乳腺癌原代细胞培养及化疗药敏的研究

　　作者：赵秀芳 王金科 张晓丽 薄爱华 作者单位：(1.河北北方学院附属第一医院病理科，河北 张家口 075000;2.河北北方学院附属第一医院肿瘤科，河北 张家口 075000;3.河北北方学院实验中心，河北 张家口 075000)

　　【摘要】 目的：通过对乳腺癌原代细胞培养，检测化疗药物对癌细胞的抑制率，探讨乳腺癌不同组织学类型、年龄及淋巴结转移情况对化疗药物的敏感性。方法：收集109例手术切除新鲜乳腺癌标本，进行原代细胞培养，采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测癌细胞对三组抗癌药物的敏感性。结果：乳腺癌的敏感率由高到低依次为CAF(33.0%)、TA(31.2%)和CMF(26.6%)。无论年龄、组织学类型及是否有淋巴结转移各组间比较其敏感性均无显著差异(P>0.05)。结论：1.MTT法对乳腺癌治疗时选择化疗药物具有重要价值;2.乳腺癌细胞对CAF、TA、CMF敏感。

　　【关键词】 乳腺癌;MTT法;化疗药物;敏感率

　　Study on the Primary Culture and Chemotherapeutic

　　Drug Sensitivity of Breast Cancer Cells

　　ZHAO Xiufang，WANG Jinke， ZHANG Xiaoli， et al

　　Department of Pathology,The First Affiliated Hospital，Hebei North University,Zhangjiakou, 075000，Hebei，China

　　【ABSTRACT】 Objective： To investigate the chemosensititivity of three vinds chemotherapeutic drug groups on different the histologic types, age and lymph node metastasis status of breast carcinoma by the primary culture of breast cancer cell.Methods: Fresh samples from 109 patients with breast cancer were obtained during operation. The breast cancer cells were cultured in primary to test the 3 groups drugs sensitivity by MTT method.Results:The sensitivity rates of the breast cancer were (from high to low ) CAF(33.0%), TA(31.2%) and CMF(26.6%).There was no significant difference in sensitivity(P>0.05) among the age groups, the histologic type groups and the lymph node metastasis groups.Conclusion:To choose chemotherapeutic drugs by MTT assay has important significance in treating breast cancer. The breast cancer cells are sensitive to CAF,TA and CMF, but no significance.

　　【KEY WORDS】 Breast cancer;MTT method; Chemotherapy Drug; Sensitivity

　　乳腺癌化疗是多学科综合治疗的重要方法之一，尤其是浸润性癌在手术前化疗能缩小原发灶，控制癌组织转移，降低复发率，术后化疗可以改善生活质量，提高生存率[1]，因此如何提高化疗的疗效及降低不良反应成为当前医学界关注的热点之一。我们采用MTT法检测了109例乳腺癌原代细胞对临床常用的三组联合化疗方案的敏感性，现总结报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 一般资料 109例乳腺癌均为女性患者，选自我院2004.10～2005.12月临床术中切除送检新鲜癌组织，并均经病理形态学和免疫组织化学证实;术前均无使用抗癌药物史;年龄24～72岁，平均年龄49.5岁，其中<40岁19人，41～50岁42人，>51岁48人。病理组织学分类：浸润性导管癌79例，浸润性小叶癌17例，髓样癌13例。109例中伴有淋巴结转移64例，不伴淋巴结转移45例。

　　1.2 抗癌药物及试剂 选择临床常用的三组联合化疗方案，分别为CAF：环鳞酰胺(CTX)+阿霉素(ADM)+5氟尿嘧啶(5FU);CMF：环鳞酰胺(CTX)+氨甲喋呤(MTX)+5氟尿嘧啶(5FU);TA：紫杉醇(T)+阿霉素(ADM)。四甲基偶氮唑盐(methylthiazoly tetrazclium MTT)为美国Sigma公司产品，用于鉴别乳腺浸润性导管癌和小叶癌的免疫组化试剂盒和DAB显色剂由北京中山生物技术公司提供。

　　1.3 MTT法及判定标准 将新鲜乳腺癌组织在无菌条件下快速置于培养液并接种于96孔培养板中，分别加入三组化疗药物，另设对照组，培养48h后加入MTT试剂，4h后用酶标仪测各孔的光密度(Optical Density，OD)值。计算出对癌细胞的抑制率(inhibition rate，IR)，公式：IR=(1- 加药孔OD值 对照孔OD值)×100%，评价标准：IR≥30%为敏感，IR≤30%为不敏感。

