ZAP-70在B细胞非霍奇金淋巴瘤中的表达及其意义

　　作者：赵静，黄小芳，杨开颜 作者单位：温州医学院附属第一医院 病理科，浙江 温州 325000

　　【摘要】 目的 ：探讨ZAP-70(70-kD zeta-associated protein，ZAP-70)在B细胞非霍奇金淋巴瘤(B Cell Non-Hodgkin’s Lymphoma，B-NHL)中的表达及其意义。方法：采用SP免疫组织化学方法检测60例不同类型B-NHL中ZAP-70，CD38蛋白的表达，利用Spearman’s等级相关检验方法分析2种蛋白表达的相关性。结果：60例B-NHL中，16例小B细胞淋巴瘤ZAP-70的表达比例最高，占75.0%，且ZAP-70的表达与CD38标记有明显相关性(P<0.01)。10例套细胞淋巴瘤中有2例(占20.0%)存在ZAP-70蛋白的表达，13例MALT(mucosa-associated lymphoid tissue，MALT)淋巴瘤中有2例(占15.3%)表达ZAP-70，5例Burkitt’s淋巴瘤中有1例(占20.0%)存在ZAP-70的表达，10例弥漫性大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma，DLBCL)和6例滤泡性淋巴瘤(follicular lymphoma，FL)均无此蛋白的表达。结论：ZAP-70蛋白主要表达在小B细胞淋巴瘤中，对小B细胞淋巴瘤的诊断及其与良性增生性病变的鉴别诊断有一定辅助意义，其他部分B-NHL中也存在ZAP-70蛋白的表达。

　　【关键词】 ZAP-70;B细胞非霍奇金淋巴瘤;小B细胞淋巴瘤

　　ZAP-70是一种70 kDa的酪胺酸激酶，在T和NK细胞的信号转导途径中发挥作用。随着各项分析技术的开展，发现ZAP-70的表达不再仅仅局限于T和NK细胞，更多的研究开始集中于B细胞中ZAP-70的表达及其意义。慢性B淋巴细胞性白血病(B-cell chronic lymphocytic leukemia，B-CLL)中存在ZAP-70的表达，并与免疫球蛋白重链可变区基因(immunoglobulin heavy-chain variable-region gene，IgVH)突变有明显相关性，已经作为一项独立的预后指标，具有一定的临床指导价值。而ZAP-70在其他成熟的B细胞淋巴瘤中的表达情况则少有报道，因此，在本研究中我们初步探讨B-NHL中ZAP-70蛋白的表达情况，其表达意义的研究有助于不同类型B-NHL的诊断和鉴别诊断，同时有助于进一步探讨ZAP-70蛋白的生物学特征。

　　1 材料和方法

　　1.1 研究对象

　　收集2000-2008年间温州医学院附属第一医院初步诊断为B-NHL的病例60例，其中男37例，女23例，年龄18～79岁，平均50岁。诊断采用WHO(2001)淋巴造血组织肿瘤分类标准。

　　1.2 方法

　　全部标本经中性福尔马林固定，常规石蜡包埋，常规HE染色进行形态学观察。免疫组织化学SP法进行免疫组化标记，ZAP-70购自NeoMarker公司，CD38购自上海DAKO公司。ZAP-70蛋白的表达以淋巴结慢性炎中的正常T细胞阳性染色作阳性对照(如图1所示)，以PBS取代一抗作阴性对照。具体步骤按试剂盒说明书进行。

　　1.3 结果判断标准

　　以胞核和(或)胞浆、胞膜呈黄或棕黄色为阳性细胞，ZAP-70，CD38的表达强度主要分为3级：①肿瘤细胞不着色，记为(-);②肿瘤细胞染色比对照细胞染色强度低(+);③肿瘤细胞染色与对照细胞染色相当(++)。

　　1.4 统计学处理方法

　　应用SPSS12.0 for Windows软件包，相关性用Spearman’s等级相关检验进行分析。

　　2 结果

　　2.1 ZAP-70蛋白在小B细胞淋巴瘤中的表达 ZAP-70在肿瘤细胞的胞浆和胞核中均有表达，阳性部位呈棕黄色(如图2所示)。在16例小B细胞淋巴瘤中，有12例(占75.0%)表达ZAP-70蛋白，阳性率最高。而且还发现ZAP-70的表达与CD38标记有明显相关性(如表1所示)，CD38+肿瘤性B细胞(如图3所示)更易表达ZAP-70蛋白。

　　2.2 ZAP-70蛋白在其他B-NHL中的表达 除小B细胞淋巴瘤外，其余44例B-NHL中，10例套细胞淋巴瘤中有2例(占20.0%)存在ZAP-70蛋白的表达，13例MALT淋巴瘤中2例(占15.3%)存在ZAP-70的表达，5例Burkitt’s淋巴瘤中1例(占20.0%)有ZAP-70的表达，10例DLBCL和6例滤泡性淋巴瘤(FL)中均无此蛋白的表达 (如图4、图5所示) 。

　　3 讨论

　　ZAP-70为syk酪氨酸蛋白激酶(protein ty-rosine kinase，PTK)成员之一，是参与T细胞受体(T cell receptor，TCR)信号转导途径的极其重要和特异的非受体型PTK[1]。在正常情况下B淋巴细胞中ZAP-70的表达水平非常低，而是另一种PTK(syk)通过B细胞抗原受体(B cell receptor，BCR)复合体起着与ZAP-70相似的作用。故ZAP-70在B细胞中表达水平的升高，可以作为B细胞疾病，特别是B-CLL的非常特异和敏感的指标[2]。

