CKit、PDGFRα的表达与卵巢浆液性 癌顺铂耐药的临床研究

　　作者：易村犍，马丁 作者单位：430030 武汉，华中科技大学附属同济医院肿瘤生物医学中心(现工作单位：434000 长江大学第一附属医院妇产科)

　　【摘要】 目的 分析CKit、PDGFRα在卵巢浆液性癌中的表达及其与铂类耐药的关系, 以期为顺铂耐药的卵巢癌治疗提供实验室依据。方法 采用免疫组化SP法检测CKit、PDGFRα在59例卵巢浆液性癌中的表达，并分析两者的表达与卵巢浆液性癌顺铂耐药的关系。结果 CKit、PDGFRα在59例卵巢浆液性癌中的阳性表达率分别为57.63%和66.10%。CKit蛋白阳性表达与卵巢浆液性癌化疗铂类耐药有关(P<0.05)，而PDGFRα蛋白阳性表达与卵巢浆液性癌化疗铂类耐药无关(P>0.05)。CKit、PDGFRα的表达与卵巢浆液性癌组织学分级和临床分期有关(P<0.01或P<0.05)。结论 CKit蛋白阳性表达与卵巢浆液性癌顺铂耐药有关，而PDGFRα表达与卵巢浆液性癌顺铂耐药无关。

　　【关键词】 CKit;PDGFRα;卵巢癌

　　Expression of cKIT﹠PDGFRα and Correlation with Chemotherapy Resistance in Ovarian Serous Carcinomas:A Clinical Study

　　YI Cunjian*, MA Ding

　　Molecular Cancer Center, Tongji Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,China(*Present: Department of Obstetrics and Gynecology,The First Hospital of Yangtze University, Jingzhou 434000)Abstract：Objective To investigate the expressions of CKit and PDGFRα and their correlation with chemotherapy resistance in ovarian serous carcinomas.Methods We undertook SP immunohistochemical technique to examine the expressions of CKit and PDGFRα in 59 cases with ovarian serous carcinomas,usng archival paraffinembedded specimens.Then we observed the correlation with chemotherapy resistance.Results CKit and PDGFRα immunostainings were observed positively expressed in 57.63% and 66.10% of cases. CKit expression was statistically correlated with progression of disease after firstline chemotherapy (P<0.05), but PDGFRα was not statistically significant (P>0.05). There were great difference between of CKit and PDGFRα expressions in samples of different differentiated and clinical stages of ovarian serous carcinomas (P<0.01 or P<0.05).Conclusion CKit is statistically correlated with chemotherapy resistance,while PDGFRα is not correlated.

　　Key words：CKit;PDGFRα;Ovarian carcinoma

　　卵巢上皮性癌目前是死亡率最高的妇科恶性肿瘤，在手术的基础上施以顺铂为主的联合化疗已成为治疗卵巢癌的标准方案。但这些方案治疗后达临床缓解者，复发率仍高达50%以上。探索卵巢癌的耐药机制是解决耐药问题、改善化疗效果的关键，也是目前妇科肿瘤研究的热点。CKit和PDGFRα同属Ⅲ型酪氨酸蛋白激酶受体家族，其蛋白结构和基因定位均相似。目前研究发现CKit及PDGFRα与多种恶性肿瘤的发生、增殖、浸润和转移有关，在卵巢上皮性癌中呈高表达[1]，但关于CKit和PDGFRα的表达与卵巢癌顺铂耐药的关系少见报道。本研究目的是就此进行探讨，以期为顺铂耐药的卵巢浆液性癌治疗提供实验室依据。

　　1 资料与方法

　　1.1 临床资料

　　收集1997年1月～2006年1月长江大学第一附属医院妇产科手术治疗，并经病理诊断证实为卵巢浆液性癌的患者共59例，年龄28～65岁，平均年龄43岁。其中高中分化35例，低分化24例;根据1988年国际妇产科联盟(FIGO)修订的手术病理分期：Ⅰ～Ⅱ期21例，Ⅲ～Ⅳ期38例。标本以福

　　尔马林固定，常规石蜡包埋存档。

　　1.2 铂类敏感与铂类耐药的标准

　　选择的59例卵巢浆液性囊腺癌患者，早期行全面分期探查手术，晚期行肿瘤细胞减灭术，部分行中间性减瘤术。术后均以PC(顺铂+环磷酰胺)或TP(泰素+顺铂)方案化疗6个周期，并对病人进行随访观察。无病间隔至少超过6个月者被认为是对铂类敏感的病人;无病间隔小于6个月被认为对铂类耐药[2]。