　　1.4 本组资料经SPSS 13.0统计软件处理，采用χ2检验。

　　2 结果

　　检测109例患者乳腺癌细胞对三组化疗药物的敏感性。

　　2.1 乳腺癌细胞分别经CAF、TA、CMF化疗药物处理后经MTT法测得吸光度(见表1)。表1 109例乳腺癌原代细胞培养与药敏检测结果注：各组间比较差异无显著性，P均>0.05 表1中提示109例患者乳腺癌细胞对三组不同化疗方案敏感性依次为CAF>TA>CMF，以CAF敏感率最高。

　　2.2 乳腺癌病理组织学分型与抗癌药物敏感性的关系(见表2)。表2 乳腺癌病理组织学类型与抗癌药物敏感性分析 注：各组间比较差异无显著性(P>0.05)表2中列举三种类型乳腺癌，以浸润性导管癌最多占72.5%(79/109);浸润性小叶癌次之占21.5%(17/109);髓样癌最少占11.9%(13/109)。对三组化疗药物的敏感性与不同病理组织学类型间无明显内在联系。

　　2.3 药物敏感性与不同年龄组及是否伴有淋巴结转移的关系(见表3)。 将109例乳腺癌患者按年龄分为三组，并比较其药敏情况。表3 各年龄组、转移情况与总体药物敏感率的关系 注：三组化疗方案总体敏感状况与各年龄组及有无淋巴结转移组间比较差异无显著性(P>0.05)

　　3 讨论

　　乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，且发病率呈逐年上升趋势[1]。目前，乳腺癌临床治疗仍是以手术为主的综合治疗，而辅助化疗又是多学科综合治疗的一个重要组成部分，但乳腺癌不同个体对抗癌药物敏感性的差异及其所具有的天然耐药性，常导致化疗失败[2]。为提高化疗疗效，国内外学者进行了多项体外药敏实验研究[3，4]。尤其是近年来人们选择了快速、便捷、经济的MTT法，通过对体外癌细胞原代培养进行肿瘤个体化疗药敏检测[5，6]。本组109例乳腺癌采用MTT法检测了三组临床常用联合化疗方案的敏感性。检出的敏感率不同，其中CAF最高，提示CAF方案的抗癌效果可能优于其他两组化疗方案，但组间敏感性比较并无显著差异(P>0.05)。有文献报道，乳腺癌联合化疗最佳方案当推CMF和CAF[7]，作者的研究结果与其有相似之处，因此我们认为CAF可为乳腺癌的一线治疗方案。本组资料分析结果表明：①三组化疗方案的敏感率相接近，证实了CAF、TA和CMF在治疗中均有较好的抑制癌细胞的作用，同时体现出各自的重要性，每组化疗方案能充分发挥协同作用，避免拮抗作用，提示乳腺癌患者化疗时应选择联合用药方案为佳。②不同乳腺癌病理组织学类型药敏检测发现，同一类型中及不同类型的三组化疗药敏率不同，但经χ2检验均无差异(P>0.05)，③不同年龄段及是否伴随淋巴结癌转移检出的敏感率与总体敏感率分析比较，无统计学意义(P>0.05)。

　　综上所述，化疗前体外癌细胞原代培养及药敏实验可前瞻性的指导临床用药，且能发现耐药病例。临床医师常用的三组联合用药方案具有正确性，其远期疗效有待随访研究。

　　【参考文献】

　　1 吴在德.外科学[M].第5版.北京：人民卫生出版社，2000.357361

　　2 Garces CA，Cance WG.Neoadjuvant chemotherapy of breat cancer[J].Am Surg,2004,70(7):565569

　　3 徐静，吴峰综述，梅酪惠审校.应用MTT法检测肿瘤化疗药物的敏感性[J].华夏医学，2005，18(1)：140143

　　4 Yamaue H, Tanimura H, Tsunoda T, et al.Chemosensitivity,testing with highly purified fresh human tumor cells with the MTT colorimetric assay[J].Eur J Cancer, 1991,27:12581263

　　5 魏寿江，王崇树，赵国刚,等.乳腺癌原代细胞培养及体外药敏实验的应用研究[J].四川肿瘤防治，2003，16(3)：132134

　　6 Xu JM, Song ST, Tang ZM, et al. Predictive chemotherpy of advanced breast cancer directed by MTT assay in vitro [J].Breast cancer Res Treat,1999,53(1):77

　　7 汪波，张江雨，黄岩,等.改良MTT药敏分析在乳腺癌个体化疗中的意义[J].实用癌症杂志，2004，19(2)：184185