　　本实验16例小B细胞淋巴瘤中，有12例(占75.0%)表达ZAP-70蛋白，阳性率最高，由此表明ZAP-70对小B细胞淋巴瘤的诊断具有一定的意义。研究还发现ZAP-70的表达与CD38标记有明显相关性(P<0.01)，CD38+肿瘤性B细胞更易表达ZAP-70。

　　研究已经证实CD38的表达在B-CLL中也有一定的预后重要性，CD38的表达水平越高，患者的病程进展越快，预后越差[3]。故两者可共同作为评价小B细胞淋巴瘤的预后指标。

　　B-CLL中ZAP-70的表达引起更多研究者探讨各种B细胞中ZAP-70表达情况的兴趣。Schweighoffer 等[4]运用针对ZAP-70这种src激酶的特异性和敏感性抗体发现在大鼠原始B、前体B及成熟B细胞中均能检测到ZAP-70的表达，且目前已经报道部分正常B细胞中ZAP-70的表达及其发挥的作用[4-5]。这就增加了ZAP-70在不同发育阶段的B细胞淋巴瘤中表达的可能性。本研究发现10例套细胞淋巴瘤中有2例(占20.0%)存在ZAP-70蛋白的表达，13例MALT淋巴瘤中有2例(占15.3%)存在ZAP-70的表达，5例Burkitt’s淋巴瘤中1例(占20.0%)ZAP-70表达阳性，10例DLBCL和6例FL中均无此蛋白的表达。Carreras等[6]研究认为ZAP-70可在不同类型的B细胞淋巴增殖性疾病中有表达，但表达水平有明显的不同，29例Burkitt’s淋巴瘤中有9例(占31%)，7例前体B淋巴母细胞性淋巴瘤(B cell lympho-blastic lymphoma，B-LBL)中2例(占29%)存在ZAP-70的表达。Admirand等[7]也有相似的关于ZAP-70在B-LBL和Burkitt’s淋巴瘤中表达的报道，其中LBL中ZAP-70的高表达可能表明恶性肿瘤细胞声源于不成熟的前体B淋巴细胞，这与ZAP-70在B细胞发育早期阶段发挥重要作用的报道相一致[4]。除此之外，ZAP-70在套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma，MCL)[8]、结节性边缘区淋巴瘤(nodal-Marginal zone lymphoma，nodal-MZL)和DLBCL中均有较低比例的表达，而在FL、结节外和脾脏MZL以及霍奇金淋巴瘤(hodgkin lymphoma，HD)均无表达。我们的研究结果与国外的研究基本一致。可见ZAP-70在B细胞淋巴瘤中的表达不再局限于B-CLL。但目前对ZAP-70在这些B细胞肿瘤中表达的重要性还不清楚，是否在这些B细胞肿瘤中ZAP-70也像在B-CLL中发挥的作用一样，负责增强细胞信号传导途径中不同信号分子的酪胺酸磷酸化水平，从而促进疾病的进展，这一问题还有待于进一步增加样本进行分子生物学研究，以明确ZAP-70在这些B细胞淋巴瘤发生发展中可能发挥的机制。

　　关于B-CLL中ZAP-70的表达及其意义仍存在许多问题，至今还不清楚，这些问题包括是否B-CLL细胞在转化过程中异常表达ZAP-70，或者在特定的条件下正常B淋巴细胞表达ZAP-70而最终导致B-CLL中ZAP-70大量表达，以及IgVH基因突变状态与ZAP-70表达相关性的机制，其他各种类型成熟B细胞淋巴瘤中ZAP-70的作用机制及其意义。但相信随着分子生物学和分子遗传学的发展以及各项分析技术的进一步开展，这些问题将一一被解决，ZAP-70，syk等激酶在传统信号传导途径中的局限作用将被打破，随之而来的是我们对这些激酶的作用及其在临床治疗和预后评价方面的更多认识。

　　【参考文献】

　　[1]Brdicka T, Kadlecek TA, Roose JP,et al. Intramolecularregulatory switch in ZAP-70: analogy with receptor tyrosinekinases[J]. Mol Cell Biol,2005, 25(12):4924-4933.

　　[2]Chen L, Widhopf G, Huynh L, et al. Expression of ZAP-70is associated with increased B-cell receptor signaling inchronic lymphocytic leukemia[J]. Blood,2002, 100(13):4609-4614.

　　[3]Krober A, Seiler T, Benner A, et al. V(H) mutation status,CD38 expression level, genomic aberrations, and survival inchronic lymphocytic leukemia[J]. Blood,2002, 100(4):1410-1416.

　　[4]Schweighoffer E, Vanes L, Mathiot A, et al. Unexpectedrequirement for ZAP-70 in pre-B cell development and al-lelic exclusion[J]. Immunity,2003,18(4):523-533.

　　[5]Nolz JC, Tschumper RC, Pittner BT, et al. ZAP-70 is ex-pressed by a subset of normal human B-lymphocytes dis-playing an activated phenotype[J]. Leukemia,2005, 19(6):1018-1024.

　　[6]Carreras J, Villamor N, Colomo L, et al. Immunohistochemi-cal analysis of ZAP-70 expression in B-cell lymphoidneoplasms[J]. J Pathol,2005,205(4):507-513.

　　[7]Admirand JH, Rassidakis GZ, Abruzzo LV, et al. Immunohis-tochemical detection of ZAP-70 in 341 cases of non-Hodgkinand Hodgkin lymphoma[J]. Mod Pathol,2004, 17(8):954-961.

　　[8]Bano A, Amin H,Olatonade D, et al. ZAP-70 expression inmantle cell lymphomas[J]. Mod Pathol,2004,17(suppl 1):239A(abstract).