GSTM1、P1基因多态对接受铂类药物辅助化疗的胃癌患者预后的影响

    作者：黄朝晖    作者单位：214062 江苏无锡，苏州大学附属第四医院肿瘤研究所     【摘要】  目的 探讨GSTM1、GSTP1基因多态与胃癌对铂类药物辅助化疗预后的关系。方法 确诊的胃癌患者84例，采用铂类药物为主的方案进行辅助化疗；采用聚合酶链反应连接酶检测反应检测GSTM1和GSTP1 Ile105Val基因多态。结果 84例胃癌患者中，43例(51.2％)携带GSTM1缺失基因型；GSTP1 Ile/Ile、Ile/Val和Val/Val分别占61.9％、28.6％和9.7％。携带GSTP1 Ile/Val 和Val/Val基因型的胃癌患者无复发生存率和总生存率均显著高于携带Ile/Ile基因型患者(P<0.05)。多因素分析结果显示,GSTP1多态是影响患者复发的独立危险因素(P<0.05)。结论 GSTP1 Ile105Val基因多态与接受铂类药物辅助化疗的胃癌患者的预后有关。

    【关键词】  胃癌 化学治疗 多态性 谷胱甘肽S转移酶

    谷胱甘肽S转移酶（GlutathioneStransferase，GST）是体内最重要的Ⅱ相代谢酶，其基因多态性不仅与多种恶性肿瘤的易感性有关，而且会影响化疗药物对肿瘤细胞的疗效。研究显示，GSTM1缺失基因型和GSTP1 Ile105Val基因多态的变异型（Val）可导致酶活性丧失或降低，从而增强机体对某些毒物或致癌物的敏感性，但同时也会使机体对某些肿瘤化疗药物的解毒性下降，疗效增强[25]。但目前关于GST基因多态与胃癌根治术后患者预后的相关研究尚未见报道，因此本文选择84例接受铂类药物辅助化疗的胃癌患者为研究对象，分析GSTM1和GSTP1基因多态与其预后的关系。

    1   资料与方法

    1.1   研究对象   收集本院2002年7月～2005年6月间收治的胃癌患者84例，年龄34～76岁，中位年龄58岁，均为胃癌根治术后病人，并经影像学检查证实体内未测到影像学可见肿瘤病灶。化疗前患者血常规、肝肾功能均正常，心电图无明显异常。所有病例术后均接受4周期以上以铂类为主的联合化疗，包括CF（亚叶酸钙）+5Fu+LOHP（草酸铂）方案71例， CF+5Fu+LOHP+TAX（泰素）方案7例，顺铂+5Fu方案4例和CF+5Fu+ LOHP+HCPT（羟基喜树碱）方案2例。所有病例术前或化疗前抽取静脉血2ml，乙二胺四乙酸钠抗凝，分装后置-80℃冰箱保存。无复发生存期(RFS)为根治性手术到首次复发、转移的时间；总生存期(OS)为根治性手术到死亡或末次随访的时间。

    1.2   基因分型   使用Axygene全血基因组DNA抽提试剂盒抽提基因组DNA。采用聚合酶链反应连接酶检测反应(PCRLDR)进行基因分型，所用引物及标记的探针见表1。配制20μl多重PCR体系：1×PCR Buffer，2.5mM Mg2+, 0.2mM dNTPs, 0.5μM各条引物, 1U 热启动Taq酶。扩增参数：95℃ 15min、94℃ 30s、58℃ 1.5min、72℃ 1min，35个循环后，72℃延伸10min。配制20μl多重LDR体系：1×连接酶Buffer， 0.2μM 各条LDR探针，4U连接酶，2μl PCR产物。反应程序：94℃ 2min、94℃ 30s、60℃ 2min，共35个循环。取LDR产物1μl，加1μl ROX和1μl测序胶上样缓冲液混合，上样于ABI 377测序仪测序胶进行电泳。GSTM1 野生型在134bp出现一个峰值，缺失型无对应峰。GSTP1Ile/ Ile和Val/Val基因型在92bp和97bp处各出现一个峰，Ile/Val杂合子基因型则出现2个峰。

    1.3   统计学方法   应用SPSS13.0软件包进行统计学处理。多因素分析采用COX比例风险模型进行。采用KaplanMeier方法绘制生存曲线，logrank方法比较生存率。所有统计均采用双侧检验。P<0.05为差异有统计学意义。

    2   结果

    2.1   基因型分布   结果见图1。84例胃癌患者中，43例(51.2％)携带GSTM1缺失基因型；GSTP1 Ile/Ile、Ile/Val和Val/Val分别占61.9％（52/84）、28.6％（24/84）和9.7％（8/84）。

