乳腺浸润性导管癌中Ezrin、CD44v6 的表达及其临床意义
发表时间：2010-08-11 浏览次数：384次
作者：韩小于 作者单位：新疆医科大学附属肿瘤医院病理科，新疆 乌鲁木齐 830011
【摘要】 目的： 探讨埃兹蛋白(Ezrin)与细胞粘附分子(CD44v6)在乳腺浸润性导管癌中的表达及其意义。方法：用免疫组化PV9000通用型两步法检测90例乳腺浸润性导管癌组织中Ezrin和CD44v6的表达。结果：有淋巴结转移患者Ezrin和CD44v6阳性表达率明显高于无淋巴结转移者(P<0.05);随着临床分期、组织学分级的增加，Ezrin和CD44v6阳性表达率有增加的趋势;不同年龄、肿瘤大小、淋巴结转移数目的患者Ezrin和CD44v6阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05)，Ezrin和CD44v6的表达具有关联性(χ2=9.188， P=0.002，Pearson列联系数=0.304),且2者在乳腺浸润性导管癌中共表达阳性者腋窝淋巴结转移阳性率高于阴性者(P<0.05)。结论：Ezrin和CD44v6与乳腺浸润性导管癌的浸润和转移有关，2者相互作用促进乳腺浸润性导管癌的淋巴结转移，可以作为预测乳腺浸润性导管癌淋巴结转移的肿瘤标志物。
【关键词】 埃兹蛋白 细胞粘附分子 乳腺癌 免疫组织化学
Expression and clinical significance of CD44v6 and Ezrin in breast invasive ductal carcinoma
HAN Xiao-yu, ZHAO Feng, CHAI Min-xiu, et al
(Department of Pathology, Affiliated Tumor Hospital, Xinjiang Medical University，Urumqi 830011, China)
Abstract： Objective： To investigate the expression of Ezrin and CD44v6 in breast invasive ductal carcinoma and their clinical significance. Methods： The expression of Ezrin and CD44v6 in 90 specimens of breast invasive ductal carcinoma were detected by PV9000 immunohistochemistry. Results： The positive expression rate of Ezrin and the CD44v6 in patients with metastasis of axillary lymph nodes was higher than that in cases with non-lymph nodes metastasis obviously (P<0.05). Along with clinical stages and the histopathological grade increasing, the positive expression rate of Ezrin and the CD44v6 had the increase tendency. Disparity in age, tumor size, lymph node shift numbers in patients, the difference of positive expression rate of Ezrin and the CD44v6 had not statistics significance (P>0.05), of all the sample, direct correlation was showed in the expression of CD44v6 and Ezrin (χ2=9.188， P=0.002，Pearson contingency coefficient=0.304). Furthermore,both Ezrin and CD44v6 expression positive patient of breast invasive ductal carcinoma, axillary lymph node shift positive rate was higher than the negative (P<0.05). Conclusions： Ezrin and CD44v6 are closely related to invasion and metastasis of breast invasive ductal carcinoma. Ezrin and CD44v6 are interaction and promot the lymphonode metastasis of breast invasive ductal carcinoma. They are important tumor markers in predicting lymphatic metastasis of breast invasive ductal carcinoma.
