尼可地尔对大鼠实验性心肌梗死的影响

　　作者：吴耀辉 作者单位：东莞市厚街医院,广东 东莞 523945

　　【摘要】 观察尼可地尔对大鼠实验性心肌梗死的影响。方法 Wistar大鼠100只，随机分为5组: 尼可地尔低剂量组、中剂量组、高剂量组、假手术组和对照组。麻醉大鼠,结扎左冠状动脉前降支60 min，再灌注60 min,从心肌梗死面积(MIS)、 血清酶学、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化观察尼可地尔的抗心肌缺血再灌注损伤作用。结果 尼可地尔可降低心肌梗死面积,降低血清肌酸磷酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)活性，提高心肌SOD活性,减少心肌MDA含量。结论 尼可地尔可降低心肌梗死面积,对急性缺血心肌有保护作用。

　　【关键词】 尼可地尔,心肌梗死

　　尼可地尔(nicorandil, NIC) 是近年来发现的钾通道开放剂,具有多种药理作用,除开放钾通道外,还能抑制细胞外钙内流及内钙释放的作用。它能扩张冠状动脉，降低血管阻力, 对缺血区心肌的冠状动脉循环有改善作用。本文从心肌病理学等方面来研究尼可地尔对大鼠实验性心肌梗死的保护作用。

　　1 材料和方法

　　1.1 实验材料

　　实验动物Wister大鼠,雌雄兼顾,体重250～320g ,由江西医学院实验动物中心提供。尼可地尔为西安力邦公司产品。江湾Ⅰ型微型动物人工呼吸机(第二军医大学教材处)。

　　1.2 给药方案

　　实验动物随机分为尼可地尔低剂量组、中剂量组、高剂量组、假手术组和对照组，每组20只。(1)尼可地尔低剂量组(NIC1): 在结扎冠状动脉前60 min、再灌注前5min分别舌下静脉注射尼可地尔10 mg/kg;(2)尼可地尔中剂量组(NIC2):给药方法同NIC1,尼可地尔用量20 mg/kg;(3)尼可地尔高剂量组(NIC3): 给药方法同NIC1,尼可地尔用量40 mg/kg;(4)对照组: 未给药仅闭塞左冠状动脉60 min、再灌注60 min;(5)假手术组:未用药,大鼠开胸,左冠状动脉穿线,不结扎。

　　1.3 动物模型

　　根据文献[1]的方法制作动物模型。再灌注结束时每组一半动物从颈总动脉取血2 ml,待凝固后离心取血清, 用全自动生化分析仪测定心清肌酸磷酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)水平。 取血后将左冠状动脉原位重新结扎,由舌下静脉注入0.5 g/L伊文思蓝1.5 ml,待心脏充分染成蓝色后,迅速摘取心脏,用冰生理盐水冲洗后剪去心房、血管及脂肪组织,-20℃冻存10 min。将心室切成约1 mm厚的薄片,置入pH 7.4的10 g/L TTC液中,于37℃孵育10 min,非缺血区染成蓝色,缺血未梗死区染成砖红色,梗死区呈灰白色。用数码照相机进行图像采集,再用图像分析软件求出梗死区(infarct size,IS)占缺血区面积(area of risk, AR)、梗死区占左室面积(area of left ventricular, LV)及缺血区占左室面积的比例。

　　另一半动物再灌注结束后,立即将大鼠心脏剪下,冰生理盐水漂洗,切取左冠状动脉供血的前壁全层心肌组织,称重后制成5%匀浆液,离心取上清液,按硫代巴比妥酸(TBA) 比色法测定丙二醛(MDA)含量[2],采用邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶SOD活性[3]。

　　1.4 统计学处理

　　所有实验数据均采用SPSS10.0 软件处理。计量资料以均数±标准差(±s)表示,组间比较采用单因素方差分析,以P<0.05 为差异有统计学意义。

　　2 结果

　　2.1 尼可地尔对心肌梗死面积的影响

　　与对照组相比, 尼可地尔中、高剂量组均可使IS/LV、IS/AR 值减少(P<0.01), 低剂量组可使IS/AR 值减少(P<0.01) ,高剂量组对IS/AR 的影响与低剂量组比较有明显差异(P<0.01), 见表1。 表1 尼可地尔对心肌缺血再灌注大鼠心肌梗死 面积的影响注：与对照组比较,aP<0.01, 与NIC1比较,bP<0.01