    2.2   GST基因型与胃癌患者预后的关系   随访时间截止至2007年6月15日，失访病例2例，随访率97.6％。共有53例（63.1％）患者出现复发，其中携带GSTP1 Ile/Val、Val/Val基因型的患者和携带Ile/Ile基因型患者的复发率分别为50.0％和71.2％；而GSTM1缺失及未缺失基因型患者复发率分别为58.1％和68.3％，其KaplanMeier无复发生存曲线，见图2。

    84例患者中，43例（51.2％）死亡，其中携带GSTP1 Ile/Val、Val/Val基因型的患者和携带Ile/Ile基因型患者的生存率分别为65.6％和38.5％；而GSTM1缺失及未缺失基因型患者生存率分别为55.8％和46.3％。不同基因型患者的生存曲线及logrank检验结果，见图3。将年龄、性别、分化程度、淋巴结状态、分期及GSTM1和（或）GSTP1基因型纳入COX回归模型进行多变量分析，结果显示GSTP1 Ile/Ile基因型是影响患者RFS的独立危险因素(OR=2.198，95％CI=1.162～4.156，P＝0.015)，而GSTM1多态与预后无关(P>0.05)。

    3   讨论

    复发和转移是包括胃癌在内的多数恶性肿瘤患者死亡的主要原因，约60％根治术后的胃癌患者发生原位复发或远处转移，对胃癌根治患者尤其是具有不良预后因素的患者进行辅助化疗是降低其复发率，延长生存期的主要手段之一，但个体遗传差异导致很多患者不能从化疗中获益。研究显示，深入理解肿瘤生物学特性，从药物基因组学角度研究患者之间药物敏感性的差异，寻找可靠的药物敏感性预测指标，指导个体化治疗，对于提高临床用药的有效性和安全性具有重要意义[6]。表1   PCRLDR检测引物及探针序列铂类药物是常用胃癌化疗药物之一，但不同个体对铂类药物敏感性差异很大。研究显示，GSTP1表达水平可能与肿瘤细胞对铂类药物的敏感性有关。GSTP1外显子5的第313位碱基存在A/G单核苷酸多态，导致发生Ile→Val改变，能够显著降低GSTP1的酶活从而增加肿瘤细胞对铂类药物的敏感性[79]。GSTM1基因缺失导致个体不能表达GSTM1蛋白，增加患者对化疗药物的敏感性[10]。但也有一些结论不一致的报道[3,4,11]。Ruzzo等[4]检测了包括GSTP1和GSTM1在内的多个基因多态对接受5Fu/DDP姑息化疗晚期胃癌预后的影响，发现携带GSTP1 Ile/Ile基因型患者具有更低的应答率、更短的无进展生存期和总生存期，而GSTM1多态与预后无关。另一项研究[5]也得到类似的结论。本文研究结果显示，携带GSTP1 Ile/Val、Val/Val基因型的胃癌患者具有更高的无复发生存率和总生存率。COX多因素回归分析显示，GSTP1 Ile105Val多态是预测胃癌病人接受铂类药物辅助化疗后复发的预测因子，携带GSTP1 Ile/Ile基因型患者具有更短的，其复发的相对风险是携带GSTP1Ile/Val和Val/Val基因型患者的2.149倍(P<0.05)；而GSTP1多态与总生存无显著相关性，其P值为0.074，略高于临界值0.05。考虑到本研究病例数较少、随访时间较短（约一半患者尚未死亡），因此要全面理解GSTP1多态对接受铂类药物化疗胃癌患者预后的影响，仍需进一步扩大样本量，延长随访时间。本研究未发现GSTM1基因多态与胃癌患者的预后有相关性，这与Ruzzo等[4]的结果一致。

    总之，我们的初步研究结果表明，GSTP1 Ile105/Val多态与胃癌患者对铂类药物辅助化疗后的预后有关，有可能作为预测铂类药物对胃癌辅助化疗效果的指标，用于指导该类药物的个体化使用，以提高临床治疗的针对性和可预见性。

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[5] Goekkurt E, Hoehn S, Wolschke C, et al. Polymorphisms of glutathione Stransferases (GST) and thymidylate synthase (TS)novel predictors for response and survival in gastric cancer patients [J]. Br J Cancer, 2006, 94(2):281286.

[6] Goldstein DB, Tate SK, Sisodiya SM. Pharmacogenetics goes genomic [J]. Nat Rev Genet, 2003, 4(12):937947.

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[8] Stoehlmacher J, Park DJ, Zhang W, et al. Association between glutathione Stransferase P1, T1, and M1 genetic polymorphism and survival of patients with metastatic colorectal cancer [J]. J Natl Cancer Inst, 2002, 94(12): 936942.

[9] Stoehlmacher J, Park DJ, Zhang W, et al. A multivariate analysis of genomic polymorphisms: prediction of clinical outcome to 5FU/oxaliplatin combination chemotherapy in refractory colorectal cancer [J].Br J Cancer, 2004, 91(2): 344354.

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