埃兹蛋白和上皮型钙黏附素在食管鳞状细胞癌中的表达及其意义

　　作者：李艳，李 玉，徐光辉，郑义同 作者单位：连云港市第一人民医院肿瘤内科，江苏 连云港 222002

　　【摘要】 目的 探讨埃兹蛋白(Ezrin)和上皮型钙黏附素(E-cadherin)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达及与临床病理因素之间的关系。方法 应用免疫组化S-P法检测Ezrin和E-cadherin在45例ESCC组织和20例癌旁正常食管组织中的表达。结果 Ezrin和E-cadherin在食管鳞癌中的异常表达率分别为71.11%和77.78%，Ezrin和E-cadherin的异常表达与食管鳞癌的浸润深度、分化程度、TNM分期和淋巴结转移显著相关(P<0.05) 。Ezrin的表达升高和E-cadherin的表达缺失呈负相关(r=-0.997, P=0.048)。结论 Ezrin和E-cadherin的异常表达与ESCC的进展和淋巴结转移有关，可作为预测肿瘤预后的指标。

　　【关键词】 埃兹蛋白; 上皮型钙黏附素;食管鳞状细胞癌

　　Expression and significance of Ezrin and E-cadherin

　　in esophageal squamous cell carcinoma

　　LI Yan, LI Yu, XU Guanghui, ZHENG Yitong

　　(Department of Medical Oncology, The First Hospital of Lianyungang, Lianyungang, Jiangsu 222002, China)

　　Abstract: Objective To investigate the expression of Ezrin and E-cadherin in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC)and their relationship with the clinical and pathologic factors. Method Tissue specimens from 45 cases of ESCC and 20 cases of adjacent normal tissue were studied by S-P immunohistochemistry using monoclonal antibodies to Ezrin and E-cadherin. Results The rates of abnormal expresstion were 71.11% for Ezrin and 77.78% for E-cadherin in ESCC. The abnormal expresssion rates were highly related to the invasiveness, differentiation, TNM stages and lymphatic metastasis of the cancer. The high expression of Ezrin was negatively correlated with the low expression of E-cadherin(r=-0.997, P=0.048). Conclusion The abnormal expression of Ezrin and E-cadherin is closely associated with the development and metastasis of ESCC. Detection of Ezrin and E-cadherin proteins in ESCC might offer important prognostic information.

　　Key words： Ezrin; E-cadherin; esophageal squamous cell carcinoma

　　本研究用免疫组化方法检测了埃兹蛋白(Ezrin)和上皮型钙黏附素(E-cadherin)在食管鳞状细胞癌(鳞癌)中的表达，并分析其与食管鳞癌的恶性程度及转移的关系，为其诊断和预后判断提供新依据。

　　1 材料和方法

　　1.1 标本来源 45例食管鳞癌组织及20例癌旁正常食管上皮组织(距肿瘤边缘≥5 cm，不含异型增生区)取自连云港市第一人民医院胸外科2006年6月—2007年12月手术切除组织，患者中男31例，女14例，年龄39～76岁，平均65.9岁，中位年龄63岁。所有患者术前均未行放化疗。所有标本切片按组织学分组,Ⅰ级11例，Ⅱ级20例，Ⅲ级14例。根据浸润深度分3组：侵及黏膜及黏膜下层组6例，侵及肌层组21例，侵及全层组18例。有淋巴结转移者24例，无淋巴结转移者21例。TNM分期中Ⅰ期8例，Ⅱ期21例，Ⅲ期10例，Ⅳ期6例。所有标本经10%甲醛固定24 h，常规石蜡包埋，连续切片，厚度4 μm，分别作苏木精-伊红染色和免疫组化染色。

　　1.2 主要试剂 Ezrin鼠抗人单克隆抗体为Lab Vision公司产品，E-cadherin鼠抗人单克隆抗体为Santa Cruz公司产品，均购自福州迈新生物技术有限公司，即用型S-P试剂盒购自北京中山生物技术开发公司。

　　1.3 免疫组化染色 采用S-P法。石蜡切片常规脱腊至水后，按说明书步骤操作。DAB显色，苏木精复染细胞核，常规脱水、透明，封片。用已知阳性切片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。光镜观察。

　　1.4 结果判定 Ezrin沿细胞膜内侧线性分布，并在胞质呈棕色颗粒分布。E-cadherin主要在细胞膜上呈棕黄色线状分布。按染色强度和阳性表达细胞数，参考Mathew等[1]分级标准：-，无表达;+，<50%细胞阳性表达或染色较浅;++,≥50%阳性表达且深染。

　　1.5 统计学处理 采用SPSS 11.5统计软件进行χ2检验和Spearman相关检验。检验水准：α=0.05。

　　2 结 果

　　2.1 Ezrin和E-cadherin在食管鳞癌及癌旁正常食管组织中的表达 Ezrin在20例癌旁正常食管组织中的阳性表达率为25%，且染色主要分布于细胞膜，成线性均匀分布(图1);而其在45例食管鳞癌组织中的阳性表达率为71.11%，表现为胞质弥漫性强染色(图2)，两者比较差异有统计学意义(P<0.01)(表1)。E-cadherin阳性表达主要以胞膜为主，部分阳性细胞伴有胞质阳性，强度深浅不一，与正常组织相比，癌组织中表现为局灶性、不均匀分布。E-cadherin在20例癌旁正常食管组织中的表达减弱或缺失率为0(图3);而其在45例食管鳞癌组织中的表达减弱或缺失率为77.78%(图4)，两者比较差异有统计学意义(P<0.01)。 表1 Ezrin、E-cadherin在食管鳞癌和正常食管黏膜组织中的表达(略 )

