PTTG和bFGF在非霍奇金淋巴瘤中的表达

　　作者：李科，钟美佐，李建璜，余 兴 作者单位：410008 长沙，中南大学湘雅医院肿瘤化疗科(*现工作单位：云南省肿瘤医院肿瘤化疗研究中心)

　　【摘要】 目的 研究垂体肿瘤转化基因(PTTG)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在非霍奇金淋巴瘤中的表达及其意义。方法 应用原位杂交法和免疫组化法分别检测50例NHL患者和20例良性淋巴结炎中PTTG mRNA及其蛋白、bFGF蛋白的表达。结果 PTTG mRNA及其蛋白在NHL中的阳性表达率分别为54.0%(27/50)和50.0%(25/50)，均高于对照组;bFGF蛋白在NHL中的阳性表达率为50.0%(25/50)，高于对照组;PTTG mRNA及其蛋白、bFGF蛋白均与NHL的恶性程度及临床分期呈正相关关系;PTTG mRNA与其蛋白表达，与bFGF蛋白表达均呈等级正相关;与近期疗效呈负相关关系。结论 PTTG或bFGF可能与NHL生物学行为有关，PTTG可能通过直接或间接方式促进bFGF表达，参与NHL的发生、发展。

　　【关键词】 非霍奇金淋巴瘤;垂体肿瘤转化基因;碱性成纤维细胞生长因子;原位杂交;免疫组化

　　Expression of PTTG and bFGF in NonHodgkin’s Lymphoma

　　LI Ke*, ZHONG Meizuo, LI Jianhuang，YU Xing

　　Department of Oncology Chemotherapy, Xiangya Hospital of CentralSouth University, Changsha 410008，China (*Present:Center of Cancer Chemothoropy,The Tumor Hospital of Yunnan Province)

　　Corresponding Author: ZHONG Meizuo，Email:meizuo_zhong@yahoo.com.cnAbstract：Objective To investigate the expression of PTTG and bFGF in nonhodgkin's lymphoma and their significances.Methods Fifty cases of NHL and twenty cases of benign lymphademopathy were studied. PTTG expression was measured at mRNA level by insite hybridization; PTTG and bFGF expression were measured at protein level by immunohistochemistry.Results Positive expression rate of PTTG mRNA and its protein in NHL was 54.0%(27/50)and 50.0%(25/50), respectively. Positive expression of them in NHL were significantly higher than those in the control group.Positive expression rate of bFGF protein in NHL was 50.0%(25/50). Positive expression of bFGF protein in NHL was significantly higher than those in the control. All expression grade of PTTG mRNA and its protein, expression grade of bFGF protein were positively related to tumor histopathologic grade and clinical stage, respectively. Expression of PTTG mRNA was positively related to the expression grade of PTTG and bFGF protein. There were both negative correlation between expression of PTTG mRNA and NHL recent effects; expression of bFGF protein and NHL recent effects.Conclusion There was overexpression of PTTG and bFGF in NHL. Expression grade of PTTG or bFGF was related to NHL’s clinicopathological parameters. PTTG might play an important role in the formation and development of NHL by means of increasing expression of bFGF directly or indirectly.

　　Key words：NonHodgkin’s lymphoma; Pituitary tumour transforming gene;Basic fibroblast growth factor;Insite hybridization;Immunohistochemistry

　　在肿瘤形成和发展过程中，癌基因和抑癌基因扮演着极其重要的角色。1997年Pei等[1]用mRNA差异显示法从大鼠GH4垂体瘤中分离出新的原癌基因垂体肿瘤转化基因(pituitary tumor transforming gene，PTTG)。许多研究表明，PTTG高表达在促进细胞增殖、转化及多种肿瘤发生、发展中有十分重要的作用，但少见有关PTTG在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的报道。本文初步研究PTTG和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)在NHL中的表达及其相互关系，旨在探讨PTTG在NHL发生、发展中的作用。

　　1 资料与方法

　　1.1 病理资料 病例组：50例均为我院2003年11月～2004年8月初治住院病例，全部经病理检查确诊为NHL。男28例，女22例;平均年龄45(7～78)岁;低、中、高度恶性分别为8、29、13例;T/NK细胞淋巴瘤23例，B细胞淋巴瘤27例;Ⅰ～Ⅳ期分别为8、21、12、9例。对照组：良性增生性淋巴结炎，共20例，男9例，女11例，平均年龄37(6～70)岁。

