Smad7和TGFβ1在胃癌患者中的表达及意义
发表时间：2010-06-12 浏览次数：326次
作者：刘中英 作者单位：(辽宁医学院，辽宁 锦州 121400)
【摘要】 目的 探讨Smad7和TGFβ1在不同临床病理特征中胃癌的表达意义，以期为胃癌的发生发展提供实验基础。方法 以104例胃癌标本作为研究对象，50例正常胃黏膜组织作为对照，采用流式细胞术，分别检测Smad7和TGFβ1的表达及其在不同临床病理特征之间的关系。结果 胃癌中Smad7和TGFβ1的表达明显低于对照组，Smad7和TGFβ1的表达与胃癌分化程度、浸润深度及淋巴结转移密切相关，二者在胃癌中的表达呈正相关。结论 Smad7和TGFβ1在胃癌发生发展中具有重要协同作用，联合检测Smad7和TGFβ1的表达可能与判断预后有关。
【关键词】 胃癌;Smad7;TGFβ1;流式细胞术;预后
侵袭和转移是胃癌的重要特征，是导致患者致死性的重要原因。细胞信号转导的异常是多种疾病发生的分子基础，与肿瘤的发生发展有重要关系。肿瘤生长因子(TGF)β1作为一种多功能的细胞因子，其介导的信号通路与多种肿瘤的发生发展密切相关。本实验将应用流式细胞术半定量检测104例胃癌中Smad7和TGFβ1的表达情况，探讨二者在胃癌发生发展中的作用及关系。
1 材料与方法
1.1 标本采集 收集胃癌根治手术切除后冻存的新鲜标本104例，年龄为34～75岁，平均53.2岁，其中男性64例，女性40例。患者术前均未进行任何治疗。同时选取病理证实切端无癌的正常胃黏膜新鲜组织50例作为对照。
1.2 流式细胞术检测两种蛋白的表达 将冻存的新鲜标本取出，用70%酒精固定3 d后，将标本放在120目不锈钢网上，用眼科剪子将组织剪碎，用镊子轻搓组织，同时用生理盐水进行冲洗，直到组织搓完。收集混悬液，用铜网过滤去除块样组织，收集细胞悬液，离心3 min，制成1×106/ml单细胞悬液，取1 ml，加入一抗，室温孵育30 min，加入PBS 10 ml洗涤，弃上清，加入FITCIgG二抗100 μl，避光室温孵育30 min，加入PBS 10 ml离心，弃上清后，加入PBS 0.1 ml，经铜网过滤后用流式细胞仪进行检测〔1〕，并对数据进行分析。
1.3 结果判定方法 流式细胞术结果用荧光指数(FI)表示Smad7和TGFβ1表达的相对含量，即：FI=(胃癌中蛋白表达的平均荧光强度对照样品平均荧光强度)/( 正常对照样品平均荧光强度对照样品平均荧光强度)。
1.4 统计学方法 采用SAS6.12软件进行t检验，并进行相关性分析。
2 结 果
2.1 Smad7和TGFβ1在胃癌、正常胃黏膜组织的表达 Smad7和TGFβ1在胃癌中的表达量明显低于正常胃黏膜组织(P<0.001)。见表1。表1 Smad7和TGFβ1在胃癌、正常胃黏膜组织中的表达与正常胃黏膜组织比较：1)P<0.001
2.2 Smad7和TGFβ1的表达与胃癌临床病理特征的关系 由表2可见，Smad7和TGFβ1与胃癌的分化程度、浸润深度及淋巴结转移密切相关(P<0.05)。表2 胃癌中Smad7和TGFβ1的表达与临床病理特征的关
2.3 Smad7和TGFβ1表达的关系 Smad7和TGFβ1在胃癌组织中的表达呈正相关(r=0.43，P=0.0125)，而Smad7和TGFβ1在正常胃黏膜组织中的表达无明显相关性(P>0.05)。
3 讨 论
Smad蛋白是目前发现的TGFβ家族受体激酶的关键作用底物，广泛分布在果蝇及各种哺乳动物细胞中，其可分为三类：①受体激酶激活的Smad蛋白，作为TGFβ家族受体激酶的直接底物。②辅助型或共同介导的Smad，主要通过同第一类相连，参与到信号转导中。③抑制性或拮抗性Smad，通过阻断受体激活第一类Smad，抑制其他两类底物的信号转导〔2〕。Smad7是属于抑制性Smad，可以有效地与活化的TGFβRI相互作用，影响受体调节性Smad与TGFβR的结合，从而影响负性调节信号向核内的传递。Wang等认为Smad7在胰腺癌中低表达与肿瘤的进展有关〔3〕。TGFβ家族由结构、功能相关的多肽生长因子组成〔4〕，具有多种功能活性，如调节细胞生长、分化、凋亡、增殖、黏附、炎症等。TGFβ1是经双硫键联结的具有多种生理功能的多肽，是TGFβ的一种异构体，在多种疾病发生发展中具有重要的作用。TGFβ信号转导的受体和胞内信号转导分子Smad7等组成了一个肿瘤作用的通路，在此过程中Smad7起着瓶颈作用。
本次实验通过流式细胞术半定量检测胃癌中Smad7和TGFβ1的表达，结果显示胃癌中Smad7和TGFβ1的表达明显低于正常胃黏膜组织，提示Smad7和TGFβ1参与了胃癌的发生过程。同时Smad7和TGFβ1在表达量与胃癌的分化程度、浸润深度及淋巴结转移有关，提示Smad7和TGFβ1参与了胃癌的分化、浸润及转移。由于分化、浸润及转移与患者预后相关，因此，联合检测Smad7和TGFβ1的表达可能对判断患者的预后有重要价值，即Smad7和TGFβ1低表达者预后差。由于Smad7和TGFβ1在胃癌中的表达具有明显正相关，提示二者在胃癌中具有正向的协同作用。Smad7在TGFβ1诱导表达后，反过来直接与TGFβR结合形成稳定的复合物，并且具有与其他信息分子不同的负性调节作用，是一种潜在的原癌基因〔5〕。有观点认为Smads蛋白作为TGFβ的受体下游信号传导因子，建立起胞膜与胞核之间的信号传导通路〔6〕。Smad7表达水平决定TGFβ1的细胞效应，转染反义表达Smad7的载体可以增强细胞对TGFβ1的应答〔7〕。
总之，胃癌中Smad7和TGFβ1低表达，Smad7和TGFβ1在胃癌的发生发展中具有协同作用，联合检测二者的表达可能对判断预后有重要价值。
【参考文献】
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