LPT在检测胸腹水中恶性肿瘤细胞的应用价值
发表时间：2010-07-23 浏览次数：455次
作者：傅燕萍 王诚 王伟 王宁 作者单位：312000 浙江省绍兴市人民医院病理科
【关键词】 胸腹 恶性肿瘤细胞
胸腹水细胞学检查是一项重要的肿瘤诊断方法，传统上系采用直接涂片检查技术，但因细胞堆积、分布不均和含红细胞多等原因，恶性细胞检出率低。作为液基薄层细胞制片技术之一的利普制片系统(liqui-prep test,LPT),其操作方法简便，无需特殊仪器设备，尤其对细胞团块的处理优于其他液基薄层细胞制片技术，能提高胸、腹水中肿瘤细胞的检出率。本文通过LPT与传统涂片方法的比较，探讨LPT在检测胸腹水中的恶性肿瘤细胞的应用价值。
1 材料与方法
1.1 标本来源
收集本院病理科2006年1月至2007年11间临床资料完整的胸腹水标本548例(其中胸水415例，腹水133例)，男318例，女230例，年龄21～78岁，中位年龄51岁。标本采集后立即一分 二，随机归入实验组(A组)和对照组(B组)，实验组用液基细胞学涂片，对照组用传统细胞学涂片。
1.2 方法
A组采用利普制片方法，标本采样后放入50ml专用保存瓶内，在漩锅混匀器上混匀20s后，将混匀的标本缓慢倒入相应的专用离心管中，在LDZ 5-2型高速离心机上离心(2500转/min×10min)，离心后迅速倒置离心管弃上清液，保留管底有用细胞，再加入大约细胞体积3倍的细胞基液，在洲涡混匀器上混匀10s后，迅速用移液器吸取50μl在脱脂载玻片涂片(涂片面积为直径1.5cm)，涂片干燥后用95%酒精固定30min，HE染色，中性树胶封片。B组采用传统细胞学制片方法，采用推片法，标本采样后放入离心管内，在LDZ5-2型高速离心机上离心(2500转/min×10min)，离心后迅速倒置离心管弃上清液，保留管底沉淀的有用细胞，用移液器吸取50μl滴在脱脂载玻片上，用逆向推片法涂片，涂片后立即用95%酒精固定30min，HE染色，中性树胶封片。细胞学诊断：由两位细胞学医生采取双盲法阅片，从细胞数量、细胞形态及背景情况比较实验组与对照组的制片质量。细胞计数=细胞个数/HPE×10HPF，<300个的细胞为不满意涂片，≥300个细胞为满意涂片。细胞形态观察指标为分布均匀，形态舒展，无皱缩及重叠，细胞核形态完整。背景无黏液及其他杂质、无红细胞和白细胞为背景清晰。细胞学诊断标准采用四级分类法：未找到癌细胞，找到异型细胞，查见可疑恶性肿瘤细胞，查见恶性肿瘤细胞。
1.3 统计学方法
采用SPSS 10.0统计学软件进行t检验、卡方检验、配对卡方检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 制片质量
收集的548例胸腹水标中，A组细胞数量≥300个500例(500/548，91.2%)，B组95例(95/548，17.3%)，差异有统计学意义(P<0.01);细胞形态完整A组479例(479/548，87.4%)，B组72例(72/548，13.1%)，差异有统计学意义(P<0.01);背景清晰A组509例(509/548，92.9%)，B组69例(69/548，12.6%)，差异有统计学意义(P<0.01)。LPT在涂片质量上明显优于传统涂片。
2.2 恶性肿瘤细胞的检出率
