Twist、MMP-2的表达与结肠直肠癌生物学行为的关系
发表时间：2010-08-17 浏览次数：393次
作者：顾纪明，周洪伟，周士福，吴露露，金琳芳，陈 进 作者单位：(江苏省无锡市第四人民医院肿瘤科，无锡214062)
【摘要】 目的：探讨结直肠癌组织中Twist、MMP-2表达。方法：应用免疫组化S-P法检测，以PBS溶液代替一抗作空白对照。阳性细胞数判定： <10% (-),<25% (+),25%～50%(++)，>50%(+++)。结果：48例结直肠癌组织中，Twist蛋白阳性表达23例(47.92%)，MMP-2阳性表达26例(54.17%)。Twist、MMP-2与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05) 。Twist、MMP-2间表达呈显著正相关(P<0.05)。结论：Twist、MMP-2在肿瘤细胞发生浸润转移中起了协同作用，两者表达均与患者的病理大体类型、生长方式无关。
【关键词】 结肠癌;直肠癌;Twist;基质金属蛋白酶2;免疫组化S-P法
肿瘤的发生、发展涉及到多种癌基因、抑癌基因、一些细胞因子的变化。我院2003年1~6月手术切除的结直肠癌标本48例，采用免疫组化S-P法检测结直肠癌组织中Twist、MMP-2表达,探讨两者与结直肠癌生物学行为的关系。
1 材料与方法
1.1 标本来源及试剂 (1)结肠、直肠癌48例标本中，男25例，女23例;年龄34～78岁，平均53岁;高中分化腺癌31例，低分化腺癌17例;伴有淋巴结转移者27例，无淋巴结转移者21例;Dukes分期：A期8例，B期13例，C期19例，D期8例。所有患者术前、术中均未接受化疗及放疗;(2)主要试剂：鼠抗人Twist多克隆抗体(购自Santa Cruz公司)，MMP-2兔抗人多克隆抗体、S-P免疫组化试剂盒及DAB显色液(均购自北京中杉金桥生物技术有限公司)。
1.2 实验方法 所有标本均以10%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm厚连续切片。石蜡切片常规脱腊, PBS液冲洗。采用S-P法免疫组化法检测，染色步骤按试剂盒说明书进行。以PBS溶液代替一抗作空白对照。
1.3 结果判定 Twist蛋白主要表达于细胞质中，少数细胞核中也有表达，以细胞呈清晰的棕色或棕褐色为阳性，以细胞无棕褐色或与背景一致的极淡的棕色为阴性。MMP-2为细胞质内表达,肿瘤细胞胞质出现黄色、棕黄色、棕褐色颗粒状,染色明显高于背景为阳性。在高倍视野下随机选取10个视野，阳性细胞数<10% (-),阳性细胞数<25% (+),阳性细胞数25%～50%(++)，阳性细胞数>50%(+++)。
1.4 统计学方法 所有数据采用SPPS13.0进行统计学分析。计数资料采用χ2检验。Twist和MMP-2的相关性采用Spearman秩和检验，P<0.05示差异有统计学意义。
2 结 果
2.1 Twist、MMP-2的表达 (1)Twist蛋白在结直肠癌组织中的表达主要位于细胞质，少数细胞核中也有表达。48例癌组织中阳性表达23例(47.92%)，见图1~2;(2)MMP-2在结直肠癌组织中主要表达于癌细胞胞质,亦可见部分间质细胞如血管内皮细胞、纤维母细胞胞质表达,未见细胞核着色,在癌细胞胞质中表达着色存在浓淡不均现象。48例癌组织中阳性表达26例(54.17%)，见图3~4。
2.2 Twist、MMP-2的表达与结直肠癌生物学行为的关系 两者表达均与患者的病理大体类型、生长方式无关(P>0.05),而与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05)。
2.3 结直肠癌组织中Twist、MMP-2表达之间的相互关系 Twist的阳性表达随着MMP-2阳性表达的增加而相应提高，两者的表达呈正相关(P<0.05)。
3 讨 论
近年研究发现，Twist是上皮-间质 (epithelial-mesenchymal transition , EMT) 转化过程中的重要调控因子。参与一些上皮来源的肿瘤细胞发生EMT，并促进其侵袭和远处转移。在乳腺、食管、胃、结直肠、肺、前列腺、肾等恶性肿瘤中,都存在着EMT造成的E-Cadherin 表达下调。其介导的细胞-细胞黏附功能的削弱或丧失,肿瘤细胞因而容易脱离原发灶向周围组织侵袭，并为远处转移提供条件[1-2]。本实验中Twist的阳性表达与结直肠癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移密切相关，显示其参与了肿瘤的生长与侵袭转移。
恶性肿瘤发生浸润转移重要的步骤之一是肿瘤细胞对基质的降解，而基质金属蛋白酶类(MMPs)已被证实参与多种肿瘤的浸润转移[3]。MMP-2主要降解明胶和Ⅳ型胶原，在肿瘤细胞突破基底膜屏障而浸润转移中起重要作用。同样本研究中发现结直肠癌组织中MMP-2的表达与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关。部分间质细胞亦有表达，强度弱于癌细胞，提示肿瘤细胞可诱导间质细胞合成和分泌MMP-2。MMP-2不仅与结直肠癌的发生有关,且参与结直肠癌的侵袭和转移过程。Twist、MMP-2的表达呈显著正相关，说明在肿瘤细胞发生浸润转移中起了协同作用，尤其表现在黏附、降解过程。两者过度表达是预示结直肠癌进展的一个重要事件, 联合检测对其生物学行为、预后判断有重要意义。
【参考文献】
[1] Kang Y, Massague J. Epithelial-mesenchymal transitions：twist in development and metastasis[J].Cell, 2004，118(3)：277-279.
[2] 黄菊,程夏楷,杨彬,等. E2钙黏蛋白复合体及其对肿瘤细胞的作用[J].生命的化学,2005,25(3)：247-250.
[3] 杨锦建，张秋红，贾占奎，等.基质金属蛋白酶MMP-9、MMP-2 mRNA及基质金属蛋白酶抑制剂mRNA在人膀胱移行细胞癌中的表达及意义[J].中华实验外科杂志，2006，23(4)：594-595.
