亲环素A蛋白在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

　　作者：严京哲 刘慧峰 王伟明 池沼丞 作者单位：吉林省肿瘤医院腹部肿瘤二科, 吉林 长春 130012

　　【关键词】 胰腺癌;亲环素A;淋巴结转移;免疫组化

　　亲环素A(Cyclophilin A,CypA)是免疫抑制剂环孢素A(Cyclosporin A，CsA)在细胞内的作用靶点，具有肽基脯氨酸顺/反异构酶(Peptidylprolyl cistransisomerase, PPIase)活性。最近研究示Cyp A蛋白在非小细胞肺癌〔1〕、前列腺癌细胞 〔2〕、直肠癌〔3〕、喉癌〔4〕、食管癌〔5〕等肿瘤组织中高表达。另有研究报道CypA表达与子宫内膜癌预后密切相关〔6〕。胰腺癌起病隐匿，其术后5年生存率低于5%〔7〕。本研究拟探讨CypA蛋白在胰腺癌中的表达同肿瘤临床病理特征之间的关系。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料

　　34例胰腺癌标本来自本院病理科2002～2008年存档病理蜡块，均经病理证实：高分化腺癌15例，中分化腺癌12例，低分化腺癌7例。其中男20例，女14例。年龄31～76岁，中位年龄51.2岁，按1991年WHO年龄分段：青年组(44岁以下)6例;中年组(45～59岁)18例;老年组(60岁以上)10例。有淋巴结转移的11例，无淋巴结转移23例。收集了因胆管下段癌行胰十二指肠切除术而切除的正常胰腺组织10例，男6例，女4例，年龄33～78岁，中位年龄53.3岁。全部标本经10%甲醛液固定后，普通石蜡包埋，4 μm连续切片。所有病例术前均未行放、化疗。

　　1.2 方法

　　兔抗CypA多克隆抗体ab41684 (Abcom, US)，ABC免疫组化染色试剂盒(Vectastain ABC kit, Vector Labs)、DAB显色试剂盒(Vector Labs)。操作步骤按试剂盒说明书。用随试剂赠送的阳性片作为阳性对照，以PBS替代一抗作为阴性对照。常规苏木素轻度复染。

　　1.3 结果判定

　　以细胞有浅黄色、棕色、棕褐色颗粒为阳性细胞;阳性染色细胞条件为细胞结构清晰、阳性颗粒定位好、着色与背景对比清晰。根据染色的强度和范围进行结果评定，用半定量积分法将染色强度分为0～3分：0(未染色)、1(弱)、2(中度)、3(强)：根据染色细胞占计数总细胞的比例将染色范围分为0～3分：0(0%)，1(<25%)，2(25%～50%)，3(>50%)，染色强度和范围得分之和作为CypA染色的最后得分。0分为(-)，1～2分为(+)，3～4分为()，5～6分为()。将评分值小于或等于2分定为阴性病例，大于2分定为阳性病例。

　　1.4 统计学处理

　　采用SPSS13.0软件包，CypA评分及与各临床指标的关系两组间比较采用方差齐性检验(t检验)，三组或三组以上两两比较采用方差分析(q检验)。

　　2 结果

　　2.1 CypA蛋白表达免疫组织化学检测结果

　　CypA在胰腺癌组织中表达较强(图1)。阳性染色主要定位于癌细胞胞质，呈棕黄色或棕褐色，染色均匀一致。正常胰腺组织也可见到CypA阳性表达，但颜色普遍较浅，呈浅黄色。

　　2.2 CypA在胰腺癌及正常胰腺组织中的表达及与各临床指标的关系

　　CypA在胰腺癌组织中表达阳性率为76.47% (26/34)及评分值明显高于正常组织〔20.00%(2/10)〕(P<0.05)。在胰腺癌各病理分级组之间差别不显著(P>0.05)。淋巴结转移组的CypA表达明显高于淋巴结未转移组 (P<0.05)(表1)。表1 CypA的表达与各临床指标的关系(略)

