5—Fu对人胃癌细胞金属硫蛋白表达的影响
发表时间：2010-08-09 浏览次数：384次
作者：张晓丽 薄爱华 胡 瑾 蒋丽娜 作者单位：河北北方学院实验中心，河北 张家口 075000
【摘要】 目的：探讨5—Fu对人胃癌细胞的杀伤作用及对金属硫蛋白(MT)表达的影响。方法：利用人胃癌BGC—823细胞株在培养过程中加入5-Fu继续培养5h或10h收获，然后用HE和免疫组化染色，光镜下进行观察。结果：实验组BGC—823细胞变形，MT表达强度和位置有明显变化。结论：5—Fu作用5h对胃癌细胞有杀伤作用，对癌细胞形态和MT的表达均有明显影响。
【关键词】 5—氟尿嘧啶;胃癌细胞;金属硫蛋白;免疫组织化学
Effects of 5—Fiuorouracil on the Expression of
Metaliothionein in Gastric Carcinoma Cells of Patients
ZHANG Xiaoli, BO Aihua, HU Jin, et al
Hebei North University , Zhangjiakou,075000, Hebei China
【ABSTRACT】 Objective: To study the killing function of 5—fiuorouracil to patients gastric carcinoma cells and its effect on the expression of MT.Methods: As BGC—823 gastric carcinoma cells were cultured in CO2 training box, 5—Fiuorouracil was injectetd to be cultured continuously for 5h or 10h. Then patients gastric carcinoma cells were stained wih haematoxylineosin(HE) and dyed with immunohistochemical method which was observed under optical microscope.Results:BGC—823 cells were transformed in experimental group.The change of position and degree was obvious in expression of MT. Conclusion:After working 5 hours 5—Fiuorouracil has a significant killing function to gastric carcinoma cells ,obviously influence the appearance of carcinoma cells and the expression of MT.
【KEY WORDS】 5—fiuorouracil;Gastric carcinoma cells;Metaliothionein;Immunohistochemical
5—氟尿嘧啶(5—Fiuorouracil)是一种广泛应用于消化道肿瘤的化疗药物，其抗癌机制及对临床疗效的认识正逐步加深。金属硫蛋白(MT)具有多种生物功能，它不仅参与肿瘤的发生、发展，而且其过度表达与恶性肿瘤的耐药和预后有关[1,2]，目前关于5-Fu对MT表达的影响报道较少，我们利用细胞培养和SP免疫组化的技术观察了对人胃癌BGC-823细胞株MT表达的影响，从而为揭示癌细胞耐药机制提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料 5—Fu由上海旭东海普药业有限公司生产，BGC—823胃癌细胞株由北京肿瘤研究所提供。SP免疫组化试剂盒、鼠抗人MT蛋白单克隆抗体、DAB显色剂均由北京中山生物技术公司提供。
1.2 方法 将5×104/ml浓度的BCG—823胃癌细胞加到无菌96孔板中，放入CO2培养箱中培养4h，细胞贴壁爬片(盖玻片)，对照组不加5—Fu培养29h或34h。实验组加入5—Fu 15μl，然后继续培养5h或10h，取出贴壁细胞。4%多聚甲醛固定30min，然后用PBS液(pH7.2)冲洗，其中一玻片滴加MT抗体，室温过夜，常规SP法Ⅱ抗、Ⅲ抗分别37℃30min。DAB显色，脱水，透明树胶封片，阴性对照用PBS代替Ⅰ抗;阳性对照用已知胃癌阳性切片。
2 结果
2.1 HE染色：对照组BGC—823细胞呈梭形、多边形，细胞核呈圆形、紫兰色，边界清晰可见核仁，细胞质均匀，多呈弱嗜酸性。实验组BGC—823细胞长的胞质突起消失，菱形细胞减少，较多的细胞周边多呈毛刺状，胞质空泡增多;大部分细胞核与胞质边界稍模糊;染色较浅，核仁较清晰，少部分细胞核呈固缩状态，染色较深。
2.2 免疫组化对照组：MT阳性物质多分布于细胞核内，呈深棕黄色，胞质近核区着色稍深，细胞周边着色较浅。实验组：5h组MT阳性物质在胞核中表达比对照组弱，呈棕黄色，胞质中有较弱表达，呈浅黄色。10h组MT阳性物质在胞核中不表达，胞质中有微弱表达，呈浅黄色。
3 讨论
5—Fu为尿嘧啶类抗代谢药物，它在体内先转变为5—氟—2—脱氧尿嘧啶核苷酸，后者抑制胸腺嘧啶核苷酸合成酶，阻断脱氧尿嘧啶核苷酸转变为脱氧胸腺嘧啶核苷酸，从而抑制DNA的生物合成。此外，通过阻止尿嘧啶和乳清酸掺入RNA，达到抑制RNA合成的作用[3]。5—Fu为细胞周期特异性药物，主要抑制S期细胞，主要用于治疗消化道肿瘤，亦常用于治疗乳腺癌、卵巢癌、肺癌、宫颈癌、膀胱癌及皮肤癌等。
本实验表明5—Fu使BGC—823细胞突起减少，细胞质中空泡增多，少部分细胞核固缩，主要是5-Fu使胃癌细胞胞质内细胞器水肿、变形等损伤所致。
MT是一种广泛存在于细菌、真菌、植物和真核生物中的高度保守的细胞内蛋白质，具有调节金属离子代谢、重金属解毒及清除自由基抗氧化等功能。MT与肿瘤的发展也有关系，可作为肿瘤检测的标志[4]。研究者发现，凡能诱导MT的因素(如白细胞介素Ⅰ、金属盐化合物、地塞米松等)均能使肿瘤细胞对亲电性抗癌药物产生耐药性[5]。在细胞内MT主要存在于胞浆，有时也进入胞核。实验中发现，MT在G1晚期/S早期定位于胞核，在M期末重新定位到胞浆，MT的这种转位有赖于丝裂素蛋白激酶和磷脂酰肌醇—3激酶的活性。本实验中发现5—Fu作用5h后，MT仍有阳性表达，其表达含量比对照组稍减弱，但作用10h后，与对照组比较，其表达能力大幅下降，因5—Fu主要抑制S期细胞，当细胞处于S期时，MT定位于胞核内，故5-Fu使BGC—823细胞核中MT表达降低。
【参考文献】
1 薄爱华，杨邢泽.金属硫蛋白在消化管组织中的表达及意义[J].肿瘤防治杂志，2004，11(5)：473475
2 乌新林，李晓洁.金属硫蛋白(MT)表达水平与乳腺癌的预后[J].中国肿瘤与康复，2002，9(6)：2526
3 何强芳,李国明.5—氟尿嘧啶壳聚糖微球的制备及其释药性能[J].应用化学，2004，21(2)：192195
4 张国徽，姬宏宇.耐药标志物TopoⅡ和MT在宫颈鳞癌中的表达及意义[J].陕西医学杂志，2005，34(6)：697699
5 Dziegiel P. Epression of metallothioneins in tumor cells[J]. Pol J Pathol,2004,55(1):3