　　2.2 食管鳞癌中Ezrin、E-cadherin的表达与临床病理因素的关系 根据患者的性别、年龄，肿瘤的浸润深度、癌细胞的分化程度、肿瘤的TNM分期以及有无淋巴结转移进行分组比较Ezrin和E-cadherin蛋白表达的差异。Ezrin蛋白的表达与患者的性别、年龄无关(P>0.05)，与肿瘤的浸润深度、分化程度、TNM分期及淋巴结转移有关(P<0.05)。E-cadherin蛋白的表达与患者的性别、年龄无关，而与肿瘤的浸润深度、TNM分期、分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05)(表2)。

　　2.3 CSCC组织中Ezrin表达和E-cadherin表达的关系 Ezrin在食管鳞癌组织中高表达，癌组织分化越差，阳性表达率越高;而E-cadherin在癌组织中的表达减弱或缺失，组织分化越差，缺失越明显。统计分析结果显示，Ezrin和E-cadherin两者之间呈负相关(r=-0.997, P=0.048)。表2 Ezrin、E-cadherin与临床病理指标的关系(略 )

　　3 讨 论

　　肿瘤细胞的浸润和转移是一个多阶段、多步骤、多因素综合作用的过程。其中癌细胞脱离原发灶是肿瘤发生浸润和转移的关键步骤和先决条件。肿瘤细胞要向外浸润和转移必须涉及细胞-细胞、细胞-细胞外基质之间的黏附和相互作用。E-cadherin是一种广泛分布于上皮细胞的钙依赖性糖蛋白，主要介导同质细胞间的黏附，并起细胞骨架作用,维持组织结构的完整性和上皮极性。E-cadherin介导的细胞黏附的缺失或降低在多数肿瘤侵袭转移发展过程中是重要的步骤, E-cadherin表达下降或缺失,细胞间的相互黏附力减弱,造成肿瘤细胞容易分散而向外浸润性生长,脱离原发灶而发生转移[2]。本研究中，E-cadherin在食管鳞癌组织中的表达与癌旁正常组织相比有明显的减弱或缺失，且E-cadherin的表达水平与肿瘤的浸润深度、分化程度及淋巴结转移密切相关，提示E-cadherin表达的减少和细胞间黏附作用的减弱促进了食管鳞癌的浸润与转移。

　　Ezrin蛋白是一种重要的膜细胞骨架交联蛋白，它是ERM(Ezrin-radixin-moesin)家族成员之一[3]。活化的Ezrin C端与肌动蛋白细胞骨架连接， N端约300个氨基酸残基形成的结构域与多种跨膜分子结合，如CD44、CD43、ICAM1、E-cadherin等。已证明Ezrin通过调节黏附分子和信号转导等途径参与细胞与细胞、细胞与基质之间的相互作用,在肿瘤发展、浸润和转移过程中起着重要作用[4]。研究发现Ezrin的高表达促进肿瘤的转移，与肿瘤预后不良有关[5]。本研究中，Ezrin在食管鳞癌组织中的表达率明显高于癌旁正常组织，并且其表达率与肿瘤的浸润深度、临床分期和淋巴结转移情况密切相关, 即随着食管鳞癌恶性程度和临床分期的增高,Ezrin的表达随之增加,这说明Ezrin可能参与了食管鳞癌发生和转移过程。

　　Ezrin在细胞-细胞、细胞-基质间的黏附中发挥着重要的作用，研究发现，Ezrin参与了能够调节细胞与细胞外基质相互黏附和连接的细胞复合体的形成，E-cadherin是这一复合体的重要组分。EzrinT567D是Ezrin的一个突变体，当检测Rho(小GTP结合蛋白)家族GTP酶Rac1的活性时，发现与表达野生型Ezrin的细胞相比较，Rac1在表达EzrinT567D的细胞中是处于活化状态的。Rac1的激活扰乱了E-cadherin在细胞膜上的定位，使E-cadherin聚积在细胞内，向细胞膜传递显著延迟，E-cadherin在细胞膜表达水平降低;在Rac1表达阴性的细胞株中结果则相反[6]。Orian-Rousseau等[7]研究也发现激活状态的Ezrin使E-cadherin在细胞内蓄积，导致细胞-细胞间接触的破坏，从而促进肿瘤的侵袭和转移。Hiscox等[8]用免疫共沉淀分析发现，E-cadherin和Ezrin共同存在于免疫共沉淀物中，提示Ezrin可能通过直接或间接的关系与E-cadherin复合体作用，参与细胞黏附和细胞侵袭。我们的研究结果发现Ezrin和E-cadherin的异常表达呈显著负相关，Ezrin的阳性表达愈明显，E-cadherin愈容易出现表达减弱或缺失。本研究结果显示Ezrin和E-cadherin的异常表达率与肿瘤的TNM分期密切相关，提示二者在促进食管鳞癌发生和转移的功能上可能存在一定的协同性,并可作为食管鳞癌恶性生物学行为的预测指标之一。

　　【参考文献】

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　　[7] Orian-Rousseau V, Chen L, Sleeman JP, et al. CD44 is required for two consecutive steps in HGF/ c-Met signaling [J].Genes Dev, 2002,16(23):3074-3086.

　　[8] Hiscox S, Jiang WG. Ezrin regulates cell-cell and cell-matrix adhesion, a possible role with E-cadherin/beta-catenin [J]. J Cell Sci, 1999,112(18):3081-3090.