食管癌MGMT、survivin蛋白的表达及其临床意义

　　作者：况丽平 作者单位：515041 广东,汕头大学医学院病理教研室

　　【摘要】 目的 研究食管癌MGMT、survivin蛋白的表达及其临床意义。方法 应用免疫组化(EnVision二步法)检测56例食管鳞状细胞癌、20例腺样结构食管癌和9例小细胞癌组织中MGMT、survivin蛋白的表达，并分析其与临床病理诸因素之间的关系。结果 小细胞癌与鳞状细胞癌及腺样结构食管癌的MGMT蛋白表达比较均有显著性差异(P<0.01);低分化鳞癌MGMT蛋白阳性表达率为45.45%，低于高、中分化鳞癌的阳性率(84.44%，P<0.05)。食管鳞状细胞癌survivin阳性表达率明显高于腺样结构食管癌(P<0.05)。结论 MGMT、survivin蛋白表达与食管癌的组织学类型有密切关系，可作为食管癌预后判断的参考指标。

　　【关键词】 食管癌 MGMT survivin 免疫组化

　　6氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(O6methylguanine DNA methytransferase,MGMT)是一种高效的DNA直接修复酶,对保护细胞免受烷化剂损害,防止细胞癌变和死亡具有极为重要的作用。survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成员,在凋亡抑制和细胞周期中发挥作用。目前,国内外文献中对MGMT、survivin基因在食管癌中的表达报道甚少，两者在腺样结构食管癌组织的表达尚未见报道。本文应用免疫组织化学EnVision二步法，检测食管癌组织中MGMT、survivin的表达,并初步探讨其表达的临床意义。

　　1材料与方法

　　1.1 材料

　　收集我院病理教研室收检的食管癌手术切除标本85例，其中鳞状细胞癌56例(其中高分化24例，中分化21例，低分化11例)、腺样结构食管癌20例(其中腺癌2例、黏液表皮样癌10例、腺鳞癌8例)和9例小细胞癌。85例食管癌中，癌组织浸润粘膜下层1例，浸润肌层22例，余均浸润到外膜层;40例伴有区域淋巴结转移。

　　1.2方法

　　1.2.1试剂 MGMT鼠抗人单克隆抗体(工作浓

　　图1MGMT蛋白在食管鳞状细胞癌中阳性表达 (EnVision×200)

　　图2survivin蛋白在腺鳞癌中阳性表达 (EnVision×400)

　　度为1∶50)、survivin兔抗人抗血清(工作浓度为1∶100)均来自美国抗体诊断公司。

　　1.2.2免疫组织化学染色采用EnVision二步法进行免疫组化染色。染色步骤按说明书进行，采用微波抗原修复，一抗4℃过夜，DAB显色，苏木素复染。用已知阳性切片作阳性对照，PBS代替第一抗体作阴性对照。

　　1.3 结果判定

　　MGMT、survivin以细胞浆/细胞核出现棕黄色颗粒为阳性。按阳性细胞占肿瘤细胞的百分比分为：阳性细胞≤5%为(-)，6%～25%为阳性(+)，26%～75%为(++)，>75%为(+++)。

　　1.4统计学处理

　　用SPSS13.0统计软件进行统计学处理，采用χ2检验，Fisher精确概率法检验和非参数检验。

　　2结果

　　2.1MGMT、survivin蛋白在食管癌组织的定位

　　85例食管癌经MGMT和survivin蛋白免疫组化染色后，阳性表达呈棕黄色，阳性细胞在癌组织内呈灶性/弥漫性分布,见图1、2。MGMT蛋白阳性颗粒位于细胞核和(或)细胞浆，但癌巢的中央以细胞浆为主，周围以细胞核为主。survivin蛋白表达定位与MGMT蛋白基本相同。

　　2.2MGMT、survivin蛋白在不同类型的食管癌组织中的表达。

　　小细胞癌MGMT蛋白表达与鳞状细胞癌及腺样结构食管癌的表达均有显著性差异(P<0.01),而鳞状细胞癌与腺样结构癌之间没有显著性差异(P>0.05)。食管鳞癌survivin蛋白阳性表达率明显高于腺样结构癌组织(P<0.05)，余两者之间均无差异，见表1。

　　2.3食管癌MGMT、survivin蛋白的表达及其与临床病理特征之间的关系。

　　MGMT蛋白的表达与食管鳞癌的分化程度密切相关(χ2=5.510，P<0.05)，而与性别、年龄、部位、浸润深度及淋巴结转移无关。survivin蛋白的表达与性别、年龄、部位、浸润深度、分化程度以及淋巴结转移均无关,见表2。

　　2.4MGMT与survivin蛋白在食管癌组织中表达的相关性。

　　为探讨食管癌组织中MGMT与survivin蛋白表达的相互关系，本实验采用Spearman相关分析。结果发现MGMT与survivin蛋白表达之间没有相关关系(r=0.059，P>0.05),见表3。