　　2.2 尼可地尔对心肌缺血再灌注大鼠血清CK、LDH活性的影响

　　尼可地尔中、高剂量组均能降低血清CK及LDH活性,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。尼可地尔高剂量组对CK、LDH活性的影响与低剂量组比较差异有统计学意义 (P<0.01)(表2)。 表2 心肌缺血再灌注损伤心肌酶的比较注:与对照组比较aP<0.01,与假手术组比较bP<0.01,与NIC1比较cP<0.05

　　2. 3 尼可地尔对心肌缺血再灌注大鼠心肌MDA、SOD的影响

　　尼可地尔中、高剂量组均能降低心肌MDA的含量,并提高心肌SOD的活性,与对照组相比差异有统计学意义(P< 0.01) 。尼可地尔高剂量组对上述各指标的影响与低剂量组比较有明显差异(P<0.05) ,见表3。表3 尼可地尔对心肌缺血再灌注大鼠心肌MDA、 SOD的影响

　　3 讨论

　　本实验通过结扎大鼠左冠状动脉复制出缺血/再灌注模型来了解尼可地尔对大鼠实验性心肌梗死的影响。结果显示，尼可地尔中、高剂量组均可使大鼠心肌梗死面积明显缩小，尼可地尔小剂量组心肌梗死面积也有所减小，但统计学差异不明显，表明尼可地尔对损伤心肌有明显的保护作用，这种保护作用在一定范围内与剂量成依赖关系。

　　实验中还观察到, 对照组的血清LDH、CK活性、心肌MDA的含量明显升高, SOD活性降低。心肌缺血再灌注损伤时,细胞内Ca2+超载直接导致细胞死亡;钙超载还能诱发氧自由基的大量产生，而MDA是此反应的主要产物之一，因此对MDA的监测可间接反映氧自由基的产生和过氧化反应的程度，对SOD的监测可间接反映机体清除自由基的能力。本实验中对照组MDA水平较假手术组明显升高，SOD活力较假手术组明显降低。尼可地尔能明显抑制缺血再灌注后MDA的升高，并有效保护超氧化物歧化酶活力，显示尼可地尔抗缺血引起的脂质过氧化反应和较强的自由基清除能力。这与王海涛等[4]的研究一致。

　　与硝酸酯一样, 尼可地尔可激活胞浆鸟苷酸环化酶, 致使细胞环鸟苷酸水平升高,从而扩张较大的微血管,改善缺血心肌的供血。另一方面，尼可地尔进入体内后与心肌受体结合，开放钾通道(K+ATP)，导致钾离子从细胞内流出,抑制了细胞外钙的内流和细胞内钙库中钙的释放，内钙的减少还可使较小微血管舒张[5，6]，使微循环得到改善，从而改善缺血心肌的供血，使缺血再灌注后心肌得到保护。

　　本实验从不同侧面证实了尼可地尔对心肌缺血再灌注损伤的有效治疗作用，但其具体作用机制有待进一步研究。 参考文献：

　　【参考文献】

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　　[2]刘国文,李永国.微波预照射对家兔肝缺血再灌注损伤时氧自由基的影响[J].中国现代手术学杂志,2005,9:2325.

　　[3]Oyanagui Y. Reevaluation of assay methods and establishment of kit for super oxide dismutase activity[J]. Anal Biochem, 1984, 142：287290.

　　[4]王海涛,杨 军,毛庆民,等. 川芎嗪与尼可地尔对兔急性心肌梗死再灌注后心肌无“复流”现象影响的对比实验研究[J].中国心血管杂志，2005,10:173175.

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　　[6]Komaru T, Lamping K G, Eastham C L, et al. Role of ATP sensitive potassium channels in coronary microvascular auto regulato ry responses[J]. Circ Res, 2001, 69: 11461151.