　　1.2 方法 PTTG原位杂交试剂盒为武汉博士德公司产品;PTTG鼠抗人单克隆抗体，bFGF鼠抗人单克隆抗体及免疫组化SP试剂盒均为北京中杉金桥公司产品。采用原位杂交DNARNA法常规操作技术及免疫组化SP法常规操作技术。用PBS代替一抗作为阴性对照，已知阳性标本为阳性对照。染色结果采用Sinicrope及桂律等[23]的综合记分法并稍加改进。计数至少5个400倍视野中染色细胞所占比例并记分。1/3以下为1分，1/3～2/3为2分，2/3以上为3分;染色强度分为0分为无色，1分为弱染色，2分为中度染色，3分为强染色。计算染色细胞数分数与染色强度分数的乘积，0分为阴性(-)，1～2分为弱阳性(+),3～4分为阳性(++)，> 4分为强阳性(+++)。

　　1.3 统计学方法 SPSS 11.5软件包进行统计学分析。半定量资料比较采用四格表，计数资料采用MeanWhiteney及KrusalWallis H秩和检验，相关分析采用Spearman秩相关分析。

　　2 结果

　　2.1 PTTG mRNA表达 阳性染色主要位于细胞浆，少数细胞核染色。阳性细胞数随肿瘤恶性程度的增高而增多，见图1。在NHL和对照组中表达率分别为54.0%(27/50)和20.0%(4/20)，NHL中PTTG mRNA阳性表达率及表达分级比较均高于对照组，差异有统计学意义(χ2=6.693，P=0.01;U=313，P=0.007)。

　　2.2 PTTG mRNA表达与NHL临床病理特征的关系 PTTG mRNA表达与性别、年龄、免疫分型、临床分组、血清LDH、ZPS评分及结外病变数无关;与恶性程度及临床分期有关。秩相关分析示PTTG mRNA表达与NHL的恶性程度正相关(r=0.366,P=0.009);与临床分期正相关(r=0.438,P=0.001)，见表1。

　　2.3 PTTG蛋白表达 阳性染色主要位于细胞浆，见图2。PTTG蛋白在NHL和对照组中表达率分别为50.0%(25/50)和15.0%(3/20)，NHL中PTTG蛋白的阳性表达率和表达分级比较均高于对照组，差异有统计学意义(χ2=7.292，P=0.007;U=330，P=0.012)。

　　2.4 bFGF蛋白的表达 阳性染色主要位于细胞膜和细胞浆，细胞数随肿瘤恶性程度的增高而增多，见图3。bFGF蛋白在NHL和对照组中表达率分别为50.0%(25/50)和20.0%(4/20)，NHL中其阳性表达率及表达分级均高于对照组，差异有统计学意义(χ2=5.299，P=0.0021;U=344，P=0.022)。

　　2.5 bFGF蛋白表达与NHL临床病理特征的关系

　　bFGF蛋白表达与性别、年龄、免疫分型、临床分组、血清LDH、ZPS评分及结外病变数无关;与恶性程度及临床分期有关。秩相关分析示bFGF蛋白的表达与NHL的恶性程度正相关(r=0.354,P=表1 PTTG mRNA和bFGF蛋白表达与NHL临床病理特征的关系 0.012);与临床分期也正相关(r=0.557,P=0.000)，见表1。

　　2.6 PTTG mRNA及其蛋白表达的相关性 等级相关分析表明NHL中两者表达等级正相关(r=0.831、P=0.000)。

　　2.7 PTTG mRNA表达与bFGF蛋白表达的相关性 等级相关分析表明NHL中两者表达等级正相关(r=0.897、P=0.000)。

　　2.8 PTTG mRNA、bFGF蛋白表达与近期疗效的关系 35例NHL中PTTG mRNA、bFGF蛋白表达均与近期疗效负相关(P<0.05)，见表2。

　　3 讨论

　　PTTG定位于染色体5q33。它主要通过直接和(或)间接方式促进bFGF表达而诱导细胞转化，抑制姊妹染色体的分离而使子代细胞非整倍体化，促进其他原癌基因及促瘤因子表达等机制参与肿瘤发生、发展。除最先发现的垂体肿瘤外[4]，在结直肠肿瘤[5]、食管癌[6]、白血病、卵巢癌、甲状腺癌、乳腺癌、肺癌等均发现PTTG不同程度高表达。本研究发现，NHL中PTTGmRNA及其蛋白的阳性表达表2 PTTG mRNA、bFGF与NHL近期疗效的关系率和表达水平均高于对照组; PTTGmRNA与其蛋白表达等级正相关(r=0.831、P<0.01)。说明NHL中有PTTG高表达，其高表达可能与NHL的发生密切相关。

