HSP70和MGMT在乳腺肿瘤中的表达和意义

　　作者：吴荣薇 薄爱华 王发亮 芦广萍 作者单位：河北北方学院临床医学本科2006级8班，河北 张家口 075000

　　【摘要】 目的：探讨乳腺肿瘤组织中热休克蛋白HSP70和DNA修复酶O6甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6methyguanineDNA methytransferase,MGMT)的表达及临床意义。方法：采用免疫组织化学SABC法检测65例乳腺肿瘤组织中HSP70和MGMT的表达情况。结果：乳腺肿瘤中HSP70的阳性率为80.00%(52/65)，MGMT的阳性率为60.00%(39/65)，二者呈中度相关性(r=0.46)。其中，有淋巴结转移组的阳性率高于无转移组(P<0.05)。结论：HSP70和MGMT的表达率与淋巴结转移情况有关。检测HSP70与MGMT对乳腺肿瘤预后和化疗方案的选择有指导意义。

　　【关键词】 乳腺肿瘤;HSP70热休克蛋白质类;免疫组织化学

　　Expression and Significance of HSP70 and MGMT in Breast Neoplasms

　　WU Rongwei，BO Aihua　，WANG Faliang，et al

　　Hebei North University,Zhangjiakou,075000,Hebei,China

　　【ABSTRACT】 Objective:To investigate the expression and clinical significance of HSP70 and MGMT in human breast cancer.Methods:The expression of HSP70 and MGMT in the 65 cases with breast cancer was examined by SABC immunohistochemistry.Results:The positive rate of HSP70 was 80.00%(52/65)and the positive rate of MGMT was 60.00%(39/65)in the human breast cancer,and the relationship between HSP70 and MGMT was in the middle degree(r=0.46).The positive rates of HSP70 and MGMT in lymph node metastasis group were higher than that in group without lymph node metastasis(P<0.05).Conclusion:The expressions of HSP70 and MGMT are related with lymph node metastasis,and analyzing them clinically has an important guiding significance in the chemotherapy strategy.

　　【KEY WORDS】 Breast Neoplasms, HSP70 HeatShock Proteins,Immunohistochemistry

　　近年来，乳腺癌的发病率逐年升高，已成为损害女性健康的主要恶性肿瘤之一。目前，主要以手术切除为主，化疗或放疗为辅。HSP70和MGMT在肿瘤治疗过程中有较大的临床意义，本文通过检测65例乳腺癌患者中HSP70和MGMT的表达情况及相关性，旨在为临床治疗及预后提供有效的指导方案。

　　1 材料与方法

　　1.1 一般资料 河北北方学院附属第一医院2004.7～2007.6月手术切除乳腺癌标本65例，均为女性，年龄为21～72岁，平均年龄为49岁，中位年龄为50岁;左乳36例，右乳29例;浸润性导管癌40例，浸润性小叶癌10例(合称浸润性乳腺癌共计50例)，导管原位癌13例，小叶原位癌2例(合称非浸润性乳腺癌共计15例);有淋巴结转移者32例，无淋巴结转移者33例。

　　1.2 主要试剂 ①兔抗人HSP70多克隆抗体、兔抗人MGMT多克隆抗体及SABC免疫组织化学试剂盒均购自武汉博士德生物有限公司。②DAB显色试剂由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。

　　1.3 方法 常规免疫组织化学SABC方法。严格按照试剂盒说明书要求进行。每次实验均以公司提供的阳性切片作阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。

　　1.4 结果判断 HSP70和MGMT的阳性物质均呈棕黄色，分布于癌细胞胞质中，近胞膜处着色深。在光镜视野(×400)下，10个视野平均阳性细胞>10%为阳性病例，<10%为阴性病例。

　　1.5 统计学处理 采用χ2检验。以P<0.05为组间比较有显著性差异。相关性分析采用四格法，相关系数0.4≤r≤0.7为中度相关。

　　2 结果

　　HSP70和MGMT在乳腺癌中的阳性率分别80.00%(52/65)和60.00%(39/65),二者的表达与年龄、病理类型和是否有淋巴结转移的关系见表1，HSP70和MGMT的相关性见表2。2008年6月吴荣薇等：HSP70和MGMT在乳腺肿瘤中的表达和意义第3期2008年6月河北北方学院学报(医学版)第3期表1 HSP70和MGMT在乳腺癌中的表达与生物学特性的关系表2 HSP70和MGMT在乳腺癌中表达的相关性注：HSP70和MGMT呈中度正相关(χ2 =13.48,P<0.01，r=0.46)