　　3讨论

　　食管癌是我国常见的恶性肿瘤，亚硝胺等烷化剂与食管癌的发生有密切关系。烷化剂主要作用于DNA上的鸟嘌呤,形成O6mG，后者在DNA复制过程中与T配对,导致DNA中G∶C配对转换为A∶T配对,从而导致肿瘤的形成。 MGMT是一个重要的DNA修复酶,能把DNA上O6mG的甲基转移到自身的半胱氨酸残基上，从而修复甲基化的DNA。MGMT在正常细胞均有表达,但约1/5的肿瘤细胞及1/3的人淋巴细胞却不表达。本文检测 表1 MGMT、survivin蛋白在不同类型的食管癌组织中的表达注：与小细胞癌相比，a χ2=0.00，P<0.01;bχ2=0.00，P<0.01;与腺样结构癌比较，c χ2=0.035，P<0.01表2 MGMT、survivin蛋白在食管癌的表达及其与临床病理特征之间的关系注：与低分化鳞癌相比，a χ2=5.510，P<0.05了85例食管不同类型的癌组织,发现MGMT蛋白在食管鳞状细胞癌、腺样结构癌和小细胞癌中的阳性表达率依次为78.57%、90.00%、11.11%。MGMT在小细胞癌的表达显著低于鳞状细胞癌和腺样结构癌(P<0.01)，低分化鳞癌的表达率显著低于高、中分化鳞癌(P<0.05)，提示MGMT蛋白在不同类型的食管癌中表达不同，MGMT蛋白表达的缺失与肿瘤的恶性程度有关。另外，有研究表明，年龄与性别也会影响MGMT基因的表达，如Rolhion等[1]对神经胶质细胞瘤的研究发现,MGMT基因表达与年龄呈负相关;但本研究显示MGMT蛋白表达与性别、年龄无关，这与吕嘉春等[2]结果一致。表3 MGMT与survivin蛋白

　　survivin是1997年被分离鉴定的凋亡抑制蛋白家族的一个新成员,表达于胚胎发育组织和人类大多数肿瘤组织，但在正常成熟组织中不表达(胸腺、生殖腺除外)。survivin蛋白与食管癌的组织学类型、分化程度以及淋巴结转移的关系报道不尽一致。有研究认为survivin蛋白表达与肿瘤分化程度[3]、淋巴结转移相关，但也有相反报道[4]。目前survivin蛋白在食管癌的研究中，大多局限在食管鳞状细胞癌，而其他类型的食管癌报道甚少。本文通过对85例食管癌survivin蛋白的检测发现，其表达与食管癌的组织类型有密切关系。食管小细胞癌组织survivin蛋白表达高于鳞癌及腺样结构癌，提示与鳞癌和腺癌比较，食管小细胞癌是分化最差、恶性程度最高的肿瘤。

　　已有研究表明，MGMT基因过甲基化与p53基因突变明显相关[5]，而survivin蛋白表达与p53呈正相关[6]。为了解MGMT与survivin蛋白表达是否也存在某种关系，我们对两种蛋白表达进行了相关分析，结果发现MGMT与survivin蛋白表达之间没有相关关系。本文结果显示,食管癌MGMT蛋白表达的缺失与survivin蛋白的高表达是恶性度高的表现。检测食管癌MGMT和survivin蛋白的表达，可作为食管癌预后的参考指标。

　　【参考文献】

　　[1] Rolhion C,PenaultLlorca F,Kemeny JL,et al.O(6)methylguanineDNA methyltransferase gene (MGMT) expression in human glioblastomas in relation to patient characteristics and p53 accumulation[J].Int J Cancer，1999，84 (4)：416420.

　　[2]吕嘉春,施侣元,吴中亮，等.DNA修复基因O6甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶在人群肺癌发生中的作用[J].中华流行病学杂志，2003，24(1)：4044.

　　[3]Nemoto T,Kitagawa M,Hasegawa M,et al.Expression of IAP family proteins in esophageal cancer[J].Exp Mol Pathol，2004，76(3)：253259.

　　[4]Ikeguchi M,Yamaguchi K,Kaibara N.survivin gene expression positively correlates with proliferative activity of cancer cells in esophageal cancer[J].Tumour Biol，2003，24(1)：4045.

　　[5]Zhang YJ,Chen Y,Absan H,et al.Inactivation of the DNA repair gene O6methyguanineDNAmethyltransferase by promoter hypermethylation and its mutation in hepatocellular carcinoma[J].Int J Cancer，2003,103(4)：440444.

　　[6]Lu CD,Altieri DC,Tanigawa N.Expression of a novel antiapoptosis gene,survivin,correlated with tumor cell apoptosis and p53 accumulation in gastric carcinomas[J].Cancer Research，1998，58(9)：18081812.