Key words： Ezrin; CD44v6; breast cancer; immunohistochemistry
肿瘤的侵袭、转移是一个多步骤且复杂的过程，其中粘附分子在此过程中起着重要的作用。细胞粘附分子CD44v6是粘附分子细胞基质透明质酸受体(CD44)的异构体, 近年研究表明, CD44v6 与恶性肿瘤的发生、侵袭和转移密切相关[1～3] 。埃兹蛋白(Ezrin)是连接细胞膜和细胞骨架之间的ERM(Ezrin-radixin-moesin)家族成员之一[4]。Ezrin蛋白的C末端与细胞骨架的肌动蛋白相连，N末端则可通过与细胞表面黏附分子钙连素(cadherin)、CD44、细胞间粘附分子(ICAM-1、ICAM-2)等连接，调节细胞-细胞及细胞-细胞外基质(ECM)之间的黏附，从而影响肿瘤细胞侵袭性等生物学行为[5,6]。为探讨Ezrin 与CD44v6在乳腺癌中的作用及相互关系,本文采用免疫组织化学方法对90例乳腺癌Ezrin与CD44v6蛋白表达进行检测,现报道如下。
1 资料与方法
1.1 临床资料 收集我院2005年1月～2006年1月行乳腺癌根治术或改良根治术的石蜡包埋标本90例，均为女性，年龄28～69岁, 平均年龄47岁。术后病理均确诊为乳腺浸润性导管癌，所有患者术前均未行新辅助化疗、放疗和内分泌治疗。根据2002年国际抗癌联盟(UICC) 乳腺癌TNM 分期[7]和乳腺浸润癌分级标准,本组病例中TNMⅠ期27例, Ⅱ期45例, Ⅲ、Ⅳ期18 例; 组织学分级Ⅰ级32例, Ⅱ级47例, Ⅲ级11 例。
1.2 方法 采用PV9000通用型两步法免疫组化方法检测乳腺癌组织中Ezrin与CD44v6的表达。主要步骤： 石蜡切片,常规脱蜡入水, 中火微波修复抗原15 min, 3% H2O2浸泡10 min, 依次加一抗室温湿盒3 h, 二抗室温30 min, 三抗 30 min。 DAB 显色, 苏木精复染，脱水封片。PBS液代替一抗作阴性对照，Ezrin(1∶75)阳性对照为正常肺组织 , CD44v6(1∶50)阳性对照为扁桃体组织。鼠抗人CD44v6 单克隆抗体(克隆系： VFF-7,北京中杉金桥生物技术有限公司)，鼠抗人Ezrin单克隆抗体(克隆系：3C12，福州迈新生物技术开发有限公司)。
1.3 结果判定 Ezrin阳性着色在乳腺癌细胞膜和胞浆内，呈棕黄色颗粒， CD44v6阳性着色在细胞膜上出现棕黄色或棕褐色颗粒。阳性细胞数<10%为“-”,阳性细胞数≥10%为“+”。
1.4 统计学处理 采用SPSS10.0统计软件包对数据进行处理，采用卡方检验(χ2)、四格表确切概率法(Fisher.s Exact)检验及关联性分析，检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 Ezrin在乳腺浸润性导管癌中的表达 Ezrin在乳腺癌组织中胞膜和胞浆内着色(图1)。90例乳腺浸润性导管癌中有54例(60.0%)阳性表达，其中39例无腋淋巴结转移的癌组织中有18例(46.2%)阳性表达，51例有腋淋巴结转移的癌组织中有36例(70.6%)阳性表达。无腋淋巴结转移的癌组织中阳性表达率明显低于有淋巴结转移的癌组织(χ2=5.498， P=0.019);随组织学分级的增加Ezrin阳性表达率呈增加趋势，差异有统计学意义(P<0.05);而Ezrin表达在不同腋淋巴结转移数目、不同肿瘤直径大小、不同TNM分期和不同年龄各组间差异均无统计学意义(P>0.05)(表1)。
表1 不同临床病理特征乳腺癌患者Ezrin、CD44v6的表达(略)
2.2 CD44v6在乳腺浸润性导管癌中的表达 CD44v6在癌组织中定位于肿瘤细胞胞膜，呈棕黄色(图2)。本组90例乳腺浸润性导管癌中有40例(44.4%)阳性表达，其中39例无腋淋巴结转移的癌组织中有12例(30.8%)阳性表达，51例有腋淋巴结转移的癌组织中28例(54.9%)为阳性表达。有淋巴结转移的癌组织中阳性表达率较无转移者明显增强(χ2=5.213， P=0.022);随临床分期、组织学分级的增加，CD44v6阳性表达率呈增加趋势，差异有统计学意义(P<0.05);而CD44v6阳性表达在不同腋淋巴结转移数目、不同肿瘤最大径大小及不同年龄组间差异无统计学意义(P>0.05)(表1)。
