳性中的比例为50%;各亚型在各国、地区及种族中无差异。但是其它亚型存在地区和民族之间的差异。李洁等[5]用核酸印迹技术对我国14个省、市自治区的1 008例宫颈癌组织进行HPV型别检测，发现HPV16、18、31、35、51、58等型的存在，并发现各地区主要流行型别随地理位置有所差异。

　　本研究结果显示，200例维吾尔族宫颈癌组织中HPV阳性的宫颈癌标本197例，阳性率为98.5%，200例汉族宫颈癌组织中HPV阳性的标本196例，阳性率为98.0%，差异没有统计学意义(P>0.05)，与国内外报道一致。400例标本中共有7例(3例维吾尔族，4例汉族)未检测出HPV感染，考虑可能原因：(1)7例患者宫颈癌组织中可能含有21种亚型之外的HPV;(2)石蜡组织灭活了HPV。通过分析比较发现，HPV各亚型在维、汉族中的感染谱不同，排序也不同，HPV各亚型在维吾尔族宫颈癌中排序是HPVl6、HPV58、HPVl8、HPV52、HPV31等;而汉族宫颈癌的排序是HPVl6、HPV31、HPV58、HPV18、HPV52等，维、汉族HPV感染谱的排序与文献报道不一致。提示HPV各亚型在维、汉族感染谱不同，排序不同，HPV58、HPV16可能分别是维吾尔族、汉族宫颈癌较易感染的类型，可能是新疆地区的HPV感染谱不同于其他地区的特点，是维吾尔族宫颈癌的发病率明显高于汉族宫颈癌的原因之一，这一结论有待于今后扩大样本量来进一步研究验证。

　　3.2 维吾尔族、汉族宫颈癌多重HPV感染率 有研究发现子宫颈癌前病变及癌中HPV 型混合感染检出率高，且不同地区、不同民族的HPV混合类型不同，所导致的病情发展及转归也不同[6]。HPV 各型之间可能没有相互免疫，才会引起同一部位的多种HPV 亚型的感染[7]。陶萍萍等[8]研究报道，HPV在子宫颈病变中的多重感染比例为44.6%，最常见类型为HPV 52+58及HPV 16+18二重感染，宫颈癌中HPV多重感染率为33%，多重感染的比例随宫颈病变级别增加而增加。

　　本研究中维吾尔族宫颈癌组织中多重感染者43例，占HPV阳性患者的21.83%(43/197);汉族宫颈癌组织中多重感染者为27例，占HPV阳性患者的13.78%(27/196)，两者比较差异有统计学意义(P=0.037)。维吾尔族、汉族宫颈癌组织中多重感染率与国外文献报道相同。维吾尔族、汉族宫颈癌中多重感染基本上都是以HPVl6与其他型别合并感染为主，分别占93.02%(40/43)和88.89%(24/27)，其中HPVl6与HPVl8、HPV31、HPV58合并感染较多见。有关文献报道HPVl6+18合并感染在多重感染中占多数约30%左右，但也有其他类型，含HPV52或HPV58的感染[6]。本研究中维吾尔族宫颈癌组织中HPV16+18、HPV16+58合并感染或再与其他类型合并感染占多重感染的34.88%(15/43)，汉族宫颈癌组织中HPV16+18、HPV16+31合并感染或再与其他类型合并感染占多重感染的40.74%(11/27)。提示HPV 16不光在单一型感染中占有极大比例，在多重感染中也极为常见。HPV 58及31分别作为新疆地区维吾尔族、汉族宫颈癌除HPV16之外易感类型之一，在多重感染中可能占有重要地位。

　　3.3 维吾尔族、汉族宫颈癌中HPV高危亚型出现的频率 来自世界范围的宫颈癌组织标本的研究发现，HPV16、18型感染率最高，在检出的所有型别中，HPV16占50%，HPV18占14%，HPV45占8%，HPV31占5%，其他型别HPV占23%，普遍认为HPV16、18型感染很普遍，没有明显的地区差异[4]。但是有些HPV型别有地理位置的差异，如HPV45型在来自非洲西部的宫颈癌组织中很常见，而HPV39、59型仅在美洲的中部和南部宫颈癌组织中出现，在墨西哥HPV阳性者中HPV58居第一位，其次为HPV16和HPV18[9]。国外宫颈癌感染以HPV16和HPV18型为主，总检出率为50%左右，HPV16、HPV18型分别占40%、10%左右。我国宫颈癌感染以HPV16、HPV58为主，总检出率为53.5%，HPV16和HPV58型分别占31.9%、17.6%，HPV18型感染率明显低于国外报道[10]。

　　本研究中200例维吾尔族妇女宫颈癌组织中HPV阳性的宫颈癌标本为197例(包括单一感染及多重感染)，阳性率为98.5%，而HPV16、HPV58、HPV18、HPV52在HPV阳性的宫颈癌中占的比例分别为65.88%、8.63%、7.06%和2.75%。200例汉族妇女宫颈癌组织中HPV阳性的宫颈癌标本为196例(包括单一感染及多重感染)，阳性率为98.5%，HPV16、HPV31、HPV58、HPV18在HPV阳性的宫颈癌中占的比例分别是66.81%、6.90%、4.74%、3.88%。维吾尔族、汉族宫颈癌的HPV16及其他亚型的感染率与国内外报道不一致。提示HPV各高危亚型在维、汉族宫颈癌中感染特点不同，这种差异可能与民族的遗传特点有关;也可能是维吾尔族、汉族宫颈癌发病率不同的原因之一。

　　【参考文献】

　　[1] NubiaMunoz, Xavier Castellsagu E, et al. HPV in the etiology of human cancer[J]. Vaccine, 2006,24(S3):1-5.

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　　[5] 李 洁，刘宝印，Zur Hausen,等.中国妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒感染及地理分布的调查[J].中华实验和临床病毒学，1996,10:50-55.

　　[6] Schellekens MC, Dijkman A, Aziz MF, et al. Prevalence of single and multiple HPV types in cervical carcinomas in Jakarta,Indonesia [J] .Gynecol Oncol, 2004,93(1):49-53.

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　　[8] 陶萍萍,卞美璐,李 敏，等.HPV多重感染与宫颈病变关系探讨[J].中国妇产科临床杂志，2006，7(2)：94-96.

　　[9] Gonzalez-Losa MR, Rosado-Lopez I, Valdez N, et al. High prevalence of human papillomavirus type 58 in Mexican colposcopy patients[J]. J Clin Virol, 2004, 29 (3):202-205.

　　[10] 赵方辉，乔有林.宫颈癌流行病学研究进展[M].北京：人民卫生出版社,2002.45-48.