　　1.3 试剂来源

　　鼠抗人单克隆抗体CKit、PDGFRα及免疫组化SP试剂盒购自福州迈新生物技术开发公司。

　　1.4 免疫组织化学技术

　　采用免疫组化SP法检测卵巢癌标本中CKit、PDGFRα的表达。免疫组化方法按照试剂盒说明书操作。DAB显色剂显色，苏木素复染，中性树胶封片，显微镜下观察结果。以PBS代替一抗为阴性对照，阳性对照由福州迈新生物技术开发公司提供。

　　1.5 结果判定

　　以细胞膜或细胞浆出现棕黄色颗粒者为阳性染色。参考许良中等[3]的方法，根据阳性染色程度及染色细胞百分率进行分析评分：基本不着色者为0分，着色淡者为1分，着色适中者为2分，着色深者为3分;着色细胞占计数细胞百分率<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分。将每张切片着色程度得分与着色细胞百分率得分相乘，为其最后得分。得0～1分为阴性(-)，得2～3分为弱阳性(+)，得4～6分为中等阳性(++)，6分以上为强阳性(+++)。见图1、2。

　　1.6 统计学方法

　　录入实验结果，采用Stata3.0软件包对数据进行统计学处理。采用χ2检验分析CKit和PDGFRα表达与卵巢上皮性癌组织学分级和临床分期的关系，Fisher's精确检验分析CKit和PDGFRα表达与卵巢上皮性癌顺铂耐药的关系，P<0.05为差异有统计学意义，P<0.01为差异有显著统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 CKit和PDGFRα表达与卵巢浆液性癌组织学分级和临床分期的关系

　　C-Kit、PDGFRα在卵巢浆液性癌中表达的阳性率分别为57.63%(34/59)和66.10%(39/59)。它们在低分化卵巢浆液性癌中表达的阳性率明显高于高中分化卵巢浆液性癌，经统计学检验差异有显著统计学意义(P<0.01)。在卵巢浆液性癌FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期中CKit、PDGFRα的表达明显高于Ⅰ～Ⅱ期，差异有统计学意义(P<0.05、P<0.01)，见表1。

　　2.2 CKit和PDGFRα表达与卵巢浆液性癌顺铂耐药的关系

　　59例卵巢浆液性癌中有17例顺铂耐药。顺铂耐药组中CKit阳性率(82.35%)明显高于顺铂敏感组(47.61%)，顺铂敏感组中PDGFRα阳性率(66.67%)高于顺铂耐药组(64.71%)。经Fisher's精确检验发现，CKit蛋白阳性表达与卵巢浆液性癌化疗铂类耐药有关(P<0.05)，而PDGFRα蛋白阳性表达与卵巢浆液性癌化疗铂类耐药无关(P>0.05)，见表2、3。表1 CKit、PDGFRα在卵巢浆液性癌不同组织学分级和不同临床分期中的阳性表达表2 CKit表达与卵巢浆液性癌顺铂耐药的相互关系 表3 PDGFRα与卵巢浆液性癌顺铂耐药的相互关系

　　3 讨论

　　以铂类为主的联合化疗提高了卵巢癌患者的总体反应率、临床缓解率和中位生存时间，但随之而来的肿瘤细胞的原发性和(或)获得性多药耐药现象成为临床治疗的障碍。提高卵巢癌的化疗敏感性，降低化疗耐药尤其是对最常用的化疗药物顺铂的耐药性是改善临床预后的关键[4]。

　　研究报道在胃肠间质瘤(gastrointestinalstromal tumors，GISTs)中，CKit突变阳性的患者复发率及死亡率比CKit阴性的患者要高[5]，并且在其他恶性肿瘤中(如小细胞肺癌、肉瘤)发现，CKit阳性的细胞具有更显著的侵袭性生物学行为[6]。CKit不仅仅是一种生物学标记，它可通过自分泌、旁分泌、内分泌的方式引起肿瘤的恶性增殖[7]，还可激活其下游的信号转导而抵抗细胞的凋亡诱导细胞的耐药。有研究报道，酪氨酸激酶可使细胞内数十种蛋白质酪氨酸磷酸化并激活细胞内的一些信号分子，通过一连串的生化反应激活有丝分裂原活化的蛋白激酶(MAPK)，引发cfos、cjun等癌基因的表达[89];另外还有研究表明，BCRABL激活Ras途径是肿瘤细胞抵抗化疗药物诱导凋亡的重要机制之一;磷脂酰激醇3激酶(PI3K)磷酸酶脱磷酸(PKB/Akt)信号转导途径的抗凋亡机制在卵巢癌的化学耐药中也起着重要作用[9]。