　　许多研究表明PTTG过表达与肿瘤浸润和转移等密切相关。Zhang等[4]发现，浸润至碟骨的垂体肿瘤PTTG表达水平较局限在垂体窝内的肿瘤明显升高，PTTG过度表达是激素分泌型垂体肿瘤的分子生物学标志。Shibata等[6]研究表明，食管癌中PTTG mRNA表达与病理分级和淋巴结转移情况呈显著正相关。Heary等[5]研究发现在结直肠癌中，PTTG高表达与肿瘤的淋巴结转移有关，Dukes分期为C、D期的结肠癌比A、B期的肿瘤PTTG高表达，并且血管旺盛的肿瘤PTTG表达明显增加。本研究发现PTTG mRNA表达水平与NHL恶性程度及临床分期正相关，而与性别、年龄、免疫分型、临床分组、血清LDH、ZPS评分及结外病变数无关(由于病例数的局限，秩相关分析无统计学意义,有待扩大病例数进一步研究分析);这可能系肿瘤细胞分化程度越低，处于复制阶段细胞越多，生长分数越高，临床上越易发生侵袭和转移。可见，PTTG mRNA高表达可能与NHL生物学特性密切相关，PTTG有可能作为NHL浸润和转移的一个分子学标志，并用于帮助判断其恶性程度。

　　研究不仅发现PTTG通过直接和(或)间接方式促进bFGF表达而诱导细胞转化，而且证实，在人体肿瘤及动物模型中，PTTG与bFGF基因表达相互协调，它们之间存在正反馈环。Boelaert等[7]研究发现，在甲状腺癌中，PTTG和bFGF高表达。bFGF mRNA高表达与肿瘤的淋巴结转移和远处侵袭有关，PTTG高表达与肿瘤复发有关，提示PTTG及bFGF可作为甲状腺癌的预后判断指标。McCabe等[8]的研究表明，垂体肿瘤中，PTTG mRNA与bFGF mRNA、KDR mRNA及与VEGF mRNA表达量均呈正相关。本研究发现bFGF蛋白在NHL中高表达，其表达水平与NHL恶性程度及临床分期正相关。NHL中PTTG mRNA与bFGF蛋白表达正相关;且PTTG mRNA、bFGF蛋白表达均与NHL近期疗效负相关。提示PTTG有可能通过直接和(或)间接方式促进bFGF表达来影响肿瘤血管生成，参与NHL发生、发展。至于PTTG和bFGF是否是影响预后的指标之一，还需要增加样本量，延长随访时间进一步证实。

　　靶向病变基因的抗肿瘤治疗是目前肿瘤治疗研究中的热点。陈刚等[910]将构建的反义PTTG体外转染卵巢癌SKOV3细胞株，结果显示转染组细胞较未转染组的PTTG、bFGF蛋白表达减少;细胞增殖明显增强;转染组细胞的集落形成数明显低于未转染组和转染空白质粒对照组。Solbach等[11]研究发现，转染了反义PTTG的子宫颈癌细胞株HelaS3的PTTG mRNA和蛋白表达下降，细胞增殖抑制和细胞凋亡增加明显。窦国睿等[12]发现转染了反义PTTG cDNA组的胆囊癌GBCSD细胞系的5Fu凋亡诱导作用明显高于未转染组和空载体转染组。这些探索均为针对PTTG的肿瘤基因治疗提供可能。

　　随着PTTG作用机制逐渐被阐明，针对PTTG的肿瘤基因治疗将可能成为未来治疗肿瘤的方法之一。包括诱导SH3连接位点的负性突变的反义核酸技术和RNA干扰等技术可能为以后针对PTTG的基因治疗提供新的思路。

　　【参考文献】

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　　[7]Boelaert K, McCabe CJ, Tannahill LA, et al. Pituitary tumor transforming gene and fibroblast growth factor2 expression: potential prognostic indicators in differentiated thyroid cancer[J]. J Clin Endocrinol Metab, 2003, 88(5): 23412347.

　　[8] McCabe CJ, Boelaert K, Tannahill LA, et al. Vascular endothelial growth factor, its receptor KDR/Flk1, and pituitary tumor transforming gene in pituitary tumors[J]. J Clin Endocrinol Metab, 2002,87(9):42384244.

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　　[12]窦国睿,王江，张福琴,等.PTTG反义cDNA对胆囊癌细胞5Fu敏感性的影响[J].第四军医大学学报,2005,26(7):268269.