图1 乳腺浸润性导管癌组织中Ezrin蛋白胞膜、胞浆阳性表达(×200)(略)
图2 乳腺浸润性导管癌组织中CD44v6蛋白胞膜阳性表达(×200 )(略)
2.3 乳腺浸润性导管癌中Ezrin与CD44v6表达的关联性及与淋巴结转移的关系 90例乳腺浸润性导管癌中Ezrin和CD44v6表达一致的共58例,其中同为阳性31例,同为阴性27例。经关联性分析2者存在关联性(χ2=9.188， P=0.002，Pearson列联系数=0.304)(表2)。Ezrin和CD44v6在乳腺浸润性导管癌中共表达阳性者腋窝淋巴结转移阳性率高于阴性者(χ2=8.188， P=0.004)(表3)。
表2 乳腺浸润性导管癌中Ezrin表达与CD44v6表达的关联性(略)
表3 Ezrin、CD44v6在乳腺浸润性导管癌中的共表达与淋巴结转移的关系(略)
3 讨论
侵袭和转移是恶性肿瘤的主要生物学特征，是导致手术、放疗及化疗等治疗失败和患者死亡的主要原因，也是一个极其复杂、多步骤、多因素共同参与的过程。研究表明，Ezrin在肿瘤的侵袭和转移中扮演重要角色[8～10]，其可能的作用机制主要是通过对骨架蛋白、细胞粘附、细胞信号转导、吞噬功能及诱发肿瘤细胞的抗凋亡等多方面的调节从而影响细胞的功能，使其向恶性表型转化，侵袭和转移能力增加。本组结果显示在淋巴结转移患者的阳性率明显高于无转移者(P<0.05) , 提示Ezrin 在乳腺癌中对肿瘤发生淋巴道转移有促进作用。随着组织学分级增加，Ezrin的阳性表达率呈递增趋势，提示Ezrin可能与乳腺癌的进展过程有着密切的关系。本组实验数据表明，不同淋巴结转移数目、肿瘤大小、TNM分期和年龄患者Ezrin蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05),与文献报道基本一致[11]。细胞与细胞之间和细胞与基质间的黏附性改变是导致肿瘤浸润转移的关键因素之一。CD44是分布广泛的细胞表面跨膜糖蛋白,参与细胞间、细胞与ECM之间的特异性黏附过程,与细胞伪足形成及迁移运动有关，同时具有激活淋巴细胞、参与信号转导等多种生物学功能。CD44基因拼接方式不同可产生多种表达形式,简单说有两种,CD44s(标准型)和CD44v(变异型),CD44v因外显子拼接不同有20余种变异体,其中CD44v6与肿瘤的发生和发展更为密切[8]。本组数据显示CD44v6的表达在不同TNM分期、组织学分级和有无淋巴结转移分组中有差异，并且差异有统计学意义(P<0.05),CD44v6的总阳性率为44.4%，与其它的相关报道相比较总阳性率较低[12]，这可能与各实验室采用的不同厂家的试剂、所选病例数的差别及实验条件等因素有关。 Martin等[8]研究表明Ezrin与CD44形成复合体,两者在转移的肿瘤细胞中共同表达,Ezrin直接与CD44分子的胞浆部分发生作用,影响细胞骨架蛋白的构象和分布,从而改变肿瘤细胞的运动能力、细胞间及细胞与ECM连接,促进转移和增殖。同时,CD44的上调能够使Ezrin功能活化，肿瘤侵袭转移能力增强。本文结果显示，在90例乳腺浸润性导管癌中，CD44v6和Ezrin的表达之间存在关联性，而且2者在乳腺癌组织中的共表达阳性者的淋巴结转移阳性率明显高于阴性者(P<0.05)，提示CD44v6和Ezrin可相互作用而促进肿瘤侵袭、转移。本研究表明，CD44v6和Ezrin在乳腺浸润性导管癌中的阳性表达率与腋淋巴结转移与否、组织学分级、TNM分期有一定关系，而与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移数目无明显关系，CD44v6和Ezrin之间的表达存在关联性，并且二者的共表达上调与腋淋巴结转移具有关联性，可以作为预测乳腺浸润性导管癌淋巴结转移的肿瘤标志物。无论是CD44v6还是Ezrin阳性表达，均提示该部分患者与阴性者相比较前者肿瘤细胞侵袭转移的潜能更大;如CD44v6和Ezrin均阳性者则其发生腋淋巴结转移的可能性将大大增加;因常规病理切片不可能做到连续切片，腋淋巴结转移假阴性是必然存在的，所以在临床工作中对CD44v6和Ezrin双阳性而常规病理检查腋淋巴结转移阴性的乳腺浸润性导管癌病人要引起足够重视。
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