　　本研究及以前研究[1]发现C-Kit及PDGFRα在超过半数的卵巢上皮性癌中过表达，这个结论支持CKit在培养的卵巢癌细胞中表达[10]以及关于CKit在卵巢癌发生过程中发挥重要作用的假设。我们的研究显示CKit、PDGFRα的表达与卵巢浆液性癌组织学分级和临床分期有关(P<0.01或P<0.05)，组织分化程度越差，手术病理分期越高，CKit、PDGFRα表达的阳性率越高，表明CKit、PDGFRα在卵巢浆液性癌的恶性转化中可能起重要作用。CKit与PDGFRα表达阳性的卵巢浆液性癌可能具有更强的侵袭性生物学行为，对CKit与PDGFRα蛋白的检测可用于判断肿瘤的恶性程度及卵巢浆液性癌患者的预后。

　　我们的研究还显示卵巢浆液性癌顺铂耐药组中CKit阳性率(82.35%)明显高于顺铂敏感组(47.61%)，经检验差异有统计学意义(P<0.05);而顺铂敏感组中PDGFRα阳性率(66.67%)高于顺铂耐药组(64.71%)，但经统计学检验差异无统计学意义(P>0.05)，表明CKit的表达阳性与卵巢浆液性癌一线化疗后疾病的复发或耐药有关，同时也帮助临床上判断哪些病人可能对顺铂耐药。目前针对酪氨酸激酶研制的分子靶向药物——格列卫引起了国内外学者的广泛关注。格列卫是针对酪氨酸激酶具有特异的抑制信号转导能力的抑制剂，因此我们的研究结果提示了格列卫可能为CKit表达阳性的顺铂耐药的卵巢浆液性癌的治疗提供了一个新的思路。

　　【参考文献】

　　[1] 易村犍,凌晟荣,陈克明. CKit和PDGFRα在卵巢上皮性癌组织中的表达及临床意义[J].中国实用妇科与产科杂志,2006,22(4):295296.

　　[2] Markman M, Rothman R, Hakes T, et al.Secondline platinum therapy in patients with ovarian cancer previously treated with cisplatin[J].J Clin Oncol,1991,9(3):389393.

　　[3] 许良中,杨文涛.免疫组织化学反应结果的判断标准[J].中国癌症杂志,1996, 5(4):229231.

　　[4] 项涛,夏曦,王世宣,等.上调p38表达提高卵巢癌多细胞球体顺铂敏感性[J].肿瘤防治研究,2008,35(3):157160.

　　[5] Taniguchi M, Nishida T, Hirota S, et al. Effect of CKit mutation on prognosis of gastrointestinal stromal tumors[J]. Cancer Res,1999,59(17): 42974300.

　　[6] Komdeur R, Hoekstra HJ, Molenaar WM, et al. Clinicopathologic assessment of postradiation sarcomas: KIT as a potential treatment target[J]. Clin Cancer Res,2003,9(8): 29262932.

　　[7] Krystal GW, Hines SJ, Organ CP. Autocrine growth of small cell lung cancer mediated by coexpression of CKit and stem cell factor[J]. Cancer Res,1996,56(2): 370376.

　　[8] Santin AD, Fenghuang Z, Bellone S, et al. Gene expression profiles in primary ovarian serous papillary tumors and normal ovarian epithelium dentification of candidate molecular markers for ovarian cancer diagnosis and therapy[J]. Cancer, 2004,11 (2) :1425.

　　[9] Lee S, Choi EJ, Jin C, et al. Activation of PI3K/ Akt pathway by PTEN reduction and PIK3CA mRNA amplification contributes to cisplatin resistance in an ovarian cancer cell line[J]. Gynecol Oncol, 2005, 97(1): 2634.

　　[10]Tonary AM, Macdonald EA, Faught W, et al. Lack of expression of CKit in ovarian cancers is associated with poor prognosis[J].Int J Cancer,2000,89(3):242250.