　　3 讨论

　　3.1 热休克蛋白(HSP)在许多肿瘤中呈高表达[1]，它可以调节多种蛋白质的活性和功能，但又不参与靶细胞的组成。所以我们又将其称为“分子伴侣”或“伴侣蛋白”[2]。结合本研究结果显示乳腺癌中HSP70阳性率很高(80.00%)，可以推测HSP70与原癌基因、抑癌基因及其产物相互作用，可保护肿瘤细胞，维持其无限增生的能力。本研究还发现，有淋巴结转移组HSP70的阳性率为65.63%，明显高于无淋巴结转移组(33.33%)。有报告显示，在胃癌中HSP70的表达与转移和浸润深度有关[3]。这就提示我们，HSP70是癌细胞浸袭力较强的标志物之一。由于HSP70携带多种肿瘤抗原，将HSP抗原肽瘤苗用于免疫机体，抗瘤效果非常好[4]。Casey等[5]从鼠黑色素瘤中提取HSP70抗原肽，并将其接种到同系小鼠身上，发现该瘤苗对瘤细胞的攻击可产生较强的对抗作用。乳腺癌是HSP70高表达肿瘤，有望从中提取HSP抗原肽复合物，研制瘤苗用于乳腺癌的治疗。已有研究表明，肝癌术后应用HSP70抗原肽复合物疫苗能够明显提高病人免疫力，预防术后复发，可提高远期生存率[6]。

　　3.2 人的MGMT基因定位于10q26,编码的蛋白质由207个氨基酸组成，分子量为22KD。本实验中MGMT在乳腺癌中的阳性率为60.00%(39/65)，其阳性率与年龄及病理类型的相关性不明显，与是否有淋巴结转移呈显著相关(P<0.05)。据报告[7]，在胃肠癌、卵巢癌和睾丸癌中MGMT均有高表达。MGMT是种高效的DNA直接修复酶，可以保护细胞免受烷化剂损害。烷化剂主要作用于DNA鸟嘌呤G形成O6—mG，后者在DNA复制过程中与T配对，导致G∶C配对转换为A∶T配对，从而导致了肿瘤的发生。而MGMT能把DNA上O6—mG的甲基转换到自身半胱氨酸残基上，从而修复甲基化的DNA，而MGMT修复烷化剂类型的药物可使肿瘤细胞产生耐药。因此，阻断MGMT可明显增加烷化剂的疗效。由此可见，MGMT一方面能够保护正常组织免受烷化剂损伤以及二次癌症的发生，另一方面还能引起肿瘤组织对烷化剂的抗药性。因此，检测癌组织中MGMT的表达对选择化疗药物有指导意义。

　　3.3 经统计学处理，本实验中HSP70与MGMT相关系数为r=0.46,呈中度正相关，而且二者的表达情况均与是否有淋巴结转移有关。这就提示我们HSP70和MGMT均可作为肿瘤恶性程度的生物学指标。另外可推测，在HSP70高表达的组织中，MGMT的表达也可能增强，提示我们二者可能共同参与了对肿瘤细胞的保护作用，协同促进了乳腺癌的形成。

　　【参考文献】

　　1 Jones EL,Zhao MJ,Stevenson MA.The 70 kilodalton heat shock protein is an inhibitor of apoptosis in prostate cancer[J].Int J Hyperthermia,2004,20(8):835849

　　2 左东升，薄爱华，常宝,等.热休克蛋白70在人胃腺癌发展过程中的表达作用及意义[J].中国老年学杂志,2006，26(2)：166167

　　3 王小平，王巧侠，王军,等.人胃癌组织中热休克蛋白70和糖调节蛋白94的表达及其意义[J].现代肿瘤医学,2007，15(7)：963965

　　4 傅庆国，郭仁宣，姚振宇,等.肿瘤热休克蛋白70 多肽复合物诱导特异性细胞毒T淋巴细胞产生的实验研究[J].中华医学杂志，2000，80(4)：301303

　　5 Casey DG,Lysaght J,James T,et al.Heat shock protein derived from a nonautologous tumor can be used as an antitumor vaccine[J].Immunology,2003,110(7):105111

　　6 赵子粼，鄢莉，崔建东，等.热休克蛋白抗原肽复合物疫苗预防肝癌术后复发32例[J].第四军医大学学报,2005,26(22):20762078

　　7 Smith SB,Lind,GE,Skotheim RI,et al.Frequent promoter hypemethy lation the O6methyguanineDNA methytransferase(MGMT)gene intesticular Cancer[J].Oncogene,2002,21,(57):88788889