　　3 讨 论

　　CypA是一种能激活内皮细胞的前炎性因子,还可作为一种氧化应激诱导分泌的生长因子,并且参与细胞内胆固醇转运复合物形成。从以往研究结果示，恶性肿瘤在生长过程中,组织增生过快必然会造成局部组织缺氧和供能与耗能之间的不平衡，缺氧诱导因子1α(HIF1α)是调节肿瘤细胞对缺氧等微环境发生适应性反应的主要核转录因子。缺氧环境诱导人类癌细胞的HIF1α表达上调, HIF1α的上调可在转录水平促进 CypA mRNA的生成, 使CypA蛋白表达增多;CypA蛋白具有减少活性氧产生的作用,其表达水平越高减少活性氧生成的能力愈强、降低活性氧对肿瘤细胞杀伤的作用也越强〔8〕。结合以往研究及本次研究结果提示CypA蛋白过度表达可提高肿瘤细胞对抗缺氧等不利应激的能力,降低肿瘤细胞凋亡,起到促进肿瘤生长发展的作用。

　　运用表达和比较蛋白质组学研究策略，通过比较正常和胰腺癌组织(细胞)中蛋白质表达的差异，业已发现了一批可能与胰腺癌相关的特异性蛋白质。开展胰腺癌相关蛋白质连锁群及其功能网络的研究，将对揭示胰腺癌发病机制，寻找胰腺癌诊断的分子标记，以及治疗和药物开发的靶标都具有非常重要的意义。本实验说明胰腺癌细胞含有大量的CypA，其可能通过促进癌肿血管形成促进胰腺癌的发生、发展。此外，CypA与肿瘤分化程度和分期无明显相关，但与淋巴结转移密切相关，提示CypA可能通过某种机制导致淋巴结转移的发生。CypA对胰腺癌的浸润和转移的机制有待进一步研究。

　　总之，CypA在胰腺癌中的高表达在胰腺癌的生长、浸润和转移中起重要作用。胰腺癌组织中CypA表达明显高于正常组织，说明CypA可能与胰腺癌的发生发展相关。有淋巴结转移的胰腺癌组织中CypA的表达明显高于无淋巴结转移的，说明CypA可能参与了胰腺癌的转移。

　　【参考文献】

　　1 Howard BA, Zheng Z, Campa MJ, et al. Translating biomarkers into clinical practice：prognostic implications of cyclophilin A and macrophage migratory inhibitory factor identified from protein expression profiles in nonsmall cell lung cancer〔J〕. Lung Cancer, 2004;46:31323.

　　2 Choi KJ, Piao YJ, Lim MJ, et al. Overexpressed cyclophilin A in cancer cells renders resistance to hypoxia and cisplatininduced cell death〔J〕. Cancer Res, 2007;67：365462.

　　3 Melle C, Osterloh D, Ernst G,et al. Identification of proteins from colorectal cancer tissue by twodimensional gel electrophoresis and SELDI mass spectrometry〔J〕. Int J Mol Med, 2005;16：117.

　　4 Zhou JR, Fu ZX, Wei LZ,et al. Identification of tumorassociated proteins in laryngeal squamous cell carcinoma by proteomics〔J〕. Zhonghua Er Bi Yan Hou Tou Jing Wai Ke Za Zhi, 2007;42：9348.

　　5 Qi YJ, He QY, Ma YF,et al. Proteomic identification of malignant transformationrelated proteins in esophageal squamous cell carcinoma〔J〕. J Cell Biochem, 2008;104：162535.

　　6 Li Z, Zhao X, Bai S, et al. Proteomics identification of cyclophilin a as a potential prognostic factor and therapeutic target in endometrial carcinoma〔J〕. Mol Cell Proteomics, 2008;7：181023.

　　7 Trede M, Schwall G, Saeger HD. Survival after pancreatoduodenectomy. 118 consecutive resections without an operative mortality〔J〕. Ann Surg,1990;211：44758.

　　8 Choi KJ,Piao YJ,Lim MJ,et al.Overexpressed cyclophilin A in cancer cells renders resistance to hypoxiaand cisplatininduced cell death〔J〕. Cancer Res,2007;67:36546.