548例标本中，A组未找到癌细胞431例(78.6%)，找到异型细胞11例(2.0%)，查见可疑恶性肿瘤细胞9例(1.7%)，查见恶性肿瘤细胞97例(17.7%);B组未找到癌细胞428例(78.1%)，找到异型细胞46例(8.4%)，查见可疑恶性肿瘤细胞21例(3.8%)，查见恶性肿瘤细胞53例(9.7%)。B组诊断的46例异型细胞中，通过LPT方法诊断为恶性肿瘤细胞30例，可疑恶性肿瘤细胞2例，异型细胞11例，未找到癌细胞3例;B组诊断的21例可疑恶性肿瘤细胞中，通过LPT方法诊断为恶性肿瘤细胞14例，可疑恶性肿瘤细胞7例，异型细胞0例，未找到癌细胞0例。A组恶性肿瘤细胞检出率高于B组(P<0.05)。
3 讨论
胸腹水标本的传统细胞学涂片由于采用手工制片，细胞层厚薄不均匀，常导致细胞多层重叠，而且易受推片的机械损伤，细胞结构不清，形态发生改变，客观上导致诊断困难。同时因传统方法涂片面积不大，标本内常混杂有大量红细胞和炎症细胞，容易掩盖阳性肿瘤细胞，存在一定的局限性和不确定因素，容易出现假阳性或假阴性诊断结果。
近年来，液基细胞学技术正被广泛地应用于宫颈癌的筛查，该技术的应用被证明可提高宫颈上皮低度病变和高度病变的检出率[1]。目前国内外最常用的液基细胞学技术是TCT和LCT，主要应用于妇科宫颈病变的筛选，也有应用于非妇科标本的研究报道[2～4]。采用这两项技术进行非妇科标本检查的原理简单，主要是利用“膜式过滤法”分离出被采集标本中的杂质，再通过压片技术将细胞制作在玻片上，从而形成清晰的细胞涂片。但由于方法原理的限制，这类技术无法对送检标本进行全面处理，导致被检标本的信息丢失是其最大的缺陷。
LPT技术是2004年美国LGM公司研制的一种新的液基细胞检测技术，其基因原理是利用细胞粘附包裹技术，包含细胞及细胞微组织，在琼脂/酒精基底的乙烯聚合物溶液下，微粒被自然混合为均匀分布的混合物，形成不可溶解的基膜，粘附于涂片上形成单层、保护完美细胞形态的涂片。本文将LPT技术涂片与传统细胞涂片同时应用于胸腹水标本的细胞学检查，显示二者在制片质量上存在差异。LPT涂片在细胞学数量、细胞形态及背景清晰度上均明显优于传统涂片。在肿瘤细胞的阳性检出率上，传统涂片方法诊断的46层异型细胞中，通过LPT方法诊断恶性肿瘤30例、可疑恶性肿瘤2例，传统涂片方法诊断21例可疑恶性肿瘤中，通过LPT方法诊断为恶性肿瘤14例，说明胸腹水用LPT技术涂片检测可明显提高恶性肿瘤的检出率。究其原因，与LPT涂片细胞数量适中、细胞形态完整、背景清晰有关。与传统涂片相比，LPT制片效果的最大优点在于此项技术获得的细胞数量多、核染色质着色鲜明、对比立体感强、成团细胞中的单个细胞界限分明。用LPT法一次收集的标本尚可多次制作出相同效果的超薄涂片，用于特殊染色或免疫组化染色，为细胞学诊断的可靠性提供了进一步的保障。LPT技术在变革胸腹水脱落细胞学的制作方法，避免恶性肿瘤的漏、误诊上具有不容忽视的价值。
【参考文献】
1 王慧卿，陈雅飞，杨伟英. 液基细胞薄层涂片与宫颈涂片对早期子宫颈癌筛选临床应用的价值. 安徽医药，2006，1(2)：127.
2 张培谊，皱赛英，王玉兰，等. TCT技术在胸腹水恶性肿瘤中应用. 临床与实验病理学杂志，2005，20(3)：357～358.
3 吴慰霖，季洪爱，王靖华，等. 液基细胞学在肺肿瘤检查中的探讨. 医学研究生学报，2005，18(3)：283～285.
4 李建华，付志民，吴广平，等. 液基细胞学检测对非妇科细胞标本肿瘤诊断的意义. 中国医科大学学报，2004，33